人缺失型Midkine重组蛋白的原核表达及活性鉴定

目的构建人缺失型Midkine(tMK)的原核表达载体,以得到具有生物学活性的重组蛋白.方法从测序正确的pMD18-T-tmk Vector 重组质粒上切下tmk序列,重组至pET30(a+)载体中,转化BL21(DE3), IPTG诱导蛋白表达,Heparin Sepharose 4B纯化蛋白,CCK -8检测其促NIH3T3和BGC823细胞增殖的活性.结果成功构建了tMK的原核表达载体,纯化得到重组tMK蛋白.该蛋白在0.03125~0.5 mg/L范围时能明显促进NIH3T3细胞增殖(P<0.05或P<0.01),在0.0625~2 mg/L范围时能明显促进BGC823细胞增殖(P<0.05).结论获得了具有生物学活性的重组tMK蛋白.     

病理学案例教学模式的探索

为了提高病理学教学质量,激发学生的学习热情,提高学生综合分析的能力,本文探讨了案例教学在病理教学中运用的必要性和案例教学的应用原则,及教师在病理学案例教学中发挥的重要作用。     

荧光定量PCR检测石蜡组织中结核杆菌的临床应用

目的探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测石蜡包埋组织结核分枝杆菌DNA（TB—DNA）在结核病诊断中的应用价值。方法33例石蜡包埋组织标本采用FQ—PCR技术检测TB—DNA,同时进行组织病理学检查,分别计算FQ—PCR和病理学检查的灵敏度和准确度。结果29例临床诊断为结核病的组织标本中,FQ—PCR检测阳性26例,病理学拟诊为结核阳性20例,4例临床诊断非结核病的标本中,FQ—PCR检测和病理学检查都为阴性,两者的灵敏度和准确度分别为89．66％、90．91％和68．97％、72．73％。结论FQ—PCR技术检测石蜡包埋组织的TB—DNA用于结核病的诊断具有较高的灵敏度和准确度,与病理学检查相结合可以大大提高结核病的检出率。     

HIF-1α在RAD001联合DDP下调胃癌SGC7901/DDP细胞株VEGF分泌中的作用

目的 研究缺氧诱导因子（HIF-1α）在mTOR特异性抑制剂RAD001联合DDP下调胃癌细胞株SGC7901/DDP VEGF表达中的作用,并探讨其相关作用机制.方法 体外培养胃癌SGC7901/DDP细胞株,分别给予RAD001、DDP及RAD001＋DDP干预48 h后,免疫细胞化学染色及Western-blot法检测HIF-1α、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达情况,RT-PCR法检测HIF-1α mRNA、VEGF mRNA的合成情况.结果 RAD001单独作用于SGC7901/DDP细胞48 h后,HIF-1α、VEGF蛋白的表达和HIF-1α 、VEGF mRNA的合成下降,且呈剂量依赖性.联合用药组比单独用药组作用增强,差异有统计学意义（P〈0.05）.VEGF和HIF-1α蛋白呈正相关（r=0.993,P〈0.01）,HIF-1α mRNA和VEGF mRNA呈正相关（r=0.994,P〈0.01）.结论 RAD001能够抑制细胞体外VEGF、HIF-1α的蛋白表达及mRNA的合成,RAD001联合DDP作用后,效果增强,其机制可能与mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路有关.     

中药复方消可宁颗粒剂增加糖尿病大鼠微动脉抗氧化应激作用

目的探讨消可宁颗粒剂对糖尿病大鼠微动脉氧化损伤的保护作用及机制。方法采用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型。糖尿病造模成功后21天,处死大鼠,无菌条件下取出肠系膜微动脉进行离体灌注,血管内分别给予1、3和5 g/L消可宁溶液,在培养箱中培养24、48、72 h后,用比色法检测各组肠系膜微动脉中超氧化物岐化酶（superoxide dismutase,SOD）、黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase,XOD）的活性。用Western blotting方法检测肠系膜微动脉中锰超氧化物歧化酶（Mn-superoxide dismutase,Mn-SOD）含量。结果糖尿病组大鼠肠系膜微动脉SOD活性、Mn-SOD含量较正常对照组低（P〈0.05）,经过不同浓度消可宁处理后SOD活性、Mn-SOD含量逐渐恢复,随着消可宁浓度增高和作用时间延长SOD活性则恢复较明显,消可宁浓度为5 g/L。培养72 h时Mn-SOD含量与正常对照组之间的差异无统计学意义。糖尿病组大鼠肠系膜微动脉XOD活性较正常对照组高（P〈0.05）,经过不同浓度消可宁处理后XOD活性逐渐降低,随着消可宁浓度增高和作用时间延长则XOD活性降低较明显（P〈0.05）。结论糖尿病时微动脉发生氧化应激损伤,消可宁可以抵抗微动脉氧化应激损伤。其机制可能与消可宁可以有效地抑制糖尿病微动脉XOD活性,提高SOD活性和含量,减少氧自由基生成有关。     

PPARγ在胃癌的表达及曲格列酮对胃癌SGC7901细胞生长的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)在胃癌及癌前病变中的表达,研究PPARγ激动剂曲格列酮(troglitazone,TGZ)对人胃癌细胞SGC7901生长抑制作用及其作用机制.方法 免疫组织化学方法检测PPARγ在胃癌及癌前病变中的表达;体外培养SGC7901细胞给予TGZ干预,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、苏木精-伊红染色、免疫细胞化学方法、Western blot检测TGZ作用后SGC7901细胞生长情况、凋亡率及细胞周期的改变、细胞形态学变化、PPARγ表达情况.结果 ①免疫组化染色结果显示在轻度不典型增生、重度不典型增生及胃癌标本中PPARγ阳性表达率为15.15%(5/33)、66.67%(14/21)、71.43%(60/84),轻度不典型增生与重度不典型增生及胃癌组间有统计学差异(P＜0.05).②体外实验结果显示SGC7901细胞与不同浓度的TGZ共同培养,细胞的生长受到不同程度的抑制,TGZ 50 μmol/L组与对照组相比P＜0.05,同时其作用具有浓度及剂量依赖性,苏木精-伊红染色结果显示实验组肿瘤细胞的生长较阴性对照组逐渐稀疏,出现细胞体积变小、形态不规则、细胞皱缩、核固缩、胞浆空泡等形态学表现.免疫组织化学染色显示PPARγ在SGC7901细胞中有较高表达,50 μmol/L与阴性对照组及低浓度25μmol/L组相比P＜0.05,流式细胞仪检测结果显示TGZ 25 μmol/L组起作用72 h后,细胞凋亡率明显升高,处于G0/G1与S期的细胞比例与阴性对照组相比,具有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示 TGZ作用72 h后与阴性对照组相比,高浓度50 μmol/L组PPARγ表达增加(P＜0.01).结论 应用TGZ可以将SGC7901细胞阻滞于G0/G1期,进而抑制其增殖.     

朗格汉斯组织细胞增生症20例临床及病理分析

目的探讨朗格汉斯组织细胞增生症（LCH）的临床特点、病理诊断及鉴别诊断。方法对20例LCH患者的临床资料及病理切片进行分析。结果20例患者病理切片中朗格汉斯组织细胞多少不等,8例朗格汉斯组织细胞有明显的核沟,13例患者切片中有大量嗜酸性粒细胞浸润,7例散在嗜酸性粒细胞浸润,20例病理切片免疫组织化学检测S-100和CD1a均阳性。结论LCH临床相对少见,临床表现无特殊性,易与其他疾病相混淆,诊断主要须手术后进行病理检查方可明确。     

SKI-Ⅱ增敏顺铂对SGC7901/DDP细胞周期的阻滞作用研究

目的 探讨神经鞘鞍醇激酶1(Sphk1)抑制剂SKI-Ⅱ增敏顺铂(DDP)对SGC7901/DDP细胞周期的阻滞作用,并探讨其可能作用机制.方法 将人胃腺癌耐DDP细胞株SGC7901/DDP进行体外培养后,分对照组、DDP组(DDP 2.50 mg/L)、SKI-Ⅱa组(SKI-Ⅱ 1.25 μmoL/L)、SKI-Ⅱb组(SKI-Ⅱ 10.00 μmoL/L)、SKI-Ⅱc组(SKI-Ⅱ 1.25 μmoL/L+ DDP 2.50 mg/L)、SKI-Ⅱd组(SKI-Ⅱ 10.00μmoL/L+ DDP 2.50 mg/L)进行实验.采用MTT、流式细胞技术检测各组细胞生长、周期阻滞情况；免疫组化染色、Western blot法检测细胞Sphk1、P-gp、p27蛋白表达；并分析Sphk1与P-gp、p27蛋白的相关性.结果 DDP组、SKI-Ⅱa组对细胞生长、细胞周期无影响；与对照组比较,SKI-Ⅱc组可抑制细胞生长,使停滞于G0/G1的细胞增加、S期细胞降低(P＜0.05).与对照组比较,DDP组的Sphk1、P-gp、p27蛋白阳性表达率无统计学差异,SKI-Ⅱa组p27蛋白阳性表达率升高(P＜0.05).Pearson相关分析显示,Sphk1与P-gp呈正相关(r=0.550,P＜0.01),与p27呈负相关(r=-0.663,P＜0.01).Western blot检测显示,DDP组未见明显改变,SKI-Ⅱb组、SKI-Ⅱd组的Sphk1、P-gp表达减弱,p27表达增强.结论 SKI-Ⅱ可通过抑制Sphk1蛋白下调P-gp蛋白、上调p27蛋白表达,增敏DDP对SGC7901/DDP细胞的周期阻滞作用.     

非小细胞肺癌组织中CD133和ALDH1的表达及其临床意义

目的 探讨肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSC)标记物CD133及乙酰脱氢酶1(aldehyde dehydrogenas1,ALDH1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测67例NSCLC组织中CD133和ALDH1蛋白的表达.结果 (1)CD133和ALDH1在32例NSCLC有淋巴结转移组阳性率均为78.13%,在35例NSCLC无淋巴结转移组的阳性率分别为48.57%和51.43%,差异均具有统计学意义(P均<0.05).与患者年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小、组织学类型及组织分化程度均无关(P均>0.05).(2)CD133和ALDH1蛋白阳性表达呈正相关(r=0.389,P<0.05),CD133与ALDH1共表达与NSCLC的淋巴结转移和组织分化程度密切相关(P均<0.05).结论肺癌干细胞标记物CD133和ALDH1可能在NSCLC的淋巴结转移及组织分化中发挥重要作用,尤其是二者共表达可能作为评估转移及进展的观测指标之一.