生育酚结合蛋白基因重组腺相关病毒的制备及抗癌作用

目的 制备生育酚结合蛋白(TAP)重组腺相关病毒,并探讨其对前列腺癌生长的作用.方法 构建重组腺相关病毒质粒pSNAV-TAP-EGFP,酶切、聚合酶链反应(PCR)、测序.225 cm2细胞培养瓶中,接种293T细胞,以重组质粒转染.扩增、纯化病毒,并转染DU-145细胞,噻唑蓝(MTT)比色法观察第2、4、6天的细胞增殖.结果 成功构建pSNAV-TAP-EGFP质粒,并制备滴度6.4×1011vg/ml、纯度95%的rAAV2-TAP.该病毒转染DU-145细胞后TAP表达量明显上升.转染后第4天,TAP转染组的细胞吸光度(A值)0.546±0.072,对照组以及空载体转染组的A值分别为0.673±0.015、0.638±0.051,生长明显受到抑制(P＜0.05).至第6天各组细胞生长差异更显著.结论 成功制备高滴度的rAAV-TAP-EGFP病毒,并可抑制前列腺癌细胞的生长.

Abstract：

Objective To produce recombinant rAAV2 virus carrying α-tocopherol associated protein (TAP) and to observe its effect on prostate cancer cells. Methods The pSNAV-TAP-EGFP plasmid was constructed and digested with restriction enzyme. Polymerase chain reaction (PCR), and sequence analysis were performed to identify the correct recombinant clones. The plasmid was transfected into 293T cells to produce virus. The virus was amplified and purified. DU-145 cells were infected by rAAV-TAPEGFP. Cell growth was detected by MTT assay. Results The pSNAV-TAP-EGFP was constructed successfully. The titer of rAAV2-TAP-virus was 6. 4 × 1011 vg/ml and the purity was 95%. The rAAV-TAP-EGFP was infected into the DU-145 cells with high efficiency. The expression of TAP was increased significantly by real-time PCR. MTT assay showed differences at the 4th day. The cellular absorbance value in the TAP transfection group, control group and empty vector transfection group was 0. 546 +0. 072, O. 673 +0. 015,and 0. 638 + 0. 051 (P ＜ 0. 05 ). The differences became more significant after 6 days. Conclusion High tier recombinant adeno-associated virus rAAV2-TAP-EGFP was obtained, which was able to inhibit the proliferation of prostate cancer cells.     

生育酚结合蛋白对氧化应激所致前列腺癌细胞凋亡的调控作用

目的 观察生育酚结合蛋白(TAP)对氧化应激所致前列腺癌细胞凋亡的调控作用.方法 脂质体法分别转染pEGFP-N3-TAP质粒及空载体质粒进入前列腺癌细胞PC-3.以过氧化氢(H2O2)刺激PC-3细胞构建氧化应激模型,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测TAP的表达,流式细胞技术检测各组细胞的凋亡.结果转染TAP后的PC-3细胞中TAP表达量明显升高.RT-PCR结果显示,H2O2单独或联合促氧化剂丁胱亚磺酰亚胺(BSO)刺激细胞后TAP的mRNA表达量分别为(2.457±0.113)、(3.643±0.162)较对照组(0.721±0.048)显著上升,差异有统计学意义(P<0.01);在无H2O2刺激的对照组PC-3、PC-3-vector、PC-3-TAP细胞的凋亡率分别为2.42%、3.69%、15.37%;在H2O2刺激下,各组凋亡率分别为7.56%、16.71%、43.93%;联合应用BSO与H2O2,各组凋亡分别为13.73%、26.36%、49.19%.结论 TAP基因可参与前列腺癌细胞对氧化应激的应答反应,并促进氧化应激所致的前列腺癌细胞凋亡.     

马智教授从肝论治内科杂病经验撷要

马智教授,从医40余年,学验俱丰。他认为当今社会中情志因素逐渐成为各种内科杂病的常见发病原因或诱因,故在内科杂病治疗中强调从肝论治。肝郁为其根本,故疏肝解郁为治肝的通法,并将其独创的具有疏肝理气作用的解郁汤加减应用于各种内科杂病的治疗中。文章列举了马老用解郁汤加减治疗不寐、胸痹、郁证、胃痛4个典型病例,对临床有重要的指导意义。     

防自调输液滴数控制器临床应用效果分析

目的验证防自调输液滴数控制器在临床中的使用效果.方法 将300例患者做为对照组,300例患者做为临床使用组,比较2组患者自行调节输液滴数的发生率.结果 对照组的自行调节率26.33%,临床使用组竟无1例自行调节者.结论 防自调输液滴数控制器操作简单、使用方便、实用性强、效果显著.     

农村心脑血管病发病率及其危险因素的研究

目的：探讨本市农村冠心病,脑卒中的发病率与各种危险因素之间的关系。方法：对3512例人群进行冠心病,脑府中随访前瞻性调查。结果：男,女冠心病,脑卒中的发病率相近（P＞0．05）,随着年龄的增大而增高,高血压的发病率比1991年发病率高,对高血压的知晓率,治疗率,控制率低,吸烟,超重,高血压是冠心病,脑卒中的主要危险因素,饮酒与不饮酒冠心病,脑卒中发病率无显性差异,结论：应提高农民对防病治病的意识,加强农村冠心病,脑卒中的防治工作。     

核应急情况下稳定碘预防策略初探(一)

目的探讨核应急情况下稳定碘预防准备和实施的策略。方法以国际核事故医学应急准备与响应的经验和教训为基础,参考世界卫生组织和国际原子能机构等的相关报告、建议和指南。结果提出了核应急情况下稳定碘预防的时机和持续时间、不同受照人群的用药剂量、干预水平、禁忌证、剂型和规格选择、储备与发放、实施程序等方面的基本要求或实用建议。结论本指南为计划和实施核应急情况下稳定碘预防这一重要的公共卫生行动提供了实用的技术依据。     

NF-κB在心肌梗死中表达量的变化及其意义

目的：为了研究NF-κB p65表达量在心肌梗死中的变化。方法：对大鼠进行心肌梗死造模,而后运用半定量PCR和Western blot技术分别在mRNA和蛋白水平上检测梗死心肌组织中p65表达量的变化。结果：造模成功,且在手术组中,p65在mRNA和蛋白水平上的表达量明显高于假手术组和正常组（P〈0.05）。结论：NF-κB p65的表达量与心肌梗死有密切关系。     

哮病风哮证的研究治疗进展

风哮证是哮病发作期的常见证候类型,风哮的夙根为风邪内伏,分外风与内风,外风多指风伤于肺,内风有脾风、肝风之别,风邪善行、数变,治疗以祛风解痉,降气化痰为法,明辨外风、内风,肺、脾、肝兼顾.     

螺旋CT扫描对胃肠道间质瘤的诊断价值研究

目的：探讨螺旋CT扫描检查对胃肠道间质瘤（GIST）的诊断价值。方法：选择我院拟诊的GIST 21例,均在术前行16排螺旋CT扫描,再对术后病理或免疫组化检查证实的病例进行对照分析。结果：肿瘤发生于胃13例,发生于小肠8例（十二指肠3例,空肠4例,回肠1例）;恶变3例。CT平扫显示紧贴腔壁软组织密度肿块;增强动脉期呈不均匀轻度强化,静脉期呈均匀明显强化。肿块最大者位于回肠,范围广泛,累及多段肠壁。2例中央可见囊变坏死区,未见钙化影。术前CT诊断与术后病理或免疫组化检查符合率为85.7%。结论：16排螺旋CT扫描对GIST的定位及定性诊断具有较高价值。     

16排螺旋CT诊断胰腺实性假乳头状瘤12例

胰腺实性假乳头状瘤（SPTP）是一种极为少见的胰腺肿瘤,占胰腺外分泌肿瘤的1％～2％,由于其临床症状不典型,不易与胰腺其他肿瘤鉴别,术前误诊率较高。2008年以来,我们采用16排螺旋CT诊断胰腺实性假乳头状瘤12例。现分析报告如下。