基于HK-2细胞的左金丸中生物碱类组分体外毒性筛选及机制初探

目的基于肾小管上皮细胞HK-2筛选左金丸中主要生物碱类组分对肾细胞损伤。方法采用CCK-8法和高内涵筛选技术筛选左金丸主要生物碱中潜在肾细胞损伤成分。通过细胞形态、乳酸脱氢酶和细胞色素C释放率及凋亡相关蛋白表达等进行确证,初步确定造成细胞损伤作用的生物碱,为组分中药配伍组方和配伍减毒提供体外毒理学依据。结果采用CCK-8法和高内涵技术初步筛选,表明吴茱萸碱(EVO)能够显著降低细胞数目,升高细胞膜通透性,降低线粒体膜电位。此外,细胞形态、细胞凋亡和细胞色素C表达与高内涵筛选结果一致,Western blot实验表明EVO能够诱导细胞凋亡造成肾细胞损伤。结论 EVO可明显导致肾细胞损伤,可能是通过影响线粒体、细胞色素C及细胞膜通透性诱导细胞凋亡。     

中药与肝脏药物代谢酶之间的相互作用

肝脏药物代谢酶是决定中药复方体内过程的关键因素,复方中化学成分对药物代谢酶的抑制或诱导作用是中药复方在药动学层次上产生相互作用的主要机制.本文首先建立中药配伍与肝脏药物代谢酶的相互作用技术,在有效组分、有效部位和饮片三个层次发现中药与肝脏药物代谢酶之间的相互作用,筛选发现中药复方中对肝脏药物代谢酶的诱导或抑制成分,探索肝脏药物代谢酶对中药成分代谢作用的具体亚型,结合中药复方作用的体内过程,系统阐述中药成分与机体之间的相互作用,为中药配伍、药效和安全性评价提供理论依据,为建立基于肝脏代谢酶表达方剂整体性研究的新模式提供技术支撑.     

补肾解毒活血方与益气补血方预防化疗后骨髓抑制的比较研究

目的:比较补肾解毒活血方与益气补血方预防环磷酰胺(CTX)引起骨髓抑制小鼠造血功能的效果及作用机制,为临床合理配伍提供依据.方法:清洁级昆明种小鼠80只,随机分为正常对照组、模型组、补肾解毒活血组和益气补血组,中药组分别给予25.55,17.47 g?kg-1 ?d-1中药灌胃,正常对照组和模型组给予等体积的生理盐水,每日灌胃1次,连续给药10d,第8天时采用腹腔注入环磷酰胺(100 mg?kg-1?d-1),连续造模3d.各组随机抽取10只,在第7天(造模前1d)及造模完成后的第1,3,5,7,10天做外周血象检测,剩余10只于造模后第1天进行骨髓有核细胞计数(BMNC)、粒系、红系造血祖细胞(CFU-GM,CFU-E和BFU-E)集落形成单位、细胞凋亡检测及血清粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及促红细胞生成素(EPO)检测.结果:各组小鼠白细胞和血小板数分别于造模后第1天和第5天降至最低,并分别于第5天和第10天基本恢复至正常,但益气补血组下降程度较模型组轻(P＜0.01),而补肾解毒活血组恢复明显早于模型组和益气补血组(P＜0.05);造模后模型组BMNC,CFU-GM及BFU-E显著下降(P＜0.01),且两中药组均明显高于模型组(P＜0.01),其中BFU-E以补肾解毒活血组为优(P＜0.05);造模后小鼠骨髓细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),约是正常组的14.7倍,两中药组骨髓细胞凋亡率均明显低于模型组(P＜0.01);造模后GM-CSF较正常组显著降低(P＜0.01),但两中药组GM-CSF明显高于模型组(P＜0.05).各组血清EPO水平较正常组没有明显差异.结论:预防给予益气补血药或补肾活血解毒药均可以加快化疗后骨髓抑制白细胞的恢复,尤以益气补血方为优;益气补血方减轻血小板下降程度更好,补肾活血解毒方促使血小板恢复更佳.预防给予两组中药均可减轻小鼠环磷酰胺造成的BMNC和CFU-GM下降程度,从而有利于白细胞的恢复;两组中药不是通过提高血清促红细胞生成素的水平,而是通过减轻环磷酰胺造成的BFU-E的减少,达到保护红系造血的效果,以补肾解毒活血方为优.预防应用补肾解毒活血药与益气补血药可以明显降低环磷酰胺引起的骨髓细胞凋亡,似以益气补血组为佳.     

补肾解毒活血法与益气补血法对骨髓抑制小鼠造血功能影响的比较研究

目的:比较补肾解毒活血法与益气补血法对环磷酰胺(CTX)所致骨髓抑制小鼠造血功能的影响及其作用机制的不同特点.方法:昆明种小鼠80只,随机分为4组,正常对照组、模型组、补肾解毒活血组(20.55 g·kg -1·d-1)和益气补血组(17.47 g·kg-1·d-1).采用CTX 100 mg·kg-1 ip,连续3d,制成骨髓抑制小鼠模型.各组于造模完成后次日开始ig连续10d.分别于造模前及造模后1,3,5,7,10,14 d动态检测外周血象;于末次给药次日后进行骨髓有核细胞计数(BMNC)及粒-单核系集落形成单位( CFU-GM)、红系集落形成单位(CFU-E)、和红系爆式集落形成单位(BFU-E)集落计数.结果:补肾解毒活血方和益气补血方均可明显升高模型小鼠的WBC,PLT,BMNC,可促进造血祖细胞(HPC)增殖,CFU-GM,CFU-E,BFU-E集落数均显著高于模型组(P＜0.01);补肾解毒活血方对血小板的恢复优于益气补血方.结论:补肾解毒活血方和益气补血方均可促进骨髓造血祖细胞集落生成,具有减轻和改善化疗后骨髓抑制的效果,而前者尤可减轻血小板减少、促进其恢复;其作用机制可能在骨髓细胞分化过程或造血微环境等途径上有不同.     

薯蓣皂苷致肝毒性及其机制的初步研究

薯蓣皂苷有广泛的生物学作用,具有广阔的应用前景,但是目前有关薯蓣皂苷毒理及其机制方面研究较少。该文从细胞水平上检测薯蓣皂苷(dioscin)对肝脏的毒性,同时对薯蓣皂苷作用于HepG2细胞后CYP1A在mRNA、蛋白水平的变化进行了研究,对CYP1A转录调控子芳香烃受体(AhR)的表达也进行了检测,旨在探索薯蓣皂苷的肝毒性及其可能的机制。将0.5~32 μmol·L^-1薯蓣皂苷作用于HepG2细胞12 h,利用CCK-8法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞膜损伤,采用倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测活性氧(ROS)的生成量;实时荧光定量PCR检测CYP1A及其转录调控子AhR mRNA的表达;Western blot 法检测CYP1A1的蛋白表达。结果显示薯蓣皂苷0.5~32 μmol·L^-1作用于HepG2细胞可以显著抑制细胞活性,与对照组相比,LDH释放量显著升高,ROS的生成量显著增大,细胞形态发生变化并坏死。 Q-PCR 检测结果显示,与对照组相比,CYP1A及芳香烃受体(AhR)mRNA表达升高;在蛋白水平上,薯蓣皂苷作用于细胞后CYP1A1蛋白表达升高,且AhR的拮抗剂白藜芦醇(Res)与薯蓣皂苷合用后能使CYP1A1的表达下调。以上实验结果表明大剂量薯蓣皂苷具有肝细胞毒作用,这可能与其能激活芳香烃受体(AhR),诱导CYP1A表达进而产生毒性作用有关。     

新型四物方补血活性部位的初步筛选

目的 观察新型四物方不同提取部位对辐射小鼠外周血有形成分的影响,发现新型四物方补血的有效部位.方法 70只小鼠常规饲养数天适应环境后,采用60Co-γ射线全身1次照射,剂量为2.5Gy,照射后立即给予新型四物方不同提取部位,连续给药7d,在照射后1,4,7,10,13,17 d检测新型四物方及其提取部位对外周血象的影响...     

腺嘌呤对电离辐射诱发AHH-1细胞凋亡的保护作用

目的：观察腺嘌呤对淋巴母细胞AHH-1辐射损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法：照射前12h给予不同浓度的腺嘌呤,再经4．O Gy 60Coy射线照射诱发细胞凋亡,采用MTS法计算细胞存活率;Annexin V-FITC／PI双染法、Caspase3／7发光法检测细胞凋亡率;DNA Ladder法观察凋亡断裂条带;RT-PCR分析细胞Caspase-9、Bax、Bcl-2mRNA表达的变化。结果：与正常组比较,电离辐射后细胞存活率79．4％显著下降（P〈0．01,加入0．001,0．01,0．1μmol·L^-1。腺嘌呤细胞存活率分别为85．4％,89．6％,92.2％明显升高（P〈0．01）,且随作用浓度的增加而增大,DNA断裂片段也减少,细胞中Caspase-9、Bax表达明显减少,Bcl-2表达明显增加,凋亡的各项指标均明显改善。结论：腺嘌呤对电离辐射诱发的细胞凋亡有保护作用,并且对细胞凋亡的抑制呈剂号依赖正相关美系．     

四物汤及其配伍对大鼠肝脏P450酶活性及mRNA表达的影响

研究四物汤复方及其配伍对大鼠肝脏P450酶活性及其mRNA表达水平的影响。大鼠口服灌胃四物汤及其配伍水煎液2周后,处死,用生理盐水灌流肝脏,制备肝微粒体,采用混合探针与肝微粒体体外孵育法考察四物汤对大鼠肝脏细胞色素P450酶的影响。利用实时定量聚合酶链式反应(Q-PCR)检测四物汤对大鼠肝脏细胞色素P450 mRNA表达的影响。四物汤复方组CYP1A2酶活性与对照组相比升高(P<0.05),熟地白芍、当归白芍、当归川芎以及白芍川芎组的CYP1A2和CYP2C19的酶活性与对照组相比降低(P<0.05),复方组、单药组、2味药配伍组的CYP2B6的酶活性与对照组相比降低(P<0.05)。复方组对CYP1A2的mRNA表达具有上调作用(P<0.05),4味单药对CYP2B1 mRNA表达具有下调作用的(P<0.05)。四物汤复方对大鼠肝脏CYP1A2的酶活性具有诱导作用,熟地和当归组与对照组相比酶活性相当,但与白芍合用后显著下调了CYP1A2的酶活性。复方及其配伍对CYP2B6的酶活性具有抑制作用,其中当归对酶活性下调作用较强。复方对CYP1A2以及4味单药对CYP2B1的mRNA表达的影响与酶活性水平相平行。     

基于均匀设计的藜芦与细辛配伍毒性研究

藜芦与细辛同用,是"十八反"配伍禁忌之一。本实验采用均匀设计结合动物急性毒性实验,以动物死亡数为观测指标,探讨藜芦与细辛配伍的毒性规律。结果显示配伍后的毒性产生于藜芦和细辛的共同作用,且藜芦对配伍毒性的贡献所占权重更大,但配伍后毒性并未随藜芦用量的增加呈绝对上升趋势。     

阿普甘铵注射液对小鼠血糖电解质以及凝血的影响

目的 测定阿普甘铵注射液对小鼠血糖、电解质以及凝血的影响,旨在观察其可能的不良反应为临床合理应用提供依据.方法 静脉注射给药14d,测定小鼠血糖和Na 、K 、Cl-等电解质;在动物的腋下接种艾氏腹水瘤细胞,第2d开始尾静脉给药,连续给药14d后在小鼠股动脉取血离心得血浆,测定凝血酶原时间(PT),活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT).结果 在给药后5d时阿普甘铵大剂量组降低血糖.在以后的检测时间点,与正常组相比各给药组血糖值无显著性差异.与正常组相比各给药组Na 、K 、Cl-无显著性差异;荷瘤组小鼠血液的凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)均缩短,表明荷瘤组小鼠血液有凝血的趋势,阿普甘铵注射液不能逆转凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)的改变.结论 阿普甘铵对正常小鼠血清中的血糖有短暂的降低作用,而对电解质没有影响.与荷瘤组相比,阿普甘铵注射液不能逆转凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)的改变.