miR-202-5p通过下调NFATc3的表达抑制口腔鳞状细胞癌细胞的生长、迁移和侵袭

目的：探讨miR-202-5p对口腔鳞状细胞癌（oral squamous carcinoma，OSCC）细胞生长、集落形成、迁移和侵袭的影响及其可能的机制。方法：通过qPCR法检测OSCC细胞系（Tca8113和SCC-4）和口腔角质细胞HOK中miR-202-5p和T细胞核因子c3（nuclear factor of activated T-cells isoform c3，NFATc3）mRNA的表达水平；将miR-202-5p mimic或/和NFATc3过表达质粒转染入Tca8113和SCC-4细胞，用MTT和集落形成实验检测转染对细胞增殖的影响，划痕伤口愈合实验和Transwell实验检测转染对细胞迁移和侵袭的影响，用Western blotting实验检测转染对NFATc3蛋白表达的影响；通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-202-5p 对候选靶基因 NFATc3 的直接调控作用。结果：与正 常 口 腔 角 质 细 胞 HOK 相 比 ，miR-202-5p 在 OSCC 细胞Tca8113和SCC-4中呈低表达（均P<0.01），NFATc3 mRNA和蛋白质表达显著升高（P<0.01）。在Tca8113细胞和SCC-4细胞中，过表达miR-202-5p可显著抑制细胞生长、集落形成、迁移、侵袭以及细胞中NFATc3表达（均P<0.01）。NFATc3被证实是miR-202-5p的靶基因，过表达NFATc3能逆转miR-202-5p对OSCC细胞生长、迁移和侵袭的抑制作用。结论：miR-202-5p通过下调NFATc3表达发挥其肿瘤抑制功能，导致OSCC细胞的生长、迁移和侵袭受到抑制。     

温阳补肾法对高原类风湿关节炎患者血清25羟维生素D3水平的影响

目的:观察温阳补肾法对高原类风湿关节炎患者血清25羟维生素D3水平的影响。方法:选取2015年7月至2017年8月青海省中医院收治的高原类风湿关节炎患者132例作为研究对象,随机分为对照组和观察组,每组66例。对照组应用常规西医治疗,观察组在对照组治疗基础上应用温阳补肾法治疗,2组均连续治疗3个月。比较2组治疗后临床疗效,统计2组治疗前后主要临床症状与体征、健康状况评定量表(HAQ)评分和DAS28评分,检测2组治疗前后实验室检查指标、血清25羟维生素D3以及血液流变学指标水平。结果:治疗后,观察组临床治疗总有效率显著高于对照组(P 0. 05); 2组关节肿胀指数、关节疼痛指数、关节压痛指数、晨僵时间、关节功能分级和20 m步行时间均较治疗前显著降低(P 0. 05),且观察组均显著低于对照组(P 0. 05); 2组HAQ评分、DAS28评分、类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)和红细胞沉降率(ESR)水平均较治疗前显著降低(P 0. 05),且观察组均显著低于对照组(P 0. 05); 2组血清25羟维生素D3水平均较治疗前显著升高(P 0. 05),且观察组显著高于对照组(P 0. 05); 2组红细胞电泳指数、红细胞压积、血浆黏度、全血低切黏度、全血高切黏度水平均较治疗前显著降低(P 0. 05),且观察组均显著低于对照组(P 0. 05)。结论:温阳补肾法治疗高原类风湿关节炎,疗效满意,同时能明显增加血清25羟维生素D3水平。     

萆苓祛痛方对糖尿病痛风大鼠骨骼肌组织SIRT3蛋白表达及URAT1 mRNA的影响

目的:探讨萆苓祛痛方对糖尿病痛风大鼠骨骼肌组织去乙酰化酶3(SIRT3)蛋白表达及尿酸盐转运体1(URAT1) mRNA的影响。方法:选择健康雄性大鼠40只,除正常组外,其余组予高脂饲料喂养并联合小剂量链脲佐菌素(STZ)溶液40 mg·kg-1腹腔注射1次,以血糖≥16. 7 mmol·L-1,为糖尿病模型。4 d后关节腔注射5%尿酸钠溶液1次,诱导痛风模型,模型成功后,分为萆苓祛痛方组(萆苓组,10 g·kg-1),吲哚美辛组(5 mg·kg-1),吡格列酮组(10 mg·kg-1),均连续给药21 d,正常组、模型组予等量生理盐水;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定骨骼肌组织SIRT3蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测骨骼肌组织URAT1 mRNA表达,并进行病理检查,取血测定血糖(GLU),血尿酸(UA)及C反应蛋白(CRP)含量。结果:与正常组比较,模型组GLU,UA及CRP明显升高(P 0. 01);与模型组比较,萆苓组、吡格列酮组血糖下降(P 0. 05);各药物组UA及CRP明显下降(P 0. 01)。与正常组比较,模型组骨骼肌SIRT3蛋白表达量显著降低(P 0. 01);与模型组比较,萆苓组骨骼肌SIRT3蛋白表达量显著提高(P 0. 01),与西药组比较无明显差异;条带图的结果同样显示,与正常组比较,模型组表达亮度明显减弱,药物组表达亮度明显增强;与正常组比较,模型组关节组织URAT1 mRNA相对表达量明显升高(P 0. 01);与模型组比较,各药物组URAT1 mRNA相对表达量显著下调(P 0. 01)。电泳图同样提示,正常组表达亮度减弱,模型组表达亮度显著增强,萆苓组、西药组表达亮度明显减弱。关节病理提示,与正常组比较,模型组大鼠关节病理损伤严重,可见大量炎细胞浸润及纤维增生,滑膜细胞变性、坏死。与模型组比较,萆苓祛痛方关节病变程度明显减低,见少量炎细胞浸润,滑膜上皮轻度增生。结论:具有泻浊解毒通络作用的萆苓祛痛方可显著提高糖尿病痛风大鼠骨骼肌组织SIRT3的蛋白表达量,下调URAT1 mRNA的表达量,减轻骨骼肌组织病理损伤,减低血清炎症因子CRP的含量,降低模型大鼠的血糖、血尿酸水平,有保护关节功能的作用。     

补肾助孕方对肾虚薄型子宫内膜大鼠内膜容受性的影响及机制研究

目的：观察补肾助孕方对肾虚薄型大鼠子宫内膜容受性的影响,探讨中药的作用机制。方法：雌性SD大鼠30只,随机分为对照组10只,造模组20只,通过羟基脲灌胃建立肾虚合并着床障碍型子宫内膜大鼠模型。随后将20只造模组大鼠随机分为模型组和补肾助孕方组,每组10只。对照组、模型组均灌服蒸馏水10 mL/kg;补肾助孕方组灌服中药0.3 mg/kg,均1次/d,持续3个动情周期(15 d)。在第3个动情期后处死大鼠,酶联免疫吸附法检测动脉血中雌二醇、孕酮的水平。取子宫标本,光镜下观察子宫内膜形态,测量子宫内膜厚度、子宫间质厚度、子宫腺体数、子宫血管数。免疫组化法检测各组内膜组织中整合素β3和白血病抑制因子的表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠动脉血雌二醇、孕酮的水平减少;子宫内膜腺体稀少,上皮变薄,间质致密,血管少;子宫内膜厚度、子宫间质厚度、子宫腺体数、子宫血管数均减少;整合素β3和白血病抑制因子的表达减少。补肾助孕方组较之模型组,有明显的改善。结论：补肾助孕方可改善肾虚合并着床障碍型状态大鼠子宫内膜的容受性,可能与提高血中激素水平,增加内膜中整合素aβ3和白血病抑制因子的表达有关。     

健脾祛湿散结消肿汤联合石氏伤科推拿疗法治疗痰湿阻络型膝关节骨性关节炎60例

目的:观察健脾祛湿散结消肿汤联合石氏伤科推拿疗法治疗痰湿阻络型膝关节骨性关节炎的临床疗效。方法:将120例膝关节骨性关节炎患者按照随机数字表法分为观察组和对照组,每组各60例。对照组给予关节腔内注射玻璃酸钠进行治疗,观察组在对照组基础上给予健脾祛湿散结消肿汤联合石氏伤科推拿治疗。比较两组患者的临床疗效及治疗前后临床症状积分、膝关节功能评分变化情况,检测两组患者治疗前后红细胞C3b受体花环率(erythrocyte C3b receptor rosette rate,E-C3bRR)及免疫复合物花环率(erythrocyte immune complex rosette rate,E-ICR)。结果:两组患者治疗后临床症状积分低于本组治疗前,且观察组治疗后低于对照组治疗后,差异具有统计学意义(P0.05)。观察组有效率为96.67%,对照组有效率为76.67%,两组患者有效率比较,差异具有统计学意义(P0.05)。两组患者治疗后膝关节功能疼痛、功能、活动度、屈曲畸形、肌力、稳定性及总分高于本组治疗前,且观察组治疗后高于对照组治疗后,差异具有统计学意义(P0.05)。两组患者治疗后E-C3bRR高于本组治疗前,E-ICR低于本组治疗前,且观察组E-C3bRR高于对照组,E-ICR低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:健脾祛湿散结消肿汤联合石氏伤科推拿可改善痰湿阻络型膝关节骨性关节炎患者的临床症状,其作用机制可能与提高E-C3bRR水平、降低E-ICR水平,改善机体免疫反应有关。     

基于网络药理学和分子对接技术探讨生脉注射液抗新型冠状病毒肺炎的作用机制

目的采用网络药理学与分子对接技术探讨生脉注射液的活性成分和治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的潜在作用机制。方法利用TCMSP及BATMAN-TCM数据库筛选生脉注射液的活性化合物,通过TCMSP及Targetnet在线数据库预测作用靶点,通过Cytoscape3.7.1构建活性成分-作用靶点网络图;在GeneCards及OMIM数据库中以"coronavirus pneumonia"为关键词搜索冠状病毒肺炎相关疾病靶点,与生脉注射液化合物靶点进行交集筛选出共同靶点作为研究靶点,将共同靶点导入STRING数据库获取数据后在Cytoscape 3.7.1软件中构建蛋白质-蛋白质相互作用网络图;利用R语言进行GO(gene ontology)功能、KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路富集分析,预测其作用机制,并构建"成分-靶点-通路"网络图;通过DiscoveryStudio 2.5软件对关键靶点进行分子对接分析。结果生脉注射液筛选得到22个活性化合物,分别为邻苯二甲酸二辛酯、β-谷甾醇、当归酰基戈米辛O、戈米辛A、戈米辛R、五味子丙素、内南五味子酯乙、长南酸、南五味子内酯、香蒲木脂素B、新杜松烷酸A、新杜松烷酸B、新杜松烷酸C、新南五味子木脂宁、五味子内酯A、五味子内酯E、五味子酸、尿苷、薯蓣皂苷元、鸟嘌呤核苷、N-反式阿魏酰酪胺、豆甾醇。相应作用靶点224个,与COVID-19的共同靶点16个,分别为CASP3、CASP8、PTGS2、BCL2、BAX、PRKCA、PTGS1、PIK3CG、F10、NOS3、DPP4、NOS2、TLR9、ACE、ICAM1、PRKCE,关键靶点涉及CASP3、PTGS2、NOS2、NOS3、ICAM1。GO功能富集分析得到生物过程(BP)条目771个,细胞组成(CC)条目11个,分子功能(MF)条目79个。KEGG通路富集分析筛选得到67条(P0.05)信号通路,主要涉及糖尿病并发症AGE-RAGE信号通路、凋亡通路、P53信号通路、小细胞肺癌通路等。分子对接结果显示与关键靶点对接较好的成分有五味子内酯E、豆甾醇、N-反式阿魏酰酪胺。结论生脉注射液中的活性化合物五味子内酯E、豆甾醇、N-反式阿魏酰酪胺等能作用于CASP3、PTGS2、NOS2、NOS3等靶点调节多条信号通路发挥抗炎、免疫调节、抗休克、增加血氧饱和度等作用,从而可能发挥对COVID-19的治疗作用。     

维生素D联合糠酸莫米松乳膏治疗婴幼儿中重度湿疹的临床分析

目的:分析维生素D联合糠酸莫米松乳膏治疗婴幼儿中重度湿疹的临床疗效并探究维生素D对患儿免疫功能的影响。方法:104例中重度湿疹婴幼儿随机分为对照组和治疗组各52例,对照组用0.1%糠酸莫米松乳膏治疗,治疗组在对照组基础上予维生素D制剂阿法骨化醇滴剂治疗。分析治疗后2组患儿治疗总有效率,同时检测患儿治疗前及治疗4周后血清25-(OH)D3、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL-2)、IL-4、IL-13水平。结果:治疗组总有效率为92.31%,优于对照组(76.92%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后血清IFN-γ、IL-2水平较治疗前上升,并明显高于对照组,血清IL-4、IL-13水平较治疗前下降,并明显低于对照组(P<0.05)。结论:维生素D能调节中重度湿疹婴幼儿免疫功能,因此维生素D联合糠酸莫米松乳膏能提高中重度湿疹婴幼儿治疗疗效,值得在临床上应用。     

脑梗死患者血清五聚素3、甲壳质酶蛋白40和白细胞分化抗原36表达及检测临床意义

目的:探讨脑梗死患者血清中五聚素3(PTX-3)、甲壳质酶蛋白40(YKL-40)和白细胞分化抗原36(CD_(36))的表达特征,分析其临床意义及相关性,以期为临床工作提供支持。方法:收集97例急性脑梗死患者作为观察组,留取空腹血清,收集无明显器质性病变的成人血清标本32例作为对照组。应用酶联免疫吸附实验检测两组中PTX-3、YKL-40和CD_(36)的表达量,并进行统计学分析。结果:两组血清中PTX-3、YKL-40和CD_(36)的表达差别有统计学意义,观察组血清中PTX-3、YKL-40和CD_(36)的表达与梗死体积、病变严重程度及是否伴有高血压病密切相关,线性相关分析显示观察组中PTX-3和YKL-40的表达呈正相关性,其它指标间均未见明显相关性。结论:急性脑梗死患者血清中PTX-3、YKL-40和CD_(36)高表达,与病变的严重程度有关,也与患者是否伴有高血压有关,PTX-3和YKL-40具有协同正向作用。