慢性痛症患者的甲襞毛细血管管径和流速变化及机理探讨

本研究运用新型甲襞微循环参数测试系统（ＹＪＤ）临床微循环图像分析仪，对９０例慢性痛症患者的甲襞毛细血管管径和流速实施精确测量分析，并与３１例健康人进行对照比较。结果：（１）不论疼痛部位如何，微血管管袢均缩短（Ｐ＜０．０１），流速减慢；（２）长期疼痛微循环障碍更显著，主要表现为流速缓慢（输入枝０．１９±０．０９ｍｍ／ｓ）和袢顶增大（直径１５．８６±６．５０μｍ），与健康人比较（０．３５±０．１３ｍｍ／ｓ、１４．０１±３．３１μｍ）Ｐ均＜０．０１。（３）按中医辨证分型，血虚型输入枝为９．２３±１．６５μｍ，与其他型比较，Ｐ＜０．０１。流速则以血瘀型减慢明显（输入枝０．１８±０．０８ｍｍ／ｓ），与健康人比较，Ｐ＜０．０１。这种微循环变化的机制与血液粘度增高，及通过影响神经体液调节引起微血管痉挛或舒张有关，有组胺等多种体液因子参与。     

定心方对大鼠缺氧及正常心肌细胞内钙、膜电位和线粒体膜电位的影响

目的：探讨定心方（DXR）抗心律失常的分子机理。方法：采用胰蛋白酶法分离培养心肌细胞，用不同荧光染料分别标记细胞，在激光共聚焦显微镜上测定DXR血清对心肌细胞内钙[Ca^2+]i、膜电位（MP）和线粒体膜电位（MMP）的变化。结果：缺氧使心肌细胞[Ca^2+]i和MMP升高，而使MP降低，DXR血清降低了正常和缺氧心肌细胞[Ca^2+]i,改善了缺氧引起的MP降低，使缺氧状态下MMP保持在基线水平。结论：DXR能通过抑制缺氧引起的[Ca^2+]i和MMP升高，及拮抗缺氧所致的MP降低，从而发挥保护心肌细胞，防治心律失常的作用。     

丹参多糖保护H2O2致心肌细胞损伤作用机制

目的 研究prohibitin在H2O2致心肌细胞氧化应激损伤中的表达及中药丹参多糖对其调节作用.方法 以H2O2干预体外培养乳鼠心肌细胞建立氧化应激心肌损伤模型;MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印迹法检测prohibitin蛋白表达情况.结果 与模型组相比,丹参多糖组的细胞活力明显上升,凋亡率显著降低,其中高剂量组尤为明显(P＜0.01);prohibitin在正常心肌细胞内表达较低,而在模型组表达代偿性增高,丹参多糖用药组其表达有所增加,高剂量组增加更明显,与模型组相比有显著性差异(P＜0.05).结论 丹参多糖可通过上调prohibitin蛋白表达发挥其保护H2O2致心肌细胞损伤的作用.     

脂质体介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞：筛选理想浓度

背景：siRNA转染是完成RNA干扰的关键一步。目前用于心肌细胞的RNA干扰技术多以质粒为载体转染长链shRNA,其步骤复杂。脂质体转染化学合成短链siRNA是一种操作简便,低毒高效的转染方法,将其应用于心肌细胞转染,有利于RNA干扰技术的推广应用。 目的：筛选脂质体介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞的最佳浓度,以及简单高效的RNA干扰操作方法。 方法：应用脂质体siPORTTM NeoFXTM转染试剂介导5,10,20,30 nmol/L的CY3-Negative siRNA转染心肌细胞,同时设立空白对照组,转染24 h后分别应用荧光显微镜,流式细胞仪检测转染效率和细胞凋亡率,筛选最优浓度。根据优化浓度转染PHB siRNA,48 h后检测蛋白表达验证转染效果。 结果与结论：随CY3-Negative siRNA浓度的增加,在荧光显微镜下观察到激发出红色荧光的细胞比例随之增加,流式细胞仪检测出各组平均转染效率也依次增高(P < 0.05),其中30 nmol/L组转染效率最高(P < 0.05),而各实验组与空白对照组之间的细胞凋亡率差异无显著性意义(P > 0.05)。将心肌细胞转染30 nmol/L 的PHB siRNA,48 h后PHB蛋白表达平均下降74.11%(P < 0.05)。实验结果表明,脂质体转染试剂siPORTTM NeoFXTM介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞的理想浓度是30 nmol/L。     

定心方对缺血再灌注大鼠心肌PDCD5的表达的作用

目的:研究PDCD5在大鼠IRI心肌中的表达及定心方的干预作用。方法:将48只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、定心方低剂量组和定心方高剂量组,采用冠脉结扎再松开的方法复制动物模型,计算心律失常评分和心肌梗死面积,荧光定量PCR法检测大鼠心肌PDCD5 mRNA水平,Western blotting法检测心肌PDCD5与p-ERK蛋白表达情况。结果:与假手术组相比,模型组PDCD5 mRNA与蛋白表达明显增高;定心方干预后两者的表达显著降低,而p-ERK的表达进一步增强,尤其是高剂量组(37.5 g/kg)变化更为明显。结论:IRI能诱导心肌p-ERK应激性增高,定心方可促进p-ERK水平进一步增高,降低PDCD5表达,其机制可能与激活ERK通路有关。     

基于PI3K/Akt/GSK3β信号通路研究心宝丸对慢性心力衰竭大鼠心肌肥厚的影响

目的探讨心宝丸是否能够通过调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路抑制慢性心力衰竭（CHF）大鼠模型心肌肥厚。方法将60只雄性SD大鼠按体重随机分为假手术组、模型组、心宝丸低、中、高剂量组和贝那普利组。除假手术组外所有大鼠采用腹主动脉缩窄法复制CHF模型，假手术组只分离腹主动脉，不结扎，术后4周心宝丸药物干预组［40、80、120 mg/（kg·d）］和贝那普利组［1.05 mg/（kg·d））］开始灌胃给药8周，假手术组和模型组用等体积生理盐水灌胃8周。术后12周用超声心动图检测大鼠心脏功能，全部大鼠禁食24 h后处死， HE染色法观察心肌组织形态，小麦胚凝集素染色（WGA）观察心肌细胞大小， ELISA法检测血清NT-proBNP值， Real-time PCR法检测肥厚相关基因ANP、Myh7 mRNA表达水平，Western Blot法检测心肌组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β蛋白表达水平。结果与假手术组比较，模型组大鼠术后第12周左心室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（FS）降低（P<0.01），左心室收缩末期内径（LVIDs）升高（P<0.05），心肌细胞横截面积（CSA）增大（P<0.01），血清NT-proBNP水平升高（P<0.01），ANP、Myh7 mRNA及p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β蛋白表达水平上调（P<0.01，P<0.05），GSK3β表达水平下调（P<0.01）；与模型组比较，心宝丸低、中、高剂量组和贝那普利组LVEF升高（P<0.05，P<0.01），心肌细胞大小减小（P<0.01），Myh7 mRNA表达水平降低（P<0.05，P<0.01），血清中NT-proBNP水平降低（P<0.01），p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β表达水平下调（P<0.01），GSK3β表达水平上调（P<0.01），心宝丸中、高剂量组FS升高（P<0.05），心宝丸中、高剂量组和贝那普利组LVIDs减小（P<0.05），心宝丸高剂量组和贝那普利组ANPmRNA表达水平降低（P<0.01）；HE染色结果显示：心宝丸可以改善心肌肥厚，心肌细胞排列紊乱，间隙增宽的病理变化。结论心宝丸可以抗心肌肥厚，提升心脏功能，其机制可能与抑制PI3K/Akt信号的磷酸化激活，抑制GSK3β的磷酸化有关。     

p38 MAPK通路在内脏脂肪素诱导HUVEC细胞分泌TNF-α的作用及定心方含药血清的影响

目的：观察相对分子质量为38 kD有丝分裂原活化蛋白质激酶（p38 MAPK）信号通路在内脏脂肪素（visfatin）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）作用以及定心方（Dingxin Recipe,DXR）的干预影响。方法：制备DXR含药血清;用不同质量浓度（0,50,100,200 μg·L^-1）及时间点（0,6,12,24,48 h）的visfatin和终浓度5%的DXR含药血清干预HUVEC,采用四氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖,酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定培养上清液中TNF-α含量,Western blotting方法检测细胞p38 MAPK及p-p38 MAPK蛋白表达。结果：与正常对照组相比,100 μg·L^-1的visfatin作用24 h能显著抑制细胞增殖,升高细胞上清液中TNF-α含量,增强p-p38 MAPK蛋白表达,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。DXR能降低HUVEC培养上清液中TNF-α含量,减弱细胞p-p38 MAPK表达,与visfatin组相比差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：定心方通过调控p38 MAPK通路保护visfatin诱导的HUVEC损伤。     

冠心病心绞痛痰浊证、血瘀证的血浆代谢组学研究

目的:研究冠心病心绞痛痰浊痹阻证(痰浊证)、心血瘀阻证(血瘀证)患者的血浆代谢组学特征,探讨代谢组学方法在研究冠心病心绞痛中医证型中的应用。方法:对10例痰浊证患者和10例血瘀证患者的血浆样本进行氢核磁共振(1HNMR)检测。用主成分分析(PCA)与偏最小二乘判别分析(PLS-DA)处理图谱数据,研究2组血浆代谢物图谱的差异。结果:1HNMR图谱模式识别分析显示,2组血浆样本代谢物差异显著。痰浊证组乳酸含量较高,血瘀证组丙氨酸含量较高,说明2组都存在能量代谢紊乱;痰浊证组低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、脂类化合物、酮体含量均高于血瘀证组,高密度脂蛋白、不饱和脂肪酸含量均低于血瘀证组,说明痰浊证组比血瘀证组存在更严重的脂代谢紊乱;痰浊证组葡萄糖、半乳糖、N-乙酰糖蛋白含量均高于血瘀证组,说明痰浊证组比血瘀证组存在更严重的糖代谢紊乱;痰浊证组天门冬氨酸、异亮氨酸、谷氨酞胺、白蛋白赖氨酰含量均高于血瘀证组,丙氨酸、瓜氨酸、精氨酸、脯氨酸含量均低于血瘀证组,说明2组氨基酸代谢紊乱程度相当。结论:2组血浆样本的1HNMR代谢物图谱存在差异,能从代谢组学分析中找出特异的标志性代谢物。血浆代谢物变化能在一定程度上区分冠心病心绞痛的不同中医证型。     

酸枣仁皂苷A预处理对过氧化氢诱导大鼠心肌细胞凋亡的作用

目的:研究酸枣仁皂苷A预处理对过氧化氢诱导心肌细胞凋亡、胞浆细胞色素C(CytC)表达及Caspase-3活性的影响。方法:采用差速贴壁法体外分离培养新生乳鼠心肌细胞,以500μmol/L过氧化氢作用4小时建立心肌细胞氧化损伤模型,以酸枣仁皂苷A(20 mg/L)在造模前干预24小时。倒置显微镜观察心肌细胞形态学变化;四唑盐(MTT)比色法检测心肌细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用蛋白印迹法检测胞浆CytC表达,分光光度法检测caspase-3的活性。结果:模型组经500μmol/L过氧化氢作用4小时后,细胞核暗淡,伪足显著变细,细胞间连接明显减少,搏动节律明显减慢,细胞活力显著下降(P<0.01),细胞凋亡率显著增高(P<0.01)。与模型组比较,酸枣仁皂苷A能显著改善心肌细胞形态、提高细胞活力及显著降低细胞凋亡率(P<0.01)。模型组中胞浆CytC表达及caspase-3活性显著升高(P<0.01)。与模型组比较,酸枣仁皂苷A组的胞浆CytC表达及caspase-3活性显著下降(P<0.01)。结论:酸枣仁皂苷A可明显抑制过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与下调胞浆中CytC蛋白表达及caspase-3活性有关。     

中药治疗冠心病室性早搏随机对照试验的系统评价

目的评价中药治疗冠心病室性早搏的有效性和安全性。方法根据Cochrane协作网系统评价方法,全面检索中国期刊全文数据库（CNKI,包库）、维普中文期刊数据库（VIP）、万方学术期刊全文数据库、中国生物医学文献服务系统（CBM）、中国生物医学期刊引文数据库（CMCI/CMCC整合版）、以及中医药、中西医结合在线数据库。筛选文献,评价质量,提取资料,并用RevMan5.1软件进行Meta分析。结果纳入8篇随机对照试验,1306例患者,所有试验改良Jadad质量评分≥4分。室性期前收缩疗效：参松养心胶囊优于美西律[RR=1.39,95%CI（1.14,1.69）,P=0.001],参松养心胶囊优于心律宁[RR=1.37,95%CI（1.18,1.69）,P〈0.0001]。中医证候疗效：参松养心胶囊优于心律宁[RR=1.34,95%CI（1.21,1.49）,P〈0.001],复脉颗粒优于美西律[RR=2.17,95%CI（1.37,3.43）,P=0.001]。心电图疗效：参松养心胶囊优于心律宁[RR=1.48,95%CI（1.15,1.90）,P=0.002]。不良反应共13例,主要为恶心、食欲不振等胃肠道症状,未发现肝、肾功能异常。结论参松养心胶囊等中药能有效地改善冠心病室性期前收缩,而且安全可靠。