碱性成纤维细胞生长因子对生长板软骨细胞增殖与分化的影响

背景：体外培养软骨细胞经历多次传代后，其增殖能力将逐渐退化。实验表明，碱性成纤维细胞生长因子可促进软骨细胞增殖，并可能影响软骨细胞的表型与分化。目的：观察碱性成纤维细胞生长因子对生长板软骨细胞增殖和分化的影响，并筛选其用于体外软骨细胞培养的最佳剂量。设计、时间及地点：以细胞为观察对象的观察对比实验，于2004—10／2005—02在暨南大学医学院生化教研室组织工程实验室完成。材料：选用12只新西兰白兔用于分离软骨细胞，碱性成纤维细胞生长因子由英国PeproTech公司生产。方法：分离并在低血清条件下培养兔生长板软骨细胞。根据实验需要加入0，1，2．5，5，10，25，50及100μg／L8个剂量的碱性成纤维细胞生长因子，进行各项指标观察。主要观察指标：应用改良四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖倍数；应用羟脯氨酸法测定软骨细胞胶原产量：应用酶动力学方法测定碱性磷酸酶活性。结果：①碱性成纤维细胞生长因子剂量在5～100μg／L范围内可以促进软骨细胞增殖，并以25μg／L时刺激效果最为显著。②当碱性成纤维细胞生长因子剂量高于25μg／L时，软骨细胞的胶原合成被抑制。③当碱性成纤维细胞生长因子剂量高于1ug／L时，软骨细胞的碱性磷酸酶活性被抑制。结论：碱性成纤维细胞生长因子可以刺激生长板软骨细胞增殖，并在剂量高于25μg／L时抑制生长板软骨细胞的分化。     

脑性瘫痪儿童的骨代谢生化特点

目的:骨源性碱性磷酸酶与骨钙素在骨的形成过稃中发挥着重要的调节作用,降钙素、甲状旁腺激素是调节体内Ca代谢的重要激素.测定脑性瘫痪患儿血钙、磷、骨源性碱性磷酸酶、骨钙素、降钙素、甲状旁腺激素水平,以了解其骨代谢生化特点及其相关的调控因素.方法:①对象及分组:选择2005-07/2007-07湖南省儿童医院康复中心住院的脑瘫患儿120例为脑瘫组:男82例,女38例;年龄3个月～3岁.按2005年昆明全国脑瘫会议分型标准分为痉挛型印例,不随意运动型印例:按脑瘫程度分为中轻度36例,中度42例,重度42例.同期体检的健康的100名儿童为对照组:男57名,女43名,年龄3个月～3岁.②检测指标及评估:采用全自动分析仪测定两组血清钙、磷水平;用小儿骨源性碱性磷酸酶试剂盒金标法测定骨碱性磷酸酶;用放射免疫吸附法测定骨钙素、降钙素、甲状旁腺激素,并进行两组间、不同程度与类型脑瘫患儿间比较.结果:①脑瘫组忠儿血钙、磷与对照组比较差异无显著性(P＞0.05),骨碱性磷酸酶,骨钙素水平则明显高于对照组(P＜0.01),甲状旁腺激素、降钙素与对照组差异无统计学意义(均P＞0.05).②脑瘫组中痉挛型组血骨钙素与不随意运动型组比较,差异无显著性(P＞0.05),但前者血甲状旁腺激素值高于后者,骨碱性磷酸酶值、降钙素值则低于后者,差异有显著性(均P＜0.05).③重度脑瘫患儿的甲状旁腺激素高于对照组、降钙素低于对照组(均P＜0.01);重度脑瘫患儿骨钙素、甲状旁腺激素值高于轻度和中度(均P＜0.05),降钙素低丁轻度和中度(均P＜0.05).结论:脑瘫患儿血清钙、磷可以通过机体自身血甲状旁腺激素、降钙素调控保持正常,而骨碱性磷酸酶、骨钙素水平升高则提示脑瘫患儿骨矿化不足,骨形成旺盛,骨重建活跃.     

碱性成纤维细胞生长因子基因转移对成骨细胞生长特性的影响

目的:碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)对骨组织的损伤有修复作用,许多体内外实验均表明外源性植入碱性成纤维细胞生长因子能明显促进骨形成过程。观察碱性成纤维细胞生长因子基因转移对成骨细胞生长特性的影响。方法:实验于2003-01/07在解放军广州军区总医院医学实验科完成。成年雄性新西兰白兔,体质量1.5～2.5kg,采用聚乙烯亚胺(jetPEITM)介导真核分泌表达载体pcDNA3.1-bFGF及非分泌表达载体pEGFP-C3-bFGF转染原代培养的成骨细胞,消化收集转染成骨细胞以及未经转染的成骨细胞,利用血细胞计数器进行细胞计数,绘制细胞生长曲线,同时测定DNA浓度、碱性磷酸酶及骨钙素含量的变化。结果:①未转染的细胞在第8天进入稳定期,而经转染的细胞在第10天才进入稳定期。未转染细胞最终达到的细胞数量为(1.70±0.02)×109L-1,而经转染的细胞数量为(2.10±0.03)×109L-1,差异显著(P<0.05)。②经pcDNA3.1-bFGF转染的成骨细胞的DNA量最高,约为(255±20)mg/L,而经pEGFP-C3-bFGF转染的成骨细胞的总DNA量约为(225±20)mg/L,未经转染的成骨细胞的总DNA量为(100±10)mg/L。③pcDNA3.1-bFGF转染的成骨细胞培养至第9天后,碱性磷酸酶分泌量为(8.0±0.22)IU/mL;而未转染的成骨细胞碱性磷酸酶分泌量为(13.12±0.18)IU/mL。经pEGFP-C3-bFGF转染的成骨细胞所分泌的碱性磷酸酶与未经转染的细胞的分泌量相当,约为(12.56±0.24)IU/mL。④随着培养时间的延长,骨钙素分泌量的变化趋势与碱性磷酸酶相同,但重组质粒转染成骨细胞与未转染细胞最终分泌的骨钙素量差异无显著性(P>0.05)。结论:①经pcDNA3.1-bFGF及pEGFP-C3-bFGF重组质粒转染后,成骨细胞的生长特性有一定的变化,与添加外源碱性成纤维细胞生长因子的影响基本相同。②pcDNA3.1-bFGF转染的细胞分泌的碱性成纤维细胞生长因子能够促进细胞分裂增殖,降低碱性磷酸酶的表达,而pEGFP-C3-bFGF转染的细胞不能分泌表达蛋白,难以发挥其生物学功能。     

碱性成纤维细胞生长因子对兔骨髓基质细胞生物行为的影响

目的:观察兔骨髓基质细胞(MSC)经不同剂量碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)刺激后,促血管内皮细胞增生的重要递质血管内皮细胞生长因子(VEGF)在MSC中的表达及分布情况,并与相应成骨情况做一对比,借以预测MSC经bFGF刺激后成骨效能与成血管效能的变化,探讨其对剂效关系。方法:取兔双侧股骨MSC,采用MSC体外培养技术,分别以不同剂量bFGF刺激细胞,并设立空白对照组。培养5d后,进行细胞形态(HE染色)、增殖情况(细胞记数法与MTT法)、碱性磷酸酶(改良钙钴法染色)、钙化结节(图像分析)、VEGF阳性细胞率(免疫组化染色)等项目的检测。结果:不同剂量组间在细胞记数法、MTT法检测、碱性磷酸酶活性、矿化面积百分率、VEGF阳性细胞率5项观测指标上F值分别为65.50,22.47,11.12,8.33和224.37,P<0.01,差别具有显著意义,结合各组均值来看,bFGF剂量为1200U/mL左右时效果最佳。结论:应用bFGF在促进MSC增殖的同时,还可促进促血管内皮细胞增生的重要递质-VEGF的表达,其应用剂量与效果之间存在明显相关关系。bFGF应用剂量为1200U/mL左右时,其促进MSC表达VEGF及促进细胞增殖作用同时达到最佳效果,超过此应用剂量,两者则有下降趋势。     

以天麻和钩藤为主的中药制剂干预体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠碱性成纤维细胞生长因子及其受体的表达

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子及其受体在体外模拟脑缺血再灌注损伤中的表达变化及以天麻和钩藤为主的中药制剂——抗呆Ⅰ号对其的影响。 方法：实验于2002-03／2004-04在科学实验中心完成。先分别进行大鼠大脑皮质星形胶质细胞和神经元的分离纯化培养及体外模拟脑缺血再灌注损伤模型的建立，然后分别进行下列实验：①按随机数字表法将传代后培养5d的星形胶质细胞分为正常对照组、缺血再灌注模型组和缺血用药组（应用抗呆Ⅰ号），在体外模拟脑缺血4h和再灌注3h，18h，24h，36h，48h和72h后行碱性成纤维细胞生长因子的免疫细胞化学染色。②用再灌注18h后收集的星形胶质细胞条件培养液、经抗呆Ⅰ号作用的星形胶质细胞条件培养液及星形胶质细胞条件培养液与抗呆Ⅰ号联合应用以1：5的浓度来培养损伤后的神经元。再对其培养的神经元行碱性成纤维细胞生长因子受体的免疫组化染色。 结果：①体外培养大鼠的大脑皮质星形胶质细胞在模拟脑缺血再灌注损伤后各时相点分泌碱性成纤维细胞生长因子的能力均显高于正常对照组（P〈0．05—0．01）；除再灌注72h外，其余各时相点缺血用药组碱性成纤维细胞生长因子的表达水平均显高于缺血再灌注模型组（P〈0．05—0．01）。②星形胶质细胞条件培养液组、经抗呆Ⅰ号作用的星形胶质细胞条件培养液组和联合应用组脑缺血再灌注损伤后各时相点的碱性成纤维细胞生长因子受体表达水平大多显高于缺血再灌注模型组（P〈0．05-0．01），均在再灌注18h时达到高峰，其作用强度为经抗呆Ⅰ号作用的星形胶质细胞条件培养液〉联合应用〉星形胶质细胞条件培养液。 结论：体外模拟脑缺血再灌注损伤使星形胶质细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的能力增强，星形胶质细胞条件培养液能促进受损神经元碱性成纤维细胞生长因子受体的表达。抗呆Ⅰ号可增强受损神经组织的分泌功能，促进其损伤后的修复。     

疫苗生产传代细胞系Vero的同工酶分析研究

作为世界卫生组织(WHO)推荐的可用于制备人用疫苗生产的传代Vero细胞系(非洲绿猴肾瘤细胞),采用其作为病毒培养基质用于生产,具有无外源因子污染,易大规模生产以及生产工艺简单等诸多优点。Vero细胞狂犬病疫苗、乙型脑炎疫苗、脊髓灰质炎疫苗均已研制成功,疫苗使用后证明其安全     

胚胎脊髓移植联合应用bFGF对脊髓神经组织损伤的早期保护作用

目的 探讨脊髓损伤后,联合应用胚胎脊髓（FSC）移植和外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对损伤脊髓组织早期Ca^2＋、Mg^2＋的影响.方法利用Wistar大鼠建立脊髓损伤模型;造模后,A组经蛛网膜下腔导管注入5 ml FSC细胞悬液;B组注入20 μl bFGF与FSC细胞悬液;C组（对照组）不做处理.术后6 h、24 h取A组、B组和C组动物损伤区脊髓组织测定水和Ca^2＋、Mg^2＋含量;术后5 d取损伤脊髓组织电镜下观察结构变化.结果 C组损伤区脊髓组织水含量增多,Ca^2＋水平升高,Mg^2＋水平下降,白质内髓鞘结构紊乱,囊性变严重;A组和B组上述变化均较C组改善.结论脊髓损伤后应用FSC移植和bFGF可减轻离子失衡,从而对继发性损害有抑制作用.     

PTEN与TGF-β1在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的探讨第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(phosphatase and tension homolog deleted on chromosome ten, PTEN)、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1, TGF-β1)在上皮性卵巢癌患者中的表达及临床意义。方法选取我院2015年1月—2017年12月收治的上皮性卵巢癌100例作为上皮性卵巢癌组,另选取同期收治的卵巢良性肿瘤40例作为卵巢良性肿瘤组。采用免疫组织化学染色法分析PTEN与TGF-β1在上皮性卵巢癌和卵巢良性肿瘤组织中的表达情况,并探讨PTEN、TGF-β1与上皮性卵巢癌病情程度的关系以及二者阳性表达的相关性。结果 PTEN在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率为38.00%低于卵巢良性肿瘤组织中的80.00%(P0.01);TGF-β1在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率为76.00%明显高于卵巢良性肿瘤组织中的40.00%(P0.01)。TGF-β1在Ⅲ～Ⅳ期上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率为88.24%高于Ⅰ～Ⅱ期上皮性卵巢癌组织中的50.00%(P0.01);PTEN在Ⅰ～Ⅱ期上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率为65.62%明显高于Ⅲ～Ⅳ期上皮性卵巢癌组织中的25.00%,在有淋巴结转移的上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率为28.12%低于无淋巴结转移的上皮性卵巢癌组织中的55.56%,差异均有统计学意义(P0.01)。PTEN与TGF-β1在上皮性卵巢癌组织中的表达呈负相关(r=-0.235,P=0.018)。结论 TGF-β1参与上皮性卵巢癌的发生,并与上皮性卵巢癌病情进展密切相关。TGF-β1过度表达伴随PTEN表达下降或部分缺失,与上皮性卵巢癌的发生发展、细胞耐药密切相关。     

“碱性成纤维细胞生长因子”治疗褥疮、烧伤的临床观察

应用bFGF治疗褥疮及烧伤,bFGF对轻度、中度褥疮及烧伤疗效很好,对重度褥疮亦有明显疗效。bFGF使创面干燥,结痂快,肌肉等软组织生长良好,bFGF高效、简便、无毒、无副作用,值得临床应用。     

术中应用携氧液对高血压脑出血患者血清髓鞘碱性蛋白的影响

背景：在高血压脑出血的治疗中，目前临床上应用多种方式改善机体缺氧，术中应用携氧液是否对高血压脑出血患者神经细胞有保护作用?目的：研究高血压脑出血术中应用携氧液对患者神经元特异性烯醇化酶的影响及脑保护作用。设计：随机对照的实验研究。地点和对象：研究地点为南京医科大学脑科医院临床麻醉研究室，对象为1999／2001年南京脑科医院收治的高血压脑出血手术患者。选择头颅CT示出血量40～60mL，美国麻醉协会(ASA)分级为Ⅰ～ⅡI级，其中男26例，女14例，平均62岁。随机分为携氧液组和对照组。方法：两组术中分别采用输注携氧液和平衡液。主要观察指标：分别观察两组患者术前和术后12h的血清髓鞘碱性蛋白的浓度，术前和术后第7天的格拉斯格评分以及手术各阶段的颅内压力。结果：两组颅内压在手术前和诱导后无差别，在清除血肿至术毕，携氧液组颅内压[(1．87&;#177;0．24，1．73&;#177;0．18)kPa]明显低于对照组[(2．10&;#177;0．38，1．92&;#177;0．22)kPa][(t=2．37，P&;lt;0．05；t=3．06，P&;lt;0．01)]；术后12h，携氧液组血清髓鞘碱性蛋白[(4．1&;#177;1．35)μg／L]明显低于对照组[(5．2&;#177;1．42)μg／L](t=2．58，P&;lt;0．05)。术后第7天，携氧液组格拉斯哥评分(13．6&;#177;0．88)明显高于对照组(12．7&;#177;1．22)(t=2．74，P&;lt;0．05)。结论：在高血压脑出血术中早期输入携氧液对血肿脑周围组织提供早期干预，有效减轻脑水肿，改善脑组织缺血缺氧，挽救血肿周围可逆性损伤的神经元是一项有效的措施，有利于高血压脑出血患者的脑保护。