定心方药物血清对H2O2致培养乳鼠心肌细胞损伤的研究

目的研究定心方药物血清对过氧化氢(H2O2)致培养乳鼠心肌细胞损伤的影响.方法用H2O2处理心肌细胞,以建立心肌细胞的H2O2损伤模型.用血清药理学研究方法制备定心方药物血清;比色法测定乳酸脱氢酶活性;戊巴比妥酸法测定细胞内脂质过氧化物(MDA)的含量;MTT法测定细胞活力.结果H2O2对心肌细胞有显著的损伤作用.定心方(Dingxin Recipe,DXR)能明显地降低心肌细胞损伤指数,减少细胞内MDA的生成和提高细胞活力(P＜0.01).结论DXR对H2O2致心肌细胞损伤有保护作用,其机理可能与其减少膜脂质过氧化物生成有关DXR可用于防治一些与氧自由基密切相关的心血管疾病如冠心病、心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤等.     

恶性疟原虫EBA-175与血型糖蛋白A结合位点的鉴定

目的 探索EBA-175与GPA之间的结合信息,为疟疾短肽疫苗及拮抗药物的研制奠定基础.方法 以EBA-175重组蛋白为靶,采用亲和筛选法对噬菌体随机十二肽库进行3轮筛选,通过ELISA、竞争抑制试验、Dot-ELISA及Western blotting等方法鉴定获得的噬菌体短肽与EBA-175之间的结合特性.对阳性克隆进行DNA序列测定,推导其十二肽的氨基酸序列并与GPA氨基酸全序列进行了同源性比较.结果 经3轮亲和筛选后,结合噬菌体得到良好富集.从第3轮洗脱液铺制的琼脂板中随机挑取30个噬菌体单克隆,ELISA检测有27个为阳性,阳性率达90%.竞争性ELISA显示多数阳性噬菌体能竞争抑制EBA-175与其单抗结合.DNA及氨基酸序列分析表明24个噬菌体展示十二肽中共有序列IRR与GPA的114-116位氨基酸同源.结论 阳性噬菌体表达的短肽是EBA-175所识别的模拟表位,IRR几位氨基酸可能对EBA-175与GPA的结合起重要作用.     

益肺润肠、软通并用治疗中老年机能性便秘的临床与实验研究

便秘是中老年极常见的消化道症状,且随年龄的增加便秘的程度也逐渐加重,中老年常受其苦者约占30～50％。不仅便秘本身给患者带来不适,而     

三七总皂甙增强人内皮源性一氧化氮合酶基因启动子活性

目的探讨三七总皂甙(tPNS)对人内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的调控机制。方法以基因重组技术构建人eNOS基因启动子区(-1~ -1 600 bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体peNOS-Luc,采用脂质体介导的细胞基因共转染技术将peNOS-Luc、空载体pGL2-Basic和β-半乳糖苷酶表达质粒pCMV-β共转染NIH3T3细胞,用细菌脂多糖(LPS)、tPNS和转移生长因子β1(TGFβ1)等因子分别刺激转染后的NIH3T3细胞,检测并比较荧光素酶/β-半乳糖苷酶活性,以确定LPS、tPNS和TGFβ1对人eNOS基因启动子转录活性的影响。结果(1)酶切和测序结果均证实重组载体peNOS-Luc构建正确;(2)重组载体peNOS-Luc在NIH3T3细胞中有效表达;(3)在LPS刺激下,人eNOS启动子的转录活性降低,而在tPNS和TGFβ1刺激下,其启动子的转录活性增强,其中,TGFβ1较tPNS所致的转录活性更强。结论正确构建了人eNOS基因启动子区(-1~-1 600 bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体peNOS-Luc;tPNS在NIH3T3细胞中增强人eNOS基因启动子的转录活性。     

IL-6预处理保护H2O2致心肌细胞损伤作用机制初探

目的初步探讨IL-6预处理对H2O2致心肌细胞氧化应激损伤的作用机制。方法采用心肌细胞原代培养方法,以H2O2刺激心肌细胞,建立细胞氧化应激模型;采用MTT法检测细胞活力;AnnexinV-FITC染色法和流式细胞术检测细胞凋亡率;检测心肌细胞内谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的表达情况。结果 H2O2可降低心肌细胞存活率并能增加其凋亡,IL-6预处理后能显著改善细胞活力及凋亡情况,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。低浓度IL-6能明显增加细胞内GSH与SOD的水平,并降低MDA的含量,随着IL-6浓度的增加,这种效应逐渐消失。结论 IL-6预处理能保护H2O2致心肌细胞损伤作用,这可能与IL-6调节细胞GSH、SOD、MDA表达有关。     

定心方及丹参酮ⅡA对心肌缺血-再灌注损伤大鼠白细胞介素-6的影响

目的：观察定心方及丹参酮ⅡA对心肌缺血-再灌注损伤大鼠血清白细胞介素-6（IL-6）含量的影响,探讨其对心肌的保护机制。方法：32只健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、模型组、定心方给药组、丹参酮ⅡA给药组,用冠脉结扎及再松开的方法制备心肌缺血-再灌注损伤动物模型;记录Ⅱ导联心电图,对心律失常进行评分;用HE染色观察心肌病理形态学变化,ELISA法检测血清IL-6含量。结果：定心方及丹参酮ⅡA干预后,心肌缺血-再灌注模型大鼠心律失常明显减少,心肌组织病理改变减轻,血清中IL-6表达显著降低,P〈0.01。结论：定心方丹及参酮ⅡA可减少炎症因子IL-6大量释放,减轻炎症反应,改善受损心肌病理结构,发挥心肌保护作用。     

恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)EBA-175Ⅱ区F2结构域基因的克隆与表达

目的 构建EBA-175Ⅱ区F2结构域基因的原核表达载体。方法采用PCR的方法从恶性疟原虫基因组DNA中扩增出EBA-175Ⅱ区F2结构域856～1848bp基因,定向克隆入PMD18-T质粒,再经BamHI和XhoI酶切亚克隆人高效表达载体pET23a( )。重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定后,在BL21(DE3)菌株中进行IPTG诱导表达。结果重组质粒经序列测定证实插入基因为目的基因,符合表达框架,经IPTG诱导,在BL21(DE3)菌株中以非融合蛋白形式表达,SDS-PAGE电泳显示在约36．4kDa处可见明显蛋白增粗条带,与预期结果一致。结论成功构建了重组EBA～175Ⅱ区F2结构域基因表达载体,并在BL21(DE3)中有效表达。     

H_2O_2上调乳鼠心肌细胞PDCD5的表达

目的:初步探讨PDCD5在H2O2致心肌细胞氧化应激(Oxidative Stress)损伤中的表达情况及其在心肌细胞损伤中的意义。方法:以H2O2不同浓度及作用时间干预体外培养乳鼠心肌细胞,建立氧化应激心肌细胞损伤模型;用MTT比色法检测心肌细胞活力;AnnexinV-FITC染色法观察心肌细胞凋亡情况;免疫荧光法检测PDCD5蛋白表达情况。结果:H2O2可降低心肌细胞存活率并能增加其凋亡,并随着H2O2浓度增加及作用时间的延长,细胞存活率低于正常对照组5.69%～67.24%;正常对照组的PDCD5表达较低,荧光强度值为(13.15±2.5),而经H2O2处理过的心肌细胞PDCD5表达显著增高,其中H2O2200μmol·L-1处理3h的PDCD5表达最高约为51.08±4.9。结论:H2O2导致心肌细胞损伤可能与上调促凋亡基因PDCD5的表达有关。