ADAM28基因原核表达载体的构建和在大肠杆菌中的融合表达

目的:利用消减杂交技术克隆出牙齿发育相关基因ADAM28。方法:本研究为构建ADAM28基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导其表达并纯化出ADAM28蛋白;采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出ADAM28基因的蛋白编码序列,克隆到中间载体pMD18-TVector中产生pMD18-T-ADAM28,再经双酶切得到ADAM28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-ADAM28;在大肠杆菌中利用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,并经SDS-PAGE电泳初步纯化。结果:①成功构建融合表达载体pGEX-4T-ADAM28,并经酶切鉴定、PCR鉴定和测序验证显示插入的ADAM28序列正确,阅读框架完整,未发现突变。②得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白。经IPTG诱导后出现一条约35.3×103的新蛋白带。结论:ADAM28基因编码蛋白质能够在原核细胞中表达并纯化,为进一步研究该蛋白质的功能打下基础。     

体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经胶质样细胞的实验研究

目的：观察体外以不同方法诱导的骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells，MSCs)分化为神经胶质样细胞，探讨MSCs作为组织工程周围神经种子细胞的可行性。方法：以大鼠MSCs为研究对象，分化学诱导组，共培养诱导组，未经诱导的MSCs作为对照组。通过体外动态观察细胞形态，免疫细胞化学，western blot，RT-PCR等手段对各组诱导后的细胞进行鉴定。结果：形态学观察显示两种诱导过程中的部分MSCs细胞都出现明显的神经胶质细胞的形态，共培养诱导组的MSCs在诱导后仍可继续传代培养，对照组细胞形态无变化。细胞免疫组织化学染色，western blot和RT-PCR结果显示两个诱导组细胞都能够表达神经干细胞标志性抗体(Nestin)、神经胶质纤维酸性蛋白抗体(GFAP)和S-100抗体。结论：我们推断MSCs很有可能成为TEPN的理想种子细胞来源。     

牙髓干细胞向成牙本质样细胞分化过程中基因表达研究

目的：分离培养来源于人成体牙髓组织的干细胞(dental pulp stem cells，DPSC)，分析研究其在未分化状态及在矿化诱导液中基因表型的变化：方法：采用胶原酶消化法获得人牙髓组织的单细胞悬液，14 d后挑取细胞克隆，分别在普通培养基和矿化诱导培养基中进行培养，利用RT-PCR，图像分析检测细胞基因表型变化。结果。未诱导的DPSC不表达牙本质特异性蛋白(dentin phosphprotein,DSPP)及骨涎蛋白(Bone sialoprotein，BSP)，表达部分成骨(osteocalcin,OCN alkaline phsphatase,ALP)相关表型，低表达转录因子核心结合因子(Cbfa-1)；与末诱导的DPSCs相比较，在成骨诱导中DPSCs表达DSPP和BSP，骨相关基因表达也相应上调。结论：DPsCs在矿化诱导液的作用下向成牙本质样细胞分化，其过程有可能是通过谱系特异表犁的表达或表达上调实现的。     

牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白对牛主动脉内皮细胞存活的影响

目的:探讨牙周致病菌牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白对体外培养牛主动脉内皮细胞(BAECs)存活的影响.方法:盐析法提取牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白;不同浓度的胞外蛋白(200、300、400、500、600μg/mL)分别作用于体外培养的BAECs 24 h,对照组为无细菌胞外蛋白作用的BAECs;另外,用400μg/mL胞外蛋白分别作用于BAECs 6、12、24、36h,对照组细胞同样培养6、12、24、36 h,比较实验组与对照组BAECs存活率的变化;采用台盼蓝染色法检测BAECs存活率.采用SPSS 10.0软件包对数据进行独立样本t检验.结果:当作用于BAECs的牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白浓度在200～600μg/ml.范围内时,BAECs存活率均低于对照组(P<0.05),且随细菌蛋白浓度增加而降低;在36 h内,随着时间的延长,实验组和对照组的BAECs存活率均有下降,但实验组降低的幅度大于对照组(P<0.05),显示细菌胞外蛋白对BAECs存活率的影响具有时间依赖性.结论:牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白可导致体外培养的牛主动脉内皮细胞存活率降低,并呈现剂量和时间依赖性.     

颅骨锁骨发育不良综合征患者的临床检查及诊断

目的探讨颅骨锁骨发育不良(CCD)的口腔综合表现,明确其诊断特征。方法收集4例CCD患者临床资料,对具有相关临床症状的先证者详细采集病史,明确单发或家族聚集倾向;利用X线检查全面了解患者及其父母的全身骨骼发育情况;详细进行口腔检查,记录恒牙萌出及乳牙迟萌以及埋藏牙、多生牙等;综合临床资料,明确诊断。结果4例患者均具有明显的临床特征,较典型的CCD特殊面容;口腔内表现为乳牙滞留,多数恒牙及多生牙埋伏于颌骨中不能萌出,仅1例未见明显多生牙;均伴有锁骨发育不全、囟门闭合迟缓、身材矮小等症状。并发现一些新的畸形表现,如病例3先证者的尺、桡骨向桡侧偏斜致肱尺关节、肱桡关节畸形,肘外侧呈三角变形;病例2先证者的多生牙发生在磨牙区。结论乳牙列正常、恒牙迟萌以及多个埋伏多生牙等口腔综合表现是比较明确的CCD诊断特征,通过详细的临床资料采集,不难对CCD作出早期诊断。     

牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备及鉴定抗ADAM28的多克隆抗体。方法采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出adam28基因的蛋白编码区序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中,再经双酶切得到adam28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,经过初步纯化及SDS-PAGE电泳,在35300的新蛋白带处直接割胶,作为抗原免疫新西兰大白兔后获取抗体。结果成功构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白,免疫兔子1个月后,获得免疫血清,盐析法纯化得到多克隆抗体。Western印迹结果显示所得到的抗体具有较高的特异性,ELISA分析证实其效价可达1∶16000。结论成功制备出高效价的抗ADAM28多克隆抗体,为进一步研究ADAM28在牙齿发育中的作用和表达分布奠定基础。     

连续发元音与下颌位置变化的研究

本篇文章的目的是探讨连续发元音［ａ］，［ｅ］，［ｉ］，［ｏ］，［ｕ］时下颌位置的稳定性以及每一位置与息止颌位的关系。用Ｋ５－ＡＲ型下颌运动描记记录１０名正常年青人连续发每一元音时的下颌垂直和前后向距离。研究结果表明，连续发元音［ｉ］时，下颌位置稳定与每一受试者的息止颌位接近，［ｉ］音法比传统语音法更具有可重复性，是确定上下颌垂直距离的一种有效方法。     

三种固定液对角蛋白反应的影响

本研究对13例人的正常涎腺经三种固定双固定后的组织标本进行了11种角蛋白单克隆抗体的免疫组化染色.其中5例腮腺和3例颌下腺分别同时用常规Formalin固定,Bouin’s液固定,Carnoy‘s液固定.染色采用ABC法,结果发现:Carnoy固定者,K_8、K_18、K_19和K_8.12的染色效果最好.其导管染色比Bouin‘s和Formalin固定者染色强而明确,尤其K_8和K_8.12不仅在导管中呈现强阳性,而且腺泡也呈阳性;而K_(17)和K_(L1)没有看出明显的染色差别;K_(14)、K_(10)、K_(13)、K_(17)、K_(20)的染色几乎全为阴性,与常规中性缓冲Formalin固定者结果一致.     

微螺钉支抗滑动法内收前牙

本研究展示了以微螺钉为支抗，利用直丝弓矫治器滑动法内收前牙在牙槽骨性前突正畸治疗中的疗效及优点。微螺钉可为前牙的内收提供绝对支抗，同时采用滑动法内收前牙有许多优点，即可缩短疗程、早期改善侧貌、简化治疗且无需颌间牵引。