内毒素诱导性基因启动子结合蛋白的筛选新方法及其应用

目的建立研究DNA-蛋白质相互作用的新方法。方法选择6只SPF级BALB／c小鼠,模型组经尾静脉注射脂多糖（LPS）25mg／kg,使平均动脉压（MAP）降至40mmHg（1mmHg=0．133kPa）造成内毒素休克,然后迅速处死,正常对照组同期处死,取肝脏组织。利用生物素一链亲和素系统结合磁珠分离技术筛选内毒素诱导基因（LIG）启动子的结合蛋白。用聚合酶链反应（PCR）扩增末端带生物素标记的LIG启动子探针,提取动物肝脏组织胞核蛋白,与制备的LIG启动子探针进行孵育,再以标记有链亲和素的磁珠分离LIG启动子-蛋白反应复合物,使用不同浓度NaCl洗脱结合的蛋白,使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分离样品蛋白,并对凝胶进行银染显色,比较模型组与正常对照组的差异条带。结果两组胞核蛋白中共观察到15条差异条带。分析差异条带显示,与正常对照组比较,在低亲和力作用水平,LPS作用后有4个蛋白开始与LIG启动子作用力增强,而有1个蛋白则同启动子的相互作用减弱;在DNA-蛋白质高亲和力作用水平,则有9个蛋白因LPS刺激而同DNA的结合力增强,有1个蛋白同启动子的相互作用消失。结论成功建立了生物素-链亲和素结合磁珠分离技术的新方法,为研究DNA-蛋白质相互作用开拓了新思路,并从“转录调控组学”角度深入理解基因表达调控机制奠定了基础。     

热打击联合脂多糖刺激对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响

目的：观察脂多糖（LPS）与热打击分别单独作用与联合作用对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响。方法：于37℃、5％CO2标准培养箱中培养人肠上皮细胞株SW480。实验分4组：空白对照组直接收集细胞上清;LPS单独刺激组（LPS组）分别使用0、0．01、0．1、1和10μg／ml的LPS刺激SW480细胞,24h后收集细胞上清;热打击组将SW480细胞进行热打击（42℃,1h）后在标准孵箱分别培养1h和24h后收集细胞上清;LPS＋热打击组将SW480细胞42℃热打击1h后给予上述浓度的LPS刺激,再重新置于标准孵箱中培养,24h后收集细胞上清。各组细胞上清用LiquiChip液相蛋白芯片系统分别检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）、7干扰素（IFN-7）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等10种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平。结果：单独LPS刺激时呈剂量依赖性诱导SW480表达分泌IL-8,对其余9种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平影响不明显。单纯热打击仅诱导SW480细胞表达分泌IL-8的水平升高,且与空白对照组比较,仅热打击24h后IL-8的水平显著增加（P〈0．01）。热打击联合不同浓度的LPS刺激SW480细胞,LPS浓度低时并不影响SW480表达分泌IL-8的水平（P〉O．05）,而高浓度LPS可以显著减少其表达分泌水平（P〈0．05）。结论：人肠上皮细胞SW480作为脏器实质细胞,对炎性刺激仅能产生单一种类的细胞因子,其中LPS单独刺激和一定强度的热打击均可上调SW480分泌IL-8;但高浓度LPS在热环境下可抑制SW480细胞的IL-8表达分泌水平。     

非酮症性高血糖偏侧舞蹈症脑部CT及MRI表现

目的分析非酮症性高血糖偏侧舞蹈症患者脑部CT及MRI影像学特点。方法回顾性分析11例经临床确诊的非酮症性高血糖偏身舞蹈症患者的脑部CT及MRI表现。11例患者均接受至少一次CT及MRI平扫,其中2例行MRI增强检查,4例加做DWI序列,6例加做MRS序列,2例加做DTI序列,3例复查MRI平扫,1例复查CT平扫。结果 9例CT见豆状核和/或尾状核头部片状高密度影,2例CT阴性;T_1WI 9例高信号,2例阴性;DWI 2例高低混杂信号,1例低信号,1例阴性;MRS检查:NAA峰6例均降低,Cho峰6例均升高,NAA/Cr比值6例均降低,Cho/Cr比值6例均升高;DTI 1例显示左侧内囊前肢纤维束受损,FA值减低,1例阴性。结论非酮症性高血糖偏侧舞蹈症脑部CT及MRI均具有特征性影像表现,DWI、MRS及DTI等序列对确定病变性质、评估神经元丢失或损伤、纤维束受损等有价值。     

双水平正压无创机械通气治疗慢性阻塞性肺病合并Ⅱ型呼吸衰竭的应用效果

目的探讨双水平正压无创机械通气治疗慢性阻塞性肺病合并Ⅱ型呼吸衰竭的效果。方法选择2010年1月～2013年12月因慢性阻塞性肺病急性加重致Ⅱ型呼吸衰竭人院的患者134例,随机分为观察组和对照组,每组67例,对照组按常规给予综合治疗,观察组在常规治疗基础上行无创通气治疗,观察两组治疗前后心率（HR）、呼吸频率（RR）、动脉血气结果及峰值呼气流速（PEF）改善情况。结果两组治疗72h后的pH、PaO2较治疗前增加,PaCO2较治疗前降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;与对照组比较,观察组改善更为明显（P〈0．05）。两组治疗72h后的RR、HR均较治疗前降低（P〈0．05）;观察组治疗72h后的RR、HR下降较对照组明显（P〈0．05）。两组治疗72h后的PEF较治疗前增加,观察组治疗72h后的PEF增加较对照组明显（P〈0．05）。结论采用双水平正压无创机械通气治疗慢性阻塞性肺病合并Ⅱ型呼吸衰竭,可显著改善患者的血气分析结果、HR、RR及PEF水平,明显改善患者的气道阻塞情况,是一种安全、有效的治疗方法。     

慢性阻塞性肺病急性加重期降钙素原水平与预后关系探讨

目的探讨慢性阻塞性肺病急性加重期降钙素原水平与预后关系。方法选取2009年1月-2012年12月在本院呼吸科住院的慢性阻塞性肺病患者102例作为观察组研究对象,依据患者病情分为急性加重期组（A组）60例和稳定期组（B组）42例;另选取我院普通肺炎患者99例作为对照组,采集所有患者血液,进行PCT、血白细胞（WBC）、C反应蛋白（CRP）、血氧饱和度（S02％）水平的检测,常规留取痰液做痰培养培养;患者出院后随访2年进行评估,记录患者呼吸困难指数（mMRC）、病情发作频率及最终转归。结果观察组与对照组患者PCT、WBC、S02比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。急性加重期患者与稳定期患者PCT、WBC、CRP及S02比较均有统计学差异（P〈0．05）,急性加重期与稳定期患者mMRC、2年内发作频率与入院次数间比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。急性加重期患者痰培养率及2年内死亡率明显高于稳定期患者,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论对于感染诱发的COPD急性加重期患者,检测PCT水平可以反映患者的病情及预后。     

术前MELD评分和术后CD14^＋／HLA—DR测定在肝移植术后感染预测中的意义

目的：探讨原位肝移植术前终末期肝病模型（MELD）评分和术后CD14^＋单核细胞人自细胞DR抗原（CD14^＋／HLA-DR）表达率的变化在术后感染预测中的临床意义。方法：按美国胸科医师协会／危重病医学会的定义,将83例肝移植术后患者分为非感染组、感染组、感染性休克组,分别测定3组患者术前血胆红素、凝血酶原时间国际标准化比值（INR）、血肌酐,计算MELD评分,并动态检测术后CD14^＋／HLA—DR表达率,分析其在感染监测中的价值。结果：感染组和感染休克组术前血胆红素、INR、血肌酐和MELD评分均显著高于非感染组（P〈0．01）,CD14^＋／HLA-DR表达率均显著低于非感染组（P〈0．01）。感染组和感染休克组之间比较,上述指标均无显著性差异（P〉0．05）。感染发生后,感染组、感染性休克组的CD14^＋／HLA—DR值显著下降,与非感染组比较,差异具有显著性（P〈0．05或P〈0．01）;感染最重时两组的CD14^＋／HLA—DR值均降到最低值,与非感染组比较,差异具有显著性（P〈0．01）。结论：术前MELD评分和术后CD14^＋／HLA—DR表达率是监测肝移植术后感染发生及判断预后的良好指标。对术前高MELD评分或术后可疑感染的患者,动态监测CD14^＋／HLA-DR表达率对病情判断和治疗调整均有较好的指导意义。     

线粒体凋亡途经参与热应激后人脐静脉内皮细胞凋亡的研究

目的 观察细胞色素C、caspase-9和caspase-3在热应激后人脐静脉内皮细胞的表达及相互关系,阐明热应激后人脐静脉内皮细胞凋亡的信号转导机制,探讨重症中暑所致血管内皮损害的发病机理.方法 建立人脐静脉内皮细胞热应激模型,对照组将细胞置于标准37℃、5％ CO2细胞培养箱,热应激组将细胞置于39℃、41℃、43℃细胞培养箱中进行热应激2h,热应激后继续在细胞培养箱孵育24h.电子显微镜观察人脐静脉内皮细胞(37℃、43℃)线粒体改变,应用Annexin V-FITC/PI双染色方法检测不同温度热应激后细胞凋亡率、Western blot检测细胞色素C、caspase-9、caspase-3蛋白表达.结果 电镜观察对照组(37℃)HUVEC细胞线粒体结构基本正常.热应激后(43℃)HUVEC细胞线粒体肿胀并出现结构改变;与对照组比较,39℃热应激对内皮细胞凋亡无明显影响(P＞0.05),随着热应激温度的增加人脐静脉内皮细胞凋亡明显增多(41℃17.8％,4 3℃25.6％)并且细胞色素C、caspase-9、caspase-3蛋白表达明显增加(P＜0.05).结论 线粒体通路的激活参与了热应激后人脐静脉内皮细胞凋亡的调控;血管内皮细胞凋亡可能与重症中暑的发病存在相关性.     

下鼻甲全段和前端等离子射频消融的对比研究

目的:比较下鼻甲全段和前端等离子射频消融治疗下鼻甲肥大的疗效及并发症。方法:将153例有明显鼻塞症状的单纯下鼻甲肥大患者随机分为实验组与对照组,实验组采用等离子射频消融下鼻甲前端,对照组采用等离子射频消融下鼻甲全段。术前和术后1年均对患者鼻塞的主观感觉进行视觉模拟量表(VAS)评分,并在术后随访观察鼻黏膜恢复情况和并发症。结果:2组患者术前和术后的VAS评分差异有统计学意义(P<0.01),但2组的VAS评分下降值差异无统计学意义(P>0.05)。2组并发症差异有统计学意义(P<0.01)。结论:下鼻甲前端和下鼻甲全段等离子射频消融治疗下鼻甲肥大疗效相似,但下鼻甲前端射频消融操作更简单,并发症更少;由于对破坏鼻黏膜连续性的风险小,因此更安全,并具有更好的临床应用价值。