多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子对缺氧诱导人视网膜微血管内皮细胞功能的影响

目的观察多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子(PSF)对缺氧诱导的人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)功能的影响。方法采用三质粒系统构建慢病毒颗粒(LV)-PSF。LV-PSF体外感染hRMECs后通过流式细胞计数法测定其感染效率。应用实时定量PCR(RT-PCR)检测经LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA表达水平。将实验分为体内和体外两部分。体内实验:7日龄健康C57B/L6小鼠20只,采用随机数字表法分为正常组、氧诱导视网膜病变(OIR)组、OIR+LV-空载体(Vec)组和OIR+LV-PSF组,每组5只。除正常组外,其余3组构建OIR模型。OIR组除缺氧刺激外,不做其余处理。OIR+LV-Vec组和OIR+LV-PSF组小鼠分别玻璃体腔注射LV-Vec或LV-PSF。观察LV-PSF对视网膜新生血管(RNV)形成的影响。体外实验:将hRMECs分为正常组、缺氧组、空载组、PSF高表达组。正常组为正常体外培养的hRMECs;缺氧组为缺氧刺激3 h恢复正常培养条件24 h的hRMECs;空载组、PSF高表达组分别为用LV-Vec、LV-PSF感染48 h,再用缺氧刺激3 h恢复正常培养条件24 h的hRMECs。采用MTT比色法观察PSF对细胞增生能力的影响。采用细胞划痕实验和Transwell迁移实验观察PSF对缺氧刺激下细胞迁移能力的影响。采用RT-PCR观察各组细胞中HIF-1α、VEGF及PSF的mRNA表达。结果成功构建可稳定高表达PSF的LV-PSF,流式细胞仪测定其感染效率为97%,RT-PCR测得经LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA水平明显上调。体内实验:OIR组、OIR+LV-Vec组小鼠RNV面积较正常组明显增加(t=18.31、43.71),OIR+LV-PSF组小鼠RNV面积较OIR组(t=11.30)、OIR+LV-Vec组(t=15.47)明显减小,差异均有统计学意义(P<0.05)。体外实验:MTT比色法检测结果显示,缺氧组hRMECs增生能力较正常组明显增强(t=2.57),PSF高表达组hRMECs增生能力较正常组、缺氧组、空载组明显降低(t=5.26、5.46、3.73),差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,缺氧刺激3 h恢复正常条件24 h或48 h均可刺激缺氧组与空载组细胞明显迁移(t=8.35、13.84,P<0.05);而与缺氧组与空载组比较,PSF高表达组细胞迁移不明显(t=10.99、18.27、9.75、8.93、26.94、7.01,P<0.05)。Transwell小室实验结果显示,正常组和空载组微孔膜上染色的细胞数较多,而PSF高表达组微孔膜上染色的细胞数明显减少(t=9.33、6.15,P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,与正常组比较,缺氧组、空载组hRMECs中HIF-1α、VEGF的mRNA表达明显增加(t=15.23、21.09,P<0.05),PSF mRNA表达无明显变化(t=0.12、2.15,P<0.05);与缺氧组、空载组比较,PSF高表达组hRMECs中HIF-1α、VEGF的mRNA表达明显下降(t=10.18、13.10,P<0.05),PSF mRNA表达明显增加(t=65.00、85.79,P<0.05)。结论PSF可减少OIR模型小鼠RNV面积。PSF可能通过HIF-1α/VEGF信号通路抑制缺氧诱导的hRMECs增生和迁移。     

治疗性单克隆抗体培养工艺的优化

目的优化抗TNF-α单克隆抗体的培养工艺,提高抗体表达水平。方法对商业化的化学限定培养基和流加物进行筛选,利用JMP软件对流加培养工艺(fed batch culture)进行全因子析因实验设计,对接种细胞密度、流加物的体积分数和流加时间进行优化。结果经过筛选确定了工程细胞株的基础培养基和流加物,经培养工艺优化后,使工程细胞株的最大活细胞密度由原工艺的7×106m L-1增加到14.6×106m L-1,抗体的表达水平由原工艺的1.0 g·L-1增加到2.5 g·L-1,分别增长了109%和150%。结论通过优化抗TNF-α单克隆抗体的培养工艺,使抗体的表达水平得到了提高。     

2016至2018年某医院真菌血流感染者流行病学特征及耐药性分析

目的分析真菌性血流感染的病原菌分布以及耐药特征，为真菌血流感染的早期合理用药提供理论依据。 方法回顾性分析武汉大学人民医院2016年1月至2018年12月收治的真菌性血流感染者的菌群、科室分布以及耐药性。 结果入组192例真菌血流感染者的血培养样本中共分离192株真菌，其中白色念珠菌检出率为31.77%（61/192），其次热带念珠菌检出率为18.75%（36/192）；重症医学科检出率最高为33.85%（65/192）。所有菌株均对两性霉素B敏感，对其他抗菌药物耐药率分别为5-氟胞嘧啶4.49%（9/192）、伊曲康唑5.73%（11/192）、氟康唑10.94%（21/192）和伏立康唑11.46%（22/192）；除两性霉素B外，2016至2018年真菌对其他抗菌药物的耐药率均逐年上升，其中2018年所分离192株光滑念珠菌对伊曲康唑耐药菌率达46.7%。 结论真菌血流感染病原菌以念珠菌属为主，对目前抗真菌药物具有较高敏感性，但耐药率逐年上升，加强监测血培养病原菌变化及耐药趋势对指导临床用药至关重要。     

关于医学硕士研究生科研写作能力的培养思考

随着国家社会经济的高速发展,各领域都需要更多高层次拔尖创新性人才。我国医药卫生事业的快速、稳定发展将会直接关系国民生命的健康,这就需要培养大量硕士研究生及以上的医学高层次人才。目前,医学硕士研究生还存在着科研能力不足的现状,而科研写作是科研水平和科研质量的呈现,是增强沟通、提高创新性的必然媒介。就如何培养提高医学硕士研究生写作能力内外部影响因素进行了阐述,并提出了改善方法。     

微文化背景下临床护生敬业价值观的培养

随着我国微时代的到来,以微博、微信、微电影、微小说、微文学、微视频等传播媒介为载体的微文化正潜移默化的改变着临床护生敬业价值观的获取和传播方式。我国临床护生多为“95后”甚至“00后”青年,他们既是微文化的受众主体,也是护理事业发展的接班人。微时代背景下,带教工作面临着新的机遇与挑战,要求带教老师与时俱进,全面认识微文化,借助微文化的特性创新教育形式,发挥新媒体的潮流优势开辟出带教新路径。     

浅析幼儿创造力培养下幼儿园美术教学的创新方法

随着素质教育的开展，学校和家长不断转变教育观念，越来越重视孩子在幼儿园学习中的全面素质的提高，其中幼儿园的美术教学是幼儿园教学中的重要组成部分，有利于丰富幼儿的想象力，培养幼儿的创造力，提高审美意识，促进全面发展。     

如何培养小学生数学审题能力

通过长期教学发现，有些学生拿到题目草草读一遍题之后，马上就动笔列式，而在老师看来本不应该错的题目，却出现了多种不同的答案。例如：一堆煤昨天用去吨，今天比昨天多用了吨，两天一共用去多少吨？许多学生的列式是：×（1+）由于学生没有看到后面的“吨”字，所以把这道题当成分数应用题来做了。而这其中，有相当一部分是审题不清造成的。     

人诺如病毒体外培养体系研究进展

目的 系统全面的阐述人诺如病毒(human noroviruses, HuNoVs)体外培养研究的历史、发展及现有体系各自的优缺点和发展方向。方法 以“human noroviruses”、“in vitro"、“culture”、“cofactor”作为PubMed和Web of science数据库的检索词，提取实验性体外培养研究论文中的结果和数据，共参考文献33篇。结果 人诺如病毒可在具有B细胞特征的淋巴瘤细胞系和单层人肠上皮细胞系中实现有限的增殖。结论 需进一步改进现有培养体系，突破因不能体外培养导致的诺如病毒基础研究瓶颈。同时，探索诺如病毒复制所需的辅助因子，并研究两者的共作用机制或许是诺如病毒体外培养新的发展方向。     

肾盂尿培养联合炎症指标对经皮肾镜碎石术后尿路感染的诊断价值

目的探讨经皮肾镜碎石术后,肾盂尿培养联合血清和肽素及IL-6水平对尿路感染的诊断价值。方法选取2015年6月-2018年6月于遵义医科大学附属医院行经皮肾镜碎石术的住院患者201例,根据术后尿路感染情况分为感染组32例及非感染组169例。术前中段尿、术中肾盂尿进行细菌培养,术后第1天采用酶联免疫吸附法检测血清和肽素及白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)水平,比较上述指标单独及联合对术后尿路感染的诊断价值。结果感染组与非感染组术前中段尿细菌培养阳性率分别为15.63%和14.79%,差异无统计学意义(χ^2=1.218,P=0.270);感染组肾盂细菌培养阳性率为81.25%,高于非感染组的3.55%,差异有统计学意义(χ^2=121.349,P<0.001)。感染组和肽素及IL-6水平高于非感染组,差异有统计学意义(P<0.001)。肾盂尿培养、血清和肽素及IL-6联合诊断PCNL术后尿路感染敏感性为90.65%,特异性为86.44%,AUC为0.873±0.039,高于肾盂尿培养、和肽素、IL-6单独诊断水平(P<0.05)。结论术中肾盂尿培养较术前中段尿培养价值高,且血清和肽素、IL-6及肾盂尿培养联合诊断可提高诊断准确率。