地中海贫血孕妇ALP、AFU和甲状腺激素变化情况

目的探讨地中海贫血孕妇早期体内碱性磷酸酶(ALP)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)和甲状腺激素变化情况。方法选取2016年2月-2017年3月在该院产科建档并进行产检的地中海贫血早期孕妇281例,同时设置281例正常孕周为3个月孕妇作为对照组。采集空腹静脉血2 ml注入紫色EDTA-K2抗凝管中,完成血液检测;采集空腹静脉血4 ml,静止,分离血清,检测ALP、AFU、血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT_3)、血清游离甲状腺激素(FT_4)和促甲状腺激素(TSH),PCR+反向斑点杂交法检测确认地中海贫血。结果对照组孕妇ALP和AFU水平高于地中海贫血孕妇(P<0.05);地中海贫血孕妇TSH高于对照组孕妇(P<0.05);地中海贫血孕妇FT3和FT4低于对照组孕妇(P<0.05)。结论地中海贫血孕妇早期ALP、AFU和甲状腺激素水平受到影响。     

碱性成纤维细胞生长因子对干眼小鼠模型眼表白细胞介素-10和白细胞介素-1β蛋白表达的影响北大核心CSCD

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)对干眼小鼠模型眼表白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达的影响。方法将30只BALB/c小鼠构建干眼小鼠模型,并将建模成功的25只小鼠分为模型组(n=8,16眼)、阳性对照组(n=8,16眼)和实验组(n=9,18眼),另选10只未给予任何处理的BALB/c小鼠作为正常组。实验组给予b FGF滴眼,每次5μL,每天3次,阳性对照组给予普拉洛芬滴眼,每次25μL,每天3次,模型组和正常组给予无菌生理盐水滴眼,连续干预5 d。观察小鼠干眼症状指标水平,用苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠眼球角膜组织病理变化;用过碘酸-希夫(PAS)染色法观察小鼠结膜杯状细胞数量;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠眼表组织中IL-10和IL-1β蛋白表达。结果干预后,实验组角膜荧光素钠染色评分、角膜炎症指数、泪膜破裂时间(BUT)和泪液分泌实验(SIt)分别为(10.22±2.06)分,0.09±0.02,(4.52±0.26)s,(5.26±0.52)mm/5 min,模型组分别为(11.02±2.25)分,0.52±0.06,(2.02±0.21)s,(4.00±0.32)mm/5 min,差异均有统计学意义(均P<0.01)。实验组和阳性对照组角膜上皮细胞完整、光滑,结膜穹窿部杯状细胞数量较模型组明显增多。实验组小鼠眼表组织中IL-10和IL-1β蛋白含量分别为(573.15±22.13),(174.25±12.36)μg·g^(-1),模型组分别为(236.48±41.28),(223.51±23.48)μg·g^(-1),差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 b FGF对小鼠干眼模型具有一定的治疗作用,可缓解干眼小鼠临床症状,抑制眼表鳞状上皮化生,其机制可能与其能够调节干眼眼表炎症反应有关。     

受体型酪氨酸磷酸酶D在乳腺癌干细胞特性中的影响

目的探讨受体型酪氨酸磷酸酶D(protein tyrosine phosphatase receptor type D,PTPRD)对乳腺癌干细胞特性的影响。方法采用小RNA干扰技术下调PTPRD在乳腺癌细胞系MDA-MB231中的表达;用乳腺球成球实验检测干细胞的自我更新能力;用全克隆形成实验检测细胞全克隆形成能力;用流式细胞技术检测CD44~+/CD24~-细胞比例;用小鼠成瘤实验分析乳腺癌细胞在小鼠中的成瘤能力;用免疫磁珠法分选CD44~+/CD24~-干细胞群及非干细胞群,用免疫荧光技术检测PTPRD在干细胞及非干细胞中的表达;用Western blot法检测蛋白表达。结果 PTPRD下调促进干细胞标记分子ALDH1及OCT-4的表达。乳腺癌干细胞中PTPRD表达显著低于非干细胞(P 0. 05)。PTPRD下调后,乳腺癌细胞的乳腺球形成数(147±3. 51)显著高于对照组(106±12. 5)(P 0. 05);全克隆形成比例[(35. 9±3. 4)%]显著高于对照组[(11. 2±5. 3)%](P 0. 05); CD44~+/CD24~-细胞的比例[(2. 88±1. 2)%]显著高于对照组[(0. 6±0. 4)%];乳腺癌细胞在裸鼠中成瘤能力显著上调(P 0. 05)。结论乳腺癌干细胞中PTPRD低表达,PTPRD可抑制乳腺癌干细胞的自我更新能力。     

超脉冲CO_2点阵激光联合重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶治疗痤疮凹陷性瘢痕疗效观察

目的探讨超脉冲CO_2点阵激光联合重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶治疗痤疮凹陷性瘢痕的临床应用价值。方法收集2015年10月至2016年10月在我科门诊就诊的痤疮凹陷性瘢痕患者86例,随机分成2组。试验组用超脉冲CO_2点阵激光联合重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶治疗痤疮凹陷性瘢痕,对照组单纯超脉冲CO_2点阵激光治疗。治疗后比较两组临床疗效、不良反应及安全性。结果 1个疗程治疗结束后3个月,实验组有效率98%,对照组有效率95%,两组比较差异无统计学意义。试验组创面愈合时间平均为8.5 d,红斑持续时间为16.6 d,满意率为91%;对照组创面愈合时间平均为10.4 d,红斑持续时间为18.6 d,满意率为86%,两组创面愈合时间及满意率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论超脉冲CO_2点阵激光联合重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶治疗痤疮凹陷性瘢痕能够减少不良反应,是一种安全、有效的治疗方法 。     

种植体周围炎对成骨细胞增殖分化及成骨功能影响的体外研究

利用体外分离培养的种植体周围炎来源和正常组织来源人成骨细胞（osteoblast,OB）,观察炎性微环境对其增殖、分化成熟的影响。探讨种植体周围炎对OB功能的影响,期望能为临床种植修复提供相关的理论基础。首先进行成骨细胞原代及传代培养,然后对细胞爬片进行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色,光镜下观察计数ALP阳性OB数,并将细胞爬片用茜素红进行钙结节染色,光镜下观察钙结节,计数并拍照,均用于成骨细胞鉴定;传代第三代细胞,收集细胞上清液分别进行ALP活性检测及应用放射免疫方法测定骨钙素（osteocalcin,OCN）含量。原代培养的细胞呈现OB的形态学特征,ALP染色阳性,钙结节茜素红染色呈橘红色钙化结节,此两项结果证实培养细胞为OB;传代细胞种植体来源的细胞,ALP阳性OB数量减少,钙结节数量及骨钙素数值降低。种植体周围炎引发的炎性微环境降低成骨细胞的增殖分化及成骨功能。     

正交法优选愈骨葆方的最佳水提取工艺

采用正交试验方法研究愈骨葆方的最佳水提取工艺。通过血清药理学,以提取物对成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)的活性的影响作为考察指标,采用L_9(3~4)正交表设计试验,对加水量(A)、加热时间(B)、浸泡时间(C)及煎煮次数(D)4个因素进行考察,分析最佳提取条件,并验证该工艺的有效性。通过该实验得出愈骨葆方最佳提取工艺:8倍加水量,加热时间60min,浸泡时间30 min,煎煮1次。按此工艺获得的愈骨葆方含药血清能显著地促进成骨相关基因的转录。该实验建立了愈骨葆方的最佳提取工艺,为该复方中药的开发利用提供了试验依据。     

龙血竭胶囊合九华膏对环状混合痔术后创面促愈作用及对新生血管形成的影响

目的:观察龙血竭胶囊合九华膏对环状混合痔术后恢复的疗效,及其对创面和血清血管内皮生长因子的影响。方法:将190例患者根据入院先后顺序,随机按数字表法分为对照组和观察组各95例。两组患者均行分段多层次弧切缝合加注射术,术后常规进行抗生素静脉滴注预防感染;并内服芪蓉润肠口服液,20 mL/次,3次/d,便后采用苦参汤伤口清洗。对照组采用马应龙麝香痔疮膏涂抹肛门,以无菌纱布覆盖创面,1 g/次,1~2次/d。观察组以龙血竭胶囊合九华膏涂抹肛门,以无菌纱布覆盖创面,1 g/次,1~2次/d。两组疗程均为10 d。记录术后第3,10天创面的疼痛、水肿、创面渗液、创面面积和创面肉芽组织情况,记录创面愈合时间;评价术后10 d创面毛细血管含量,采用免疫组化评价创面血管内皮生长因子(VEGF),碱性成纤维生长因子(b FGF)表达情况;检测治疗前后血清血小板源性生长因子(PDFG),血管内皮生长因子(VEGF),碱性成纤维生长因子(b FGF)。结果:术后10 d,观察组临床疗效总有效率为91.58%,优于对照组的77.89%(χ~2=6.877,P0.01);观察组在术后3 d和10 d疼痛、水肿、创面渗液、创面面积和创面肉芽组织评分均低于同期对照组(P0.01);观察组创面平均愈合时间为(11.5±2.1)d,低于对照组的(13.7±2.5)d,比较差异有统计学意义(P0.01);观察组创面毛细血管数目多于对照组(P0.01),观察组创面VEGF和b FGF表达的MOD值高于对照组(P0.01);治疗后观察组患者血清PDFG,VEGF和b FGF水平均高于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。治疗过程中未发现与龙血竭联合九华膏相关不良反应。结论:采用龙血竭胶囊合九华膏治疗环状混合痔术后创面的治疗,能促进创面的修复,缩短愈合时间,其作用机制可能与调节血清和创面VEGF,PDFG,b FGF等因子表达,促进创面毛细管血管形成,促使肉芽组织生长与修复有关。     

扶正抗癌方通过PTEN/PI3K/Bad通路调控肺癌A549细胞增殖与凋亡

目的:观察扶正抗癌(FZKA)方对肺癌细胞A549增殖的调控作用,探讨其作用的分子机制。方法:以非小细胞肺癌细胞A549为研究对象,以FAKA方0.8,1.2,1.6,2.0,2.4,2.8,3.2 g·L~(-1)干预,空白组,分别孵育24,48,72 h后,设立采用噻唑蓝(MTT)比色法检测FZKA方对A549细胞活力的影响;以FAKA方1.2,1.6,2.0 g·L~(-1)干预,设立空白组,培养24 h后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测FZKA方对A549细胞人第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)mRNA水平的影响;孵育24 h后,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析FZKA方对PTEN,磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K),磷酸化的促凋亡蛋白Bad(Phospho-Bad,p-Bad)表达的影响并探讨其相关性。结果:与空白组比较,FZKA方能明显抑制A549细胞增殖,处理24 h后,FZKA从0.8 g·L~(-1)开始,处理48,72 h后,FZKA方从0.4 g·L~(-1)开始,细胞存活率明显降低(P0.05,P0.01);与空白组比较,处理24 h后,FZKA方从0.8 g·L~(-1)开始以浓度依赖性上调PTEN mRNA和蛋白的表达(P0.05,P0.01),FZKA方从1.6 g·L~(-1)开始以浓度依赖性下调PI3K蛋白表达(P0.05,P0.01),从2 h开始以时间依赖性上调p-Bad蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:FZKA方可通过上调PTEN来调控下游PI3K/Akt/Bad通路相关蛋白的表达进而抑制A549的增殖,促进肺癌细胞凋亡。     

人牙本质涎蛋白对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的 :观察人牙本质涎蛋白对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响。方法 :分对照组和实验组 ,对照组是转染不含目的基因的空白质粒 pcDNA3的培养上清 ,实验组是转染pcDNA3 -hDSP重组质粒的培养上清。取第 5代人牙乳头间充质细胞 ,接种于 96孔板 ,对照组 6孔 ,实验组 10孔 ,用MTT法检测hDSP对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖的影响 ,用碱性磷酸酶检测试剂盒检测hDSP对体外培养的人牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果 :hDSP能明显抑制体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖 (P <0 .0 1) ,但能促进细胞内和培养上清中碱性磷酸酶的分泌 (P <0 .0 1)。结论 :hDSP能促进人牙乳头间充质细胞的分化和矿化     

不同浓度bFGF对犬骨髓基质细胞增殖、分化影响的实验研究

目的：研究不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factot,bFGF）对体外培养的beagle犬骨髓基质细胞（bone marrow stromal ceils，BMSCs）增殖和分化的影响。方法：体外培养第2代BMSCs的培养液中分别加入不同浓度（25、50、100、200ng／mL）的bFGF，连续6d倒置显微镜下动态观察BMSCs的形态和生长情况．行MTT比色、碱性磷酸酶（alkalin ephosphatase，ALP）活性定量检测、ALP和Von Kossa染色。结果：浓度为50ng／mL的bFGF可明显促进犬的BMSCs增殖（P〈0．05），但无显著促进犬BMSCs分化的作用（P〉0．051。结论：bFGF能有效促进犬BMSCs的增殖，且与bFGF剂量有关。