甲基化CpG结合域重组蛋白的表达与鉴定

目的:在大肠杆菌中表达甲基化CpG结合域(methyl-CpG-binding domain,MBD)重组蛋白?方法:对人甲基化CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding protein 2,Mecp2)的MBD区行密码子优化,将人工合成的DNA克隆至原核表达载体pGS21a,在大肠杆菌E. coli Rosetta(DE3)中诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达;镍亲和层析柱纯化重组蛋白?表面等离子共振分析重组MBD蛋白与甲基化DNA的结合能力?结果:酶切和核酸测序证实,成功构建了含密码子优化的MBD基因的原核表达载体?SDS-PAGE和Western blot结果显示,MBD重组蛋白在大肠杆菌中得到表达?亲和层析法纯化后获得了相对分子量为38 000的MBD重组蛋白?SPR分析显示MBD重组蛋白能特异结合甲基化DNA?结论:成功构建含密码子优化的MBD基因的原核表达载体,MBD重组蛋白能在大肠杆菌中表达?     

肺癌细胞抑制CD4+T细胞 IFN-γ基因表达的机制研究

目的:研究肺癌细胞能否直接影响CD4+T 细胞干扰素-γ(IFN-γ)基因启动子甲基化水平?方法:ELISA法检测肺癌组(n = 30)及健康对照组(n = 30)血浆IFN-γ水平;免疫磁珠分选两组外周血CD4+T 细胞(n = 8),提取DNA后经亚硫酸氢盐修饰,PCR扩增 IFN-γ基因启动子进行TA克隆测序,测序结果采用生物信息学软件进行分析;建立健康人CD4+T 细胞与肺腺癌细胞株SPC-A1体外Transwell共培养体系(n = 6),并设健康人CD4+T 细胞单独培养为对照组,培养5 d后分别收集CD4+T 细胞?CD4+T 细胞按上述法进行TA克隆测序?同时CD4+T 细胞经anti-CD3?anti-CD28刺激6?24 h,ELISA法检测两组上清IFN-γ表达水平,RT-PCR检测CD4+T 细胞IFN-γ mRNA表达水平?结果:肺癌组血浆IFN-γ水平显著低于健康对照组[(69.30 ± 38.56) pg/ml vs (92.62 ± 34.75) pg/ml,P = 0.017];肺癌组CD4+T 细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平显著高于健康对照组(84.6% vs 68.6%,P < 0.001);肺癌患者血浆IFN-γ水平与其基因启动子甲基化率呈负相关(r = -0.850 3,P = 0.010 7)?体外Transwell共培养实验中,与对照组相比,实验组CD4+T 细胞anti-CD3?anti-CD28刺激6?24 h,IFN-γ表达水平显著下降[6 h:(14.53 ± 7.12) pg/ml vs (36.14 ± 23.51) pg/ml,24 h:(7.81 ± 4.02) pg/ml vs (24.85 ± 15.58) pg/ml],6 h对照组CD4+T 细胞IFN-γ mRNA表达水平为实验组的2.37倍?实验组CD4+T 细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平显著高于对照组(85.4% vs 70.9%)?结论:肺癌细胞可诱导CD4+T 细胞IFN-γ基因启动子发生高甲基化,进而导致IFN-γ基因表达下调,可能对肺癌患者的免疫抑制起重要作用?     

高校医学检验专业实验教学改革初探

医学检验专业实验教学的主要目的是培养学生掌握一定的检验医学相关实验操作技能,这对培养具有较强的实际操作应用能力的检验医师起着重要的作用。作者通过参与南京医科大学医学检验系本科生的实验带教工作,提出医学检验系本科生实验教学目前存在的问题及解决措施,从而探索医学检验实验教学改革的新途径。     

交感神经皮肤电反应诊断糖尿病自主神经病变

糖尿病 (ＤＭ)继发神经病变是最常见的并发症之一 ,它可累及感觉、运动及植物神经 ,其中又以植物神经障碍型最多见。交感神经皮肤电反应 (ＳＳＲ)是人体接受刺激后出现的皮肤反射性电位 ,它来源于交感神经传出纤维释放冲动诱发汗腺的同步活动 ,属于催汗运动。我们对 41例ＤＭ患者进行了ＳＳＲ检测的初步研究 ,目的是早期发现ＤＭ患者自主神经的亚临床病变。资料和方法 :　患者男 31例 ,女 10例 ,年龄 39～ 77岁。均按ＷＨＯ(1985年 )诊断标准 ,病程 1～ 16年。晨起空腹血糖 9.6～ 16 .0ｍｍｏｌ Ｌ。本组患者中无自主神经功能损害症状者 2 3…     

脑脊液中特殊蛋白的检测与Creutzfeldt-Jakob病

Creutzfeldt—Jakob病（CJD）是一种罕见的、致命的人类神经变性疾病。确诊只能通过尸检或脑组织活检发现朊蛋白的病理性异构体（PrP^Se）。脑组织活检患者不易接受，而且容易造成医源性传播。目前的研究发现一些脑特殊蛋白与CJD的关系密切，尤其是脑脊液中特殊蛋白的检测对诊断CJD更有临床价值。脑脊液中80％的蛋白源于循环系统，20％是由中枢神经系统产生，被认为是脑源性的。     

脑脊液14-3-3蛋白和神经元特异性烯醇化酶对Creutzfeldt-Jakob病的诊断价值

目的探讨脑脊液14-3-3蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)对Creutzfeldt-Jakob病(CJD)的诊断价值。方法采用capture assay方法及酶联免疫吸附法分别定量检测14例CJD患者(CJD组)、10例其他痴呆患者(OD组)及12例非痴呆患者(ND组)脑脊液14-3-3蛋白和NSE的含量,并进行特异性和敏感性分析。结果脑脊液中14-3-3蛋白含量CJD组为40.0ng/ml,OD组为2.65ng/ml,ND组为3.10ng/ml;NSE含量CJD组为(48.43±30.39)ng/ml,OD组为(14.00±11.52)ng/ml,ND组为(20.50±25.67)ng/ml;CJD组脑脊液中14-3-3蛋白及NSE含量明显高于OD组及ND组(均P<0.01)。以脑脊液14-3-3蛋白≥9ng/ml为分界值时,其对CJD诊断的敏感性为86.7%,特异性为86.4%;以NSE≥24ng/ml为分界值时,其敏感性为78.6%,特异性为77.3%;当以14-3-3>9ng/ml及NSE>24ng/ml为分界值,对CJD诊断的敏感性、特异性分别为90%、92.9%。结论脑脊液14-3-3蛋白对CJD的诊断价值高于NSE,两者联合将提高对CJD诊断的敏感性和特异性。     

脑脊液及血清tau蛋白的检测对散发性Creutzfeldt-Jakob病的诊断价值

脑脊液tau蛋白检测可能为散发性Creutzfeldt-Jakob病（CJD）辅助诊断指标之一。但是，国人CJD与西方不同，推测其含量也可能有若干区别。     

脑干听觉诱发电位对早产新生儿的听力评估

脑干听觉诱发电位(brainstem auditory evokedpotential,BAEP)反映听觉通路周围神经与中枢神经传导的部分电活动,是检测脑干和周围神经功能及听力学评价的重要手段之一。本文对早产新生儿进行BAEP测试,以评估早产儿的听力。 对象与方法 1.对象:58例早产儿均来自哈尔滨医科大学第二临床医院新生儿病房,男38例,女20例,胎龄27     

按摩、红外线照射,外用药物合用治疗肥胖症疗效浅析

当进食热量多于人体消耗量而以脂肪形式储存体内超过标准体重20％时,称为肥胖症。肥胖不仅影响形体美、而且对心血管及消化系统都会产生不良影响,严重者引起冠心病,糖尿病、胆石症等。单纯性肥胖以女性多见、脂肪分布以腹部及臀部和四肢为主。故本文着重对女性腹部脂肪进行治疗。     

卵巢癌患者TLR1、TLR2、TLR6信号通路活化诱导PBMC前炎症细胞因子分泌

目的观察卵巢癌(OC)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Toll样受体1(Toll-like receptors 1,TLR1)、TLR2及TLR6信号通路活化后前炎症细胞因子分泌水平,研究其在OC发病中的可能机制。方法纳入OC患者、女性妇科良性疾病(BC)患者及同期体检健康女性(NC)各13例,用密度梯度离心法分离PBMC并用TLRs的相应配体刺激PBMC,用CBA免疫荧光法检测细胞中前炎症细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平;用western blot检测MyD88、TRAF6、TANK、NF-κB和P-NF-κB的表达水平。结果 OC组、BC组、NC组未加配体刺激前,PBMC中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α分泌水平差异均无统计学意义(P>0.05)。与未经配体刺激PBMC相比,OC组PBMC经TLR1配体Pam3CSK4刺激24 h后,IL-1β分泌水平增高,差异具有统计学意义(t=-2.667,P<0.05);TLR2配体HKLM刺激24 h后,OC组IL-1β、TNF-α分泌水平亦增高,差异有统计学意义(t分别为-5.391和-3.564,P均<0.05);相较于未经配体刺激时,BC组、NC组的PBMC在相应TLRs配体刺激后,IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α分泌水平变化无统计学意义。OC患者PBMC经Pam3CSK4、HKLM、FSL-1刺激后,TLRs信号通路蛋白MyD88、TRAF6、TANK及P-NF-κB表达上调。结论 OC患者PBMC中TLR1、TLR2、TLR6经相应配体刺激后可活化TLR信号通路,并诱导前炎症细胞因子IL-1β、TNF-α分泌水平增加,在OC的发生发展中发挥作用。