基于网络药理学方法的左金丸治疗结直肠癌的作用机制分析

目的：运用网络药理学方法探究左金丸治疗结直肠癌的潜在效应机制。方法：依托中药系统药理学分析平台收集左金丸中黄连和吴茱萸的化学成分和靶点信息,通过疾病基因库收集结直肠癌疾病基因,并通过维恩分析、蛋白互作分析以及Cytoscape的可视化功能,构建化合物-靶点网络、蛋白互作(PPI)网络和成分-靶点-通路网络,分析左金丸治疗结直肠癌的效应机制。结果:从左金丸化合物-靶点网络得到234种成分和482个核心靶点(其中活性成分36个,核心靶点72个),结直肠癌基因737个,PPI网络包含50个蛋白,其主要蛋白涉及PIK3CA、AKT1、TP53、HIF-1α、BAX和MYC等。基因GO本体条目283条,涉及核质、细胞凋亡、基因表达调控等方面, KEGG通路58条,主要涉及有癌症的途径、癌症中的蛋白多糖、结肠癌、膀胱癌、乙型肝炎,以及HIF-1信号通路、PI3K信号通路和FOXO信号通路等,其结果有待进一步的实验验证。结论：结合文献报道和预测分析,左金丸可能的作用机制与以下相关：①调节机体免疫耐受能力,增强宿主免疫抵抗,抑制炎症对肠粘膜的持续性刺激,进而阻止了细胞的异常增生;②通过上调抑癌基因,下调癌症相关因子,促进肿瘤细胞发生凋亡;③降低肿瘤细胞的耐受缺氧环境,促进细胞细胞发生凋亡及上皮间质的转移。     

大学生不同情感状态的脉图分析

目的：探讨不同情感状态下脉图的变化。方法：基于中医情志脉象理论,以大学生脉图为研究对象,通过素材（影片）诱导的方式,激发大学生的不同情感表达,采集大学生平静、悲伤、高兴三种不同情感状态下的脉图,提取大学生三组不同情感状态下脉图的时域参数,运用非参数检验的方法统计三组时域参数的差异;基于时域参数,运用支持向量机分类器对三种不同情感状态进行分类识别。结果：发现三组脉图的时域参数：h3/h1、t、As/(As+Ad)存在显著差异,基于脉图时域参数对三种情感状态的平均识别率为74.25%。结论：脉图特征参数可为情感变化提供客观的参考依据,利用脉图这种生理信号来识别情感状态具有一定的实用价值和应用前景。     

猴耳环的研究进展

猴耳环作为传统中药药用历史悠久,其单方制剂猴耳环消炎胶囊、猴耳环消炎片、猴耳环消炎颗粒在临床上主要用于治疗上呼吸道感染、急性咽喉炎、急性扁桃体炎、急性胃肠炎等症。现代研究表明猴耳环主要含有黄酮类、苯丙素类、有机酚酸类、三萜和甾体类化合物,具有抗氧化、抗病毒、抑制T淋巴细胞增殖、抗炎、抗过敏等药理作用。通过对猴耳环的国内外研究文献进行查阅整理,对其化学成分、质量标准、药理作用和临床应用进行总结,以期对猴耳环的深入研究、开发利用提供有益的参考借鉴。     

黄芪总苷上调miRNA-744表达抑制肝星状细胞活化的效应机制

目的:探析黄芪总苷抑制肝星状细胞活化的作用机制。方法:(1)以转化生长因子β_1(TGF-β_1,2.5 ng/ml)诱导人肝星状细胞株LX-2细胞活化,并给予不同浓度黄芪总苷(1.25、2.5、5、10、20、30、40μg/ml)。药物作用24 h后,Edu掺入法检测细胞增殖,筛选适合的药物浓度。(2)将LX-2细胞分为对照组、TGF-β_1(2.5 ng/ml)组、TGF-β_1+黄芪总苷(20μg/ml)组、TGF-β_1+SB431542(10μmol/L)组。各组给予相应干预24 h后,PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、TGF-β_1、miRNA-744基因表达;Western blot检测ColⅠ、TGF-β受体Ⅰ(TβRⅠ)、Smad2、p-Smad2、Smad7的蛋白表达;免疫荧光检测纤维状肌动蛋白(F-actin)表达。(3)取细胞分别加入miRNA-744激动剂(50 nmol/L)、miRNA-744拮抗剂(100 nmol/L)或阴性对照试剂,构建相应的转染细胞。在3种体系的转染细胞,将细胞分为对照组、TGF-β_1(2.5 ng/ml)组、TGF-β_1+黄芪总苷(20μg/ml)组、黄芪总苷(20μg/ml)组。各组给予相应干预24 h后,Edu掺入法检测细胞增殖,免疫荧光检测F-actin表达。结果:(1)20、30和40μg/ml黄芪总苷可显著抑制TGF-β_1诱导的LX-2细胞增殖,选用20μg/ml的剂量进行后续实验。(2)TGF-β_1组细胞F-actin、α-SMA、ColⅠ、TGF-β_1和TβRⅠ的表达以及p-Smad2/Smad2蛋白表达比值较对照组显著升高(P0.05,P0.01);而与TGF-β_1组相比,TGF-β_1+黄芪总苷组细胞F-actin、α-SMA、ColⅠ、TGF-β_1和TβRⅠ的表达以及p-Smad2/Smad2蛋白表达比值显著降低(P0.05,P0.01)。TGF-β_1组细胞Smad7和miRNA-744的表达较对照组显著降低(P0.05,P0.01),而TGF-β_1+黄芪总苷组细胞Smad7和miRNA-744的表达较TGF-β_1组显著升高(P0.01)。(3)与阴性对照组相比,miRNA-744拮抗剂作用可显著升高LX-2细胞的Edu阳性染色细胞占比和F-actin表达(P0.05),且对TGF-β_1诱导的LX-2细胞具有相似效应。在miRNA-744拮抗剂构建的转染细胞,给予黄芪总苷协同干预后,Edu阳性染色细胞占比和F-actin表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论:黄芪总苷通过上调miRNA-744表达,抑制TGF-β/Smad信号通路,进而抑制肝星状细胞活化。     

慢性乙型病毒性肝炎肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者尿液中microRNAs的表达研究

目的研究慢性乙型病毒性肝炎(慢乙肝)肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者尿液中microRNAs(miRNAs)的表达差异,探索不同证候的特征性miRNAs,为慢乙肝辨证分型提供生物学标志物和客观化依据。方法收集慢乙肝肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者(各53例)及健康者(24例)的尿液标本,采用miRNAs表达谱芯片技术检测miRNAs表达谱,分析差异表达的miRNAs;采用实时定量RT-PCR(RT-qPCR)技术检测慢乙肝肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者尿液中部分差异表达的miRNAs相对表达量;进行miRNAs潜在靶基因的预测、GO和pathway分析。结果①miRNAs表达谱芯片检测结果显示,与肝郁脾虚证比较,慢乙肝肝胆湿热证患者有21条miRNAs呈高表达,1条miRNA呈低表达(差异倍数1.5,P0.05)。②RT-qPCR结果显示,与肝郁脾虚证比较,慢乙肝肝胆湿热证患者尿液中miR-483-3p和miR-4700-3p呈显著高表达(P0.05),miR-4745-5p呈显著低表达(P0.05);与健康者比较,慢乙肝肝胆湿热、肝郁脾虚证患者尿液中miR-483-3p呈低表达(P0.05)、miR-4745-5p呈高表达(P0.05),慢乙肝肝郁脾虚证患者尿液中miR-4700-3p呈低表达(P0.05)。③miR-483-3p、miR-4700-3p和miR-4745-5p的联合ROC曲线AUC为0.810 6,对于鉴别肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者具有一定的诊断价值。④生物信息学方法显示,证候差异表达miRNAs所调控的潜在靶基因,GO大都与生物学调控、代谢过程、多细胞有机体的发展、应激反应和细胞增殖等相关,pathway大都与翻译后蛋白质修饰、TGF-β信号通路、TGF-β家庭成员的信号、TGF-β受体复合物的信号传导等通路有关。结论慢乙肝肝胆湿热、肝郁脾虚证患者尿液中存在差异表达的miRNAs,miR-483-3p、miR-4700-3p和miR-4745-5p或许为慢乙肝肝胆湿热、肝郁脾虚证的潜在标志性分子,这些miRNAs可能分别通过调控其相应的靶基因而影响证候的发生发展。     

线粒体损伤介导的药源性脏器损伤评价模型研究进展

线粒体是细胞的能量工厂,同时线粒体还参与细胞分化、维持细胞内环境平衡、细胞信息传递和调节细胞凋亡等过程。线粒体受到核DNA和线粒体DNA的双重调控,使得线粒体对于各种外源及内源性毒性物质更加敏感。药物破坏线粒体结构与功能可导致细胞坏死或凋亡。近年来研究发现多种脏器细胞线粒体是药物毒性作用的主要靶标之一,药物可通过多种途径致线粒体毒性,线粒体损伤是许多药物器官毒性反应早期的重要特征。本文主要综述常见的诱导不同器官线粒体毒性的临床药物并简要探讨药物介导线粒体毒性的机制。此外,我们还将重点讨论目前常用的线粒体毒性评价模型和评价技术,以期为预防和诊断药源性器官损伤提供思路。     

黑果枸杞化学成分和药理活性的研究进展

黑果枸杞Lycium ruthenicum是我国西北荒漠地区特有的一种具有良好保健功效的药食两用植物。现代植物化学研究发现黑果枸杞的果实中不仅含有花色苷、黄酮、生物碱、多糖等多种活性成分，还富含脂肪酸、氨基酸等多种营养物质和锰、硒、锌等微量元素。现代药理学研究表明黑果枸杞及其化学成分具有抗氧化、抗疲劳、降血糖、降血脂、保护心血管、保肝、调节免疫等多种药理活性。主要对近年来黑果枸杞的化学成分和药理活性的研究进展进行了系统综述，旨在为黑果枸杞药理活性的深入研究及相关产品的开发应用提供关键信息和参考。     

竞争性内源RNA调控在肝癌发生发展中的作用及中药干预相关研究现状

阐述竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)调控在肝癌发生发展中的作用机制,并探讨中药治疗肝癌与ceRNA调控作用的关系。ceRNA的调控以miRNA为核心,在miRNA反应元件(miRNA response element, MRE)的作用下,mRNA、假基因转录本、lncRNA、circRNA等竞争性地与miRNA结合,构成ceRNA调控网络。ceRNA的调控模式在肿瘤的发生发展、转移侵袭等过程中都发挥着重要的作用。目前有关ceRNA调控肝癌机制的研究还在探索阶段,其可提高靶向预测的准确性,有效筛选潜在治疗靶点和预后生物标志物。ceRNA调控机制也是中药治疗肝癌的重要调控方式,中药有效成分干预在肿瘤治疗方面有着非常广阔的前景,而基于ceRNA调控的中医药抗肿瘤机制研究也为肿瘤的诊断和治疗提供了新的研究方向。     

miR-200c 通过靶向细胞能量代谢和多种信号通路调控三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的恶性生物学行为

目的：考察miR-200c对三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）细胞MDA-MB-231的增殖、凋亡和迁移的影响及其代谢相关的分子机制。方法：以过表达miR-200c的MDA-MB-231（miR-200c-231）细胞、无过表达miR-200c的阴性对照细胞miR-NC-231及其移植瘤裸鼠模型为研究对象，qPCR检测细胞和移植瘤组织中miR-200c及其他相关基因的表达水平，免疫组化技术分析瘤组织中Ki67阳性细胞数量，Transwell小室法检测细胞的迁移能力，流式细胞术检测细胞的凋亡率，Western blotting检测细胞及组织中增殖、迁移和代谢相关信号通路多种蛋白的表达，Seahorse能量代谢检测仪检测细胞的基础耗氧率（oxygen comsumpition rate，OCR）、细胞外酸度（extracellular acidification rate，ECAR）和代谢表型变化，液相质谱联用技术检测细胞中代谢产物的变化。结果：miR-200c-231细胞及其移植瘤组织中 miR-200c 表达较 miR-NC-231细胞显著增加（P<0.05或P<0.01），miR-200c-231移植瘤质量和体积均显著下降、瘤组织中Ki67阳性细胞数明显减少（P<0.01），miR-200c-231细胞的迁移能力下降、细胞凋亡率提高（均P<0.01）。同时伴随着ZEB1/2、Vimentin、cyclinD1的表达下调及cleaved PARP表达的提高（P<0.05或P<0.01），STAT1/3和NF-κB的磷酸化水平降低（均P<0.05）而cAMP通路蛋白的磷酸化水平提高（P<0.05）。miR-200c-231细胞的OCR提高和ECAR降低、色氨酸2，3-加二氧酶（tryptophan-2,3-dioxygenase 2，TDO2）表达下降（P<0.05或P<0.01），细胞内10种抗肿瘤代谢物质含量提高（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-200c靶向TDO2调控TNBC细胞MDA-MB-231胞内抗肿瘤代谢产物水平、促使细胞代谢类型由依赖糖酵解为主向有氧呼吸类型转化，并失活STAT3和NF-κB通路而激活cAMP通路，从而影响MDA-MB-231细胞的恶性生物学行为。