基于CX3CL1-CX3CR1轴探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠的神经保护作用及机制北大核心CSCD

基于CX3C趋化因子配体1(CX3C chemokine ligand 1,CX3CL1)-CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)轴,探讨左归降糖解郁方改善糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus complicated with depression,DD)模型大鼠神经炎症及增强神经保护作用的相关机制。通过4周高脂饲料饲养联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射及5周慢性温和不可预知应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)联合孤笼饲养建立DD大鼠模型,实验分为对照组、模型组、阳性药组、抑制剂组、中药组。旷场实验和强迫游泳实验评估大鼠抑郁情况,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,免疫荧光检测海马离子钙结合衔接分子1(ionized calcium-binding adapter molecule 1,Iba1)、突触后致密蛋白-95(postsynaptic density protein-95,PSD95)、突触蛋白-1(synapsin-1,SYN1),苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、尼氏(Nissl)染色和原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)荧光染色检测海马神经元损伤情况,免疫印迹法(Western blot)检测CX3CL1-CX3CR1轴相关蛋白CX3CL1、CX3CR1、腺苷A2A受体(A2A adenosine receptor,A2AR)、谷氨酸受体2A(glutamate receptor 2A,NR2A)、谷氨酸受体2B(glutamate receptor 2B,NR2B)和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达情况。与模型组比较,左归降糖解郁方可以改善DD大鼠抑郁行为,增强神经保护作用;显著升高PSD95、SYN1、BDNF表达(P<0.01),降低Iba1、IL-1β和TNF-α表达(P<0.01)以及CX3CL1、CX3CR1、A2AR、NR2A和NR2B表达(P<0.01)。结果表明,左归降糖解郁方可能通过抑制CX3CL1-CX3CR1轴和海马小胶质细胞(microglia,MG)激活,进一步改善神经炎症与N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDA)亚基异常活化,从而提高海马中突触相关蛋白PSD95、SYN1和BDNF的表达来发挥神经保护作用。     

清热祛湿化痹方联合甲氨蝶呤片对类风湿关节炎疗效的影响

目的：观察清热祛湿化痹方联合甲氨蝶呤片治疗类风湿关节炎的疗效及对炎症因子、分形趋化因子、氧化应激指标的影响。方法：选择郑州大学附属郑州中心医院中医科就诊的类风湿关节炎患者126例,按1∶1的比例分为两组。对照组63例给予甲氨蝶呤片,7.5 mg/次,1次/周。治疗组63例在对照组治疗基础上给予清热祛湿化痹方(萆薢、薏苡仁、秦艽、木瓜、当归、白术、牡丹皮、土茯苓、泽泻、牛膝、莪术),1剂/d,每剂煎取药液400 mL,200 mL/次,2次/d。两组均治疗8周判定疗效。结果：治疗组治疗8周、随访6个月及随访12个月的疗效均优于对照组(P<0.01)。在改善临床症状(晨僵时间、关节压痛、关节肿胀、双手平均握力)、血清炎症因子[抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)、 C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、红细胞沉降率(ESR)]、分形趋化因子[破骨细胞分化因子(RNAKL)、髓样分化因子88(MyD88)、CX3趋化因子配体1(CX3CL1)、CXC趋化因子配体16(CXCL16)]、氧化应激指标[3-硝基酪氨酸(3-NT)、超氧化物歧化酶(SOD)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、总抗氧...     

AMD3100下调CA9与CXCR4表达逆转索拉菲尼耐药

目的 研究AMD3100通过调控碳酸酐酶Ⅸ(CA9)和趋化因子受体4(CXCR4)逆转人肝癌细胞对索拉菲尼的耐药性机制。方法 以人肝癌细胞Huh7和HepG2为研究对象,建立索拉菲尼耐药株Huh7/Sor和HepG2/Sor;检测索拉菲尼单独或联合使用AMD3100对Huh7、HepG2、Huh7/Sor、HepG2/Sor细胞增殖的影响;观察索拉菲尼耐药细胞与非耐药细胞侵袭能力的区别,AMD3100对肝癌细胞侵袭能力的影响;索拉菲尼单独或联合使用AMD3100对Huh7、HepG2、Huh7/Sor和HepG2/Sor细胞的CA9和CXCR4蛋白表达的调控作用。结果与对照组比较,AMD3100 (50μmol/L)可提高索拉菲尼对Huh7/Sor和HepG2/Sor细胞的增殖抑制作用(P <0.05);与Huh7细胞比较,索拉菲尼耐药株Huh7/Sor细胞的侵袭能力增强(P <0.05),AMD3100(50μmol/L)可降低Huh7和Huh7/Sor细胞的侵袭能力(P <0.05);与Huh7和HepG2细胞比较,Huh7/Sor和HepG2/Sor细胞的CA9...     

氧化低密度脂蛋白功能性调节人内皮细胞的生长调节致癌基因α

目的　探讨oxLDL对人内皮细胞的CXC亚家族趋化因子GROα的调节作用及生理意义。方法　超高速离心得LDL ,氧化后得oxLDL。逆转录PCR分析人内皮细胞系ECV30 4细胞GROαmRNA。GAPDH被用作PCR中正常改变的对照物。酶联免疫检测仪测定ECV30 4细胞表面连接及分泌到溶液中的GROα蛋白。静态细胞粘附试验测定ECV30 4细胞表面连接的GROα蛋白的生理意义。结果　正常ECV30 4细胞不表达GROαmRNA ;OxLDL显著调节其表达 ,诱导效应首先出现在处理后 1h ,最大在 2h ,在 4h时下降。相比较 ,LDL对其mRNA表达没有影响。正常ECV30 4细胞低水平表达细胞表面的GROα蛋白。OxLDL呈浓度依赖性、时间依赖性地上调其表面的GROα蛋白。相比较 ,LDL对其表面表达的GROα蛋白无调节作用。OxLDL对ECV30 4细胞分泌到细胞溶液中GROα蛋白很少有影响。 4 0 μg/mloxLDL处理ECV30 4细胞 2 4h ,造成显著的人单核细胞系U937细胞粘附到ECV30 4细胞数目的增加。用GROα抗体预处理oxLDL刺激的ECV30 4细胞 ,可显著减低U937细胞粘附到ECV30 4细胞的U937细胞数目 (大约 2 / 3)。结论　oxLDL可能功能性上调内皮细胞GROα的表达。     

趋化因子SDF-1β在大肠杆菌中的表达及其纯化

目的　重组人SDF 1 β在大肠杆菌中表达并获得纯化的有生物学活性的SDF 1 β蛋白。 方法　以pET32a( + ) SDF 1为人SDF 1 β克隆基因的表达载体 ,以大肠杆菌AD494(DE3)pLysS为表达菌 ,在IPTG诱导下表达出一个由 2 30个氨基酸残基组成的硫氧还蛋白 (thioredoxin) SDF 1 β的融合蛋白 ( 2 6× 1 0 3)。经细菌裂解、金属离子螯合亲和层析、肠激酶消化以游离SDF 1 β、阳离子交换层析和逆向高效液相层析等步骤纯化目的蛋白。以蛋白印迹、纯化产物的N端氨基酸测序及配体结合试验、微生理监测术鉴定纯化产物的生化性质及生物学活性。结果　在经诱导的发酵菌中融合蛋白占总菌体蛋白的 1 0 %～ 1 5 %。从 1L发酵菌液中可获得高纯度目的蛋白约 40 0 μg。蛋白印迹实验及N端氨基酸测序皆证实纯化终产物为SDF 1 β(由 71个氨基酸残基组成 ,7.8× 1 0 3)。配体结合试验及Cytosensor表明 ,该产物能与CXCR4结合 [Kd =( 1 2 .2 0± 2 .99)nmol L]并引起CXCR4表达细胞的信号传导。结论　采用本方法可获得高表达的 ,高纯度的具有与天然SDF 1 β相似活性的重组人SDF 1 β。     

银屑病患者红细胞趋化因子受体与外周血淋巴细胞获得性免疫的相关性研究

目的 探讨银屑病患者红细胞趋化因子受体(ECKR)与细胞及体液免疫功能的相互关系。方法 用IL-8作配体，分离一定量的红细胞与IL-8结合，离心后取上清波用ELISA法检测IL-8含量，反映红细胞上ECKR结合活性，并同时采用速率散射比浊法对血清中IgG、IgA、IgM含量进行测定，采用顾及从法测定血清可溶性白细胞介素—2受体(sIL—2R)水平。结果 银屑病总者ECKR结合活性明显降低(P＜0．01)，血清IgM含量明显增高(P＜0．01)，ECKR与sIL—2R相关不显著(r＝0．159，P＞0．05)，而与IgA呈显著正相关(r＝0．476，P＜0．05)。结论 红细胞主要通过ECKR在银屑病发病过程中参与细胞因子的调控，ECKR不是信号转导受体。     

川崎病患儿血清趋化因子检测及意义

为探讨血清趋化因子-单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和正常T细胞表达和分泌的活化调节蛋白(RANTES)水平与川崎病及其发生冠状动脉并发症的关系及意义,应用双抗体夹心ELISA法,检测36例健康体检儿童及52例川崎病患儿静脉注射丙种球蛋白(IVIG)治疗前后血清MCP-1、RANTES水平。结果显示,川崎病患儿急性期血清MCP-1、RANTES水平明显高于正常儿童(P<0.01);川崎病合并冠状动脉损伤(CAL)患儿急性期血清MCP-1水平明显高于无冠状动脉损伤者(P<0.01);静脉注射丙种球蛋白治疗可明显降低川崎病患儿血清MCP-1、RANTES水平(P<0.01)。提示趋化因子MCP-1、RANTES可能参与川崎病的免疫发病机制,急性期血清MCP-1水平可作为判断川崎病冠状动脉损伤的一个指标;降低趋化因子水平是IVIG治疗川崎病的可能机制。     

牛蒡子提取物减轻糖尿病大鼠肾脏病变的机理研究

导师陈以平教授在继承传统中医的精华的基础上，结合个人丰富的临床经验，提出用复方牛蒡子合剂治疗糖尿病肾病，并且已应用于临床，取得了良好的治疗效果。既往的研究已证实，复方牛蒡子合剂可改善糖尿病大鼠的肾脏病理改变，为了明确其主药牛蒡子对糖尿病肾损害的作用机制，我们针对单味药牛蒡子，以其对大鼠肾皮质TGF—β1和MCP—1mRNA表达的影响为依据，进行了一部分实验研究。目的：研究牛蒡子及其提取物对链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠肾脏TGF-β1 mRNA和MCP—1mRNA表达的影响。方法：以链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠为动物模型，中药治疗组分别给予牛蒡子粉饲料、牛蒡子水提物、醇提物进行6周的实验，观察了大鼠的一般状况，聚合酶链反应(RT—PCR)方法测定肾皮质TGFBβ1、MCP-1mRNA的表达。结果：牛蒡子提取物能明显改善STZ大鼠多饮、多食和体重增加减少等症状．减少肾组织转化生长因子β1(TGF—β1)mRNA、单核趋化蛋白1(MCP-1)mRNA的表达。结论：牛蒡子提取物对糖尿病大鼠肾脏病变有一定的改善，其作用机制可能与降低肾脏TGF-β1和MCP—1mRNA的表达有关。研究表明：牛蒡子醇提物较其水提物和粗粉疗效更为显著。     

趋化因子及其受体在机体免疫调控中的作用

趋化因子(chemokines)是一类引起炎症反应或白细胞转移的细胞因子。近年来，趋化因子家族、趋化因子受体、趋化因子与疾病关系的研究已成为研究者们瞩目的热点。趋化因子及其受体与许多病理过程如HIV感染、炎症、自身免疫性疾病等有密切关系，在肿瘤生长、侵袭、转移过程中发挥关键作用，同时在免疫细胞的分化、发育和免疫应答的调控中起着重要作用。本文主要介绍趋化因子及其受体的结构和功能特点；趋化因子及     

趋化因子受体CCR5在食管上皮癌变过程中作用的初步探讨

目的　探讨 CC趋化因子受体 5 (CCR5 )是否介导食管上皮炎性病变与其癌变过程的关系。方法　用免疫组化检测 40例食管鳞状细胞癌 (SCC)、癌旁炎症、不典型增生组织及 10例正常食管黏膜的 CCR5表达情况。结果　食管 SCC的 CCR5表达阳性率高于正常黏膜、慢性炎症及不典型增生的表达率 (P<0 .0 5 )。在 CCR5表达阳性的食管 SCC中 ,癌间质的单核淋巴细胞 CCR5阳性表达率分别低于癌旁炎症的单核淋巴细胞 CCR5阳性表达率(P<0 .0 5 )。结论　 CCR5在食管癌变进程中表达呈升高趋势 ,提示食管 SCC细胞可能通过表达 CCR5受体与间质浸润的单核细胞、淋巴细胞共同竞争趋化因子配体 ,从而实现了食管 SCC发生进程的免疫逃逸现象