生育酚结合蛋白基因重组腺相关病毒的制备及抗癌作用

目的 制备生育酚结合蛋白(TAP)重组腺相关病毒,并探讨其对前列腺癌生长的作用.方法 构建重组腺相关病毒质粒pSNAV-TAP-EGFP,酶切、聚合酶链反应(PCR)、测序.225 cm2细胞培养瓶中,接种293T细胞,以重组质粒转染.扩增、纯化病毒,并转染DU-145细胞,噻唑蓝(MTT)比色法观察第2、4、6天的细胞增殖.结果 成功构建pSNAV-TAP-EGFP质粒,并制备滴度6.4×1011vg/ml、纯度95%的rAAV2-TAP.该病毒转染DU-145细胞后TAP表达量明显上升.转染后第4天,TAP转染组的细胞吸光度(A值)0.546±0.072,对照组以及空载体转染组的A值分别为0.673±0.015、0.638±0.051,生长明显受到抑制(P＜0.05).至第6天各组细胞生长差异更显著.结论 成功制备高滴度的rAAV-TAP-EGFP病毒,并可抑制前列腺癌细胞的生长.

Abstract：

Objective To produce recombinant rAAV2 virus carrying α-tocopherol associated protein (TAP) and to observe its effect on prostate cancer cells. Methods The pSNAV-TAP-EGFP plasmid was constructed and digested with restriction enzyme. Polymerase chain reaction (PCR), and sequence analysis were performed to identify the correct recombinant clones. The plasmid was transfected into 293T cells to produce virus. The virus was amplified and purified. DU-145 cells were infected by rAAV-TAPEGFP. Cell growth was detected by MTT assay. Results The pSNAV-TAP-EGFP was constructed successfully. The titer of rAAV2-TAP-virus was 6. 4 × 1011 vg/ml and the purity was 95%. The rAAV-TAP-EGFP was infected into the DU-145 cells with high efficiency. The expression of TAP was increased significantly by real-time PCR. MTT assay showed differences at the 4th day. The cellular absorbance value in the TAP transfection group, control group and empty vector transfection group was 0. 546 +0. 072, O. 673 +0. 015,and 0. 638 + 0. 051 (P ＜ 0. 05 ). The differences became more significant after 6 days. Conclusion High tier recombinant adeno-associated virus rAAV2-TAP-EGFP was obtained, which was able to inhibit the proliferation of prostate cancer cells.     

抗原抗体联合诊断幽门螺旋杆菌在社区的临床应用价值

目的：研究基于免疫胶体金技术建立的 Hp抗原抗体联合诊断法在社区医院早期诊断 Hp感染的实用性是否优于其他方法。方法对2014年8月至2015年12月期间分别从北京、武汉、广州及深圳四地收集符合纳入标准的208例患者同步完成快速尿素酶（RUT）、微生物学培养、13C-尿素呼气、血清 Hp-IgG、粪便 HpSA（SAT）、病理组织切片染色检查,并比较上述检查项目Hp检出率的差异。结果 Hp感染阳性患者占总受检样本53．85％,Hp-IgG联合SAT诊断 Hp的敏感性和特异性分别为90．18％和97．92％;相较于其他非侵入检测法,Hp-IgG与SAT联合能显著提高对 Hp诊断的准确性和诊断效率。结论血清IgG联合SAT检测法可作为基层医院诊断 Hp的首选方法,该法适用于广大不发达地区或城市社区医院用于 Hp感染的早期诊断。     

复方茶多酚含漱液在口腔护理中的应用

口腔感染是神经外科病人易发生的并发症之一，由于颅内各种疾病，使病人手术前后均存在不同程度的昏迷，易发生口腔感染。所以，需要每天坚持做口腔护理。传统的口腔护理常采用生理盐水清洗口腔或根据pH值采用弱酸、弱碱性溶液擦拭口腔的方法，效果不太理想，近两年来，我们采用复方茶多酚含漱液(商品名：口灵)预防口腔感染，取得了良好的效果。现总结如下。     

体外受精/卵胞质内单精子显微注射-胚胎移植技术出生的学龄期儿童内分泌状况的随访研究

目的:探讨通过体外受精/卵胞质内单精子显微注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)技术出生的学龄期儿童内分泌状况是否与同年龄段自然受孕出生儿童存在差异。方法:选择通过IVF/ICSI-ET出生的6~11岁学龄期儿童(IVF/ICSI组)87例,检测其代谢及内分泌情况,并随机抽取同年龄段自然受孕出生儿童(NC组)74例作为对照。结果:IVF/ICSI组平均血红蛋白浓度(MCHC)(334.59±10.17 g/L vs 330.74±13.58 g/L)、血糖水平(4.57±0.33 mmol/L vs 4.45±0.27 mmol/L)均高于NC组,差异有统计学意义(P0.05)。红细胞数、白细胞数、血小板数、平均红细胞体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白量(MCH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺素(TSH)、空腹胰岛素(0 h INS)及空腹生长激素(0 h GH)组间差异无统计学意义(P0.05)。对影响MCHC的因素进行多重线性回归,是否为双胎、儿童身高对MCHC有影响;对影响血糖的因素进行多重线性回归,结果是否为试管婴儿、儿童性别、身高对血糖有影响。结论:IVF/ICSI-ET出生儿童内分泌状况与自然妊娠出生儿童无明显差异,空腹血糖(0 h GLU)水平高于自然妊娠出生儿童,但均在正常范围内。     

卵巢储备功能低下高龄患者微刺激助孕失败后拮抗剂方案成功助孕1例及文献复习

高龄卵巢功能减退患者的辅助生殖助孕是目前生殖领域的难点。高龄患者助孕,医者需要衡量的不仅是获卵数,还有胚胎质量及最终的抱婴率。本文报道了1例高龄患者采用微刺激促排卵及拮抗剂促排卵助孕获得的不同妊娠结局,探讨拮抗剂方案在高龄、卵巢功能减退患者中应用的利弊。     

抗苗勒管激素在生殖内分泌诊断中的临床价值及应用前景

抗苗勒管激素属于转化生长因子β家族成员,是一种二聚糖蛋白,调控性分化。在男性性分化时,抗苗勒氏管激素由支持细胞产生,诱导苗勒管系统的退化,而午非管则分化为附睾、输精管及精囊。而女性由于缺乏雄激素导致向女性生殖系统分化,苗勒管分化成输卵管、子宫及阴道的上部。AMH调控女性卵泡的发育,当缺乏AMH时,导致大量原始卵泡向生长卵泡转化,引发原始卵泡池的耗竭。抗苗勒氏管激素对卵泡发育、卵巢肿瘤及相关疾病(如PCOS)的发生发展中起重要作用,可用于卵巢储备功能的预测、PCOS的诊断、妇科肿瘤的随访,广泛应用于生殖内分泌领域。因其在临床有广泛的应用前景,因此本文就AMH的研究进展做一综述,以期能为相关的临床工作提供参考。     

不同促排卵方案对宫腔内人工授精妊娠结局的影响

目的探讨不同促排卵方案对宫腔内人工授精(IUI)妊娠结局的影响。方法收集2009年4月至2014年4月期间在本院生殖中心,采用自然周期(NC)和克罗米芬(CC)、来曲唑(LE)、人绝经期促性腺激素(HMG)、CC+HMG和LE+HMG 5种促排卵方案用于IUI共2 528周期,并对其临床资料进行回顾性分析。结果 (1)NC组、CC组、LE组、HMG组、CC+HMG组、LE+HMG组的临床妊娠率分别为9.49%、13.74%、14.95%、15.73%、19.13%、21.80%;5个促排卵组的临床妊娠率高于NC组,差异具有统计学意义(P0.05);LE+HMG组临床妊娠率高于CC组、LE组、HMG组,差异亦具有统计学意义(P0.05),与CC+HMG组比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)NC组、CC组、LE组、HMG组、CC+HMG组和LE+HMG组多胎妊娠率分别0%、4.26%、2.38%、9.88%、9.52%、1.72%;促排卵周期组总多胎妊娠率及其中HMG组、CC+HMG组多胎妊娠率高于NC组,差异具有统计学意义(P0.05);5个促排卵组多胎妊娠率组间比较无统计学差异(P0.05)。(3)NC组、CC组、LE组、HMG组、CC+HMG组和LE+HMG组自然流产率、异位妊娠率的组间比较无统计学差异(P0.05)。结论促排卵治疗可提高IUI的临床妊娠率,对自然流产率和异位妊娠率无明显影响,但增加多胎妊娠率。LE+HMG方案可以提高临床妊娠率,多胎妊娠率和自然流产率较低,值得在临床推广。     

两种子宫内膜准备方案对冷冻胚胎移植妊娠结局影响的临床随机对照研究

目的：比较月经规律患者冷冻胚胎移植周期两种子宫内膜准备方案对妊娠结局的影响。方法：采用单盲、前瞻性临床随机对照研究方法,选取2010年1月到2012年2月于中山大学孙逸仙纪念医院生殖中心行冷冻胚胎移植的月经规律、年龄≤40岁,可利用冷冻胚胎数≥3的139例患者。将患者随机分为自然周期组（NC组,70例）和激素替代周期组（HRT组,69例）,其中NC组中62例、HRT组中56例完成了冷冻胚胎移植。比较两组患者的内膜厚度、ET日的E2水平、周期取消率、着床率、妊娠率、临床妊娠率、继续妊娠率和早期自然流产率。结果：NC组和HRT组的周期取消率分别为11.43%和18.84%,着床率为16.97%和15.89%,妊娠率为38.70%和35.71%,临床妊娠率为35.48%和30.36%,继续妊娠率为29.03%和28.57%,早期自然流产率为13.64%和5.88%,两组比较均无显著差异（P〉0.05）。NC组的内膜厚度[（10.16±2.30）mm]厚于HRT组[（8.84±1.26）mm],胚胎移植日的E2水平[（157.48±88.46）ng/L]低于HRT组[（273.57±284.76）ng/L],均有显著差异（P〈0.05）。结论：NC与HRT准备子宫内膜对冷冻胚胎移植的妊娠结局无影响。     

卵泡期高孕激素状态下促排与微刺激方案在卵巢储备功能下降患者中的临床结局比较

  目的  卵巢储备功能下降（DOR）患者行试管婴儿助孕过程中,比较2种不同促排卵方案（卵泡期高孕激素下促排和微刺激方案）的助孕临床结局。  方法  回顾性分析2021年4月至2022年4月在昆明医科大学第一附属医院行第1代及第2代试管婴儿（IVF/ICSI）辅助生殖助孕治疗的DOR患者,共纳入294个周期,分为2组（A组:PPOS组,B组:微刺激组）,比较2组患者在促排卵过程中的用药情况、胚胎情况及妊娠结局。  结果  A组Gn启动剂量、Gn总量、Gn天数、夜针剂量显著高于B组（P < 0.05）;A组HCG日LH低于B组（P < 0.05）;A组获卵数、获胚数、优胚数均高于B组（P < 0.05）。  结论  从临床结局看PPOS组临床结局优于微刺激组。