免疫磁珠分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit~+lin~-

目的：利用免疫磁性细胞分选系统分离纯化骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit^＋lin^-。方法：实验于2006—07／08在南方医科大学实验动物中心完成。6～8周龄的SPF级纯系BALB，C雄性小鼠10只，体质量18～20g。收集小鼠股骨骨髓细胞，利用免疫磁性细胞分选系统，通过两步法分选纯化c-Kit^＋lin^-：将获取的lin^-细胞悬液8℃条件下1500r/min离心10min，弃上清，按80μL/10^7加入Buffer重悬细胞。按20μL/10^7加生物素抗体磁珠，混匀，4℃冰箱孵育15min，按1 mL/10^7加入Buffer洗细胞1次，8℃条件下1500r/min离心10min，弃上清，按500μL/10^8加入Buffer重悬细胞。Buffer 500μL润MS柱，悬液过柱后，Buffer 500μL/次洗柱3次，柱子脱离磁场，加1mL Buffer，用配套柱塞推出柱中的c-Kit^＋lin^-细胞，收集到c-kit^＋lin-细胞，细胞计数。取2．0x108个细胞分成10等份，流式细胞仪分析c-Kit^＋lin^-细胞纯度，计算回收率，评估纯化效率，苔盼兰染色检测纯化前后的细胞活力。计算活细胞的百分率。细胞纯度和细胞回收率的计算：细胞纯度：分离产物中的阳性细胞数，分离细胞的总细胞数×100％，细胞回收率：分离产物中的阳性细胞数，起始标本阳性细胞总数×100％。结果：10只小鼠均进入结果分析。利用免疫磁性细胞分选系统分选出的骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit^＋lin^-细胞纯度和回收率分别为（77．98±2．34）％，75．40％，纯化前后细胞活力不受影响。结论：免疫磁性细胞分选系统能有效分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit^＋lin^-，纯度和回收率高，且不影响细胞活力.     

6493例泌尿生殖道感染患者解脲支原体和人型支原体感染情况及药敏试验分析

目的了解深圳市坪山地区泌尿生殖道感染患者解脲支原体(Uu)和人型支原体(Mh)感染情况及对常用抗菌药物的敏感性,为临床合理使用抗菌药物提供参考。方法采用支原体检测试剂盒对6 493例疑诊为泌尿生殖道感染患者的泌尿生殖道分泌物进行Uu、Mh检测及药敏试验,并对检测结果进行统计学分析。结果 6 493例患者中支原体培养阳性3 014例(46.4%),其中Uu单纯感染2 300例(35.4%),Mh单纯感染75例(1.2%),二者混合感染639例(9.8%)。1 941例男性患者支原体培养阳性575例(29.6%),4 552例女性患者培养阳性2 439例(53.6%),女性患者支原体感染率明显高于男性,差异有统计学意义(P0.05)。药敏试验结果显示,Uu、Mh及二者混合感染患者对多西环素、交沙霉素、米诺环素表现高度敏感性。结论泌尿生殖道感染患者支原体感染以单纯Uu感染为主,女性患者感染率高于男性,多西环素、交沙霉素和米诺环素是治疗泌尿生殖道支原体感染的有效药物。     

输尿管囊肿15例的诊断及治疗

[目的]探讨输尿管囊肿的诊治方法.[方法]15例患者术前均由B超或IVU、膀胱镜检查确诊.行开放性手术治疗11例,经尿道手术4例.[结果]15例手术均一次手术治疗成功,开放性手术平均时间102 min,术后平均住院11.5 d,腔内手术平均61.5 min,术后平均住院4.8 d.[结论]B超结合IVU、膀胱镜检查可以提高确诊率.开放性囊肿切开去顶术是基本治疗方法;当存在输尿管返流时,应行输尿管膀胱抗返流吻合术;经尿道的腔内手术可以减少手术创伤及术后并发症,缩短手术及住院时间.     

腹腔镜胆囊切除术中的简易冲洗法

腹腔镜胆囊切除(LC)中,当少量胆汁流出或腹腔内少许渗血(5～10ml)时,我们通常不用常规方法冲洗腹腔,而用一种简易冲洗法代替.近年来我们将简易冲洗法用于LC中80余例,效果颇佳,现介绍如下.     

小鼠肠道3型固有淋巴样细胞检测与分析方法研究

目的建立小鼠肠道(包括小肠和结肠)黏膜固有层3型固有淋巴样细胞(ILC3)检测与分析的方法。方法小鼠麻醉后分离小肠和结肠组织,利用不同的消化液分别获得小肠和结肠固有层淋巴细胞悬液,通过CD45⁺CD3^-CD90.2⁺RORγt⁺流式分析策略检测ILC3比例,通过IL-23刺激后用流式细胞术分析显示ILC3的IL-22表达水平。结果小肠和结肠固有层淋巴细胞成功分离,流式细胞术检测显示ILC3细胞分群显著并明显表达IL-22。在小肠和结肠中,ILC3在淋巴细胞中的占比分别为(8.30±2.42)%和(1.43±0.34)%,IL-22⁺ILC3在RORγt⁺ILC3中的占比分别为(38.98±8.76)%和(85.86±1.72)%。结论本研究成功建立了小鼠小肠和结肠黏膜固有层ILC3的检测和分析方法,为相关研究奠定了技术基础。     

构建适合骨髓衍生肝千细胞移植的小鼠酒精性肝纤维化模型

目的:建立适合骨髓衍生肝干细胞移植的小鼠酒精性肝纤维化模型,为移植骨髓衍生肝干细胞对酒精性肝损伤修复的研究提供进一步探讨的价值。方法:实验于2006-02/06在南方医科大学实验动物中心完成。取Balb/c雌性小鼠100只,SPF级,5～6周龄,体质量15～18g,随机区组法分为造模组92只,对照组8只。用白酒灌胃法建立小鼠酒精性肝纤维化模型。造模组于灌胃的第4,8,12,16周末分别随机选取6只小鼠,眼球采血后,颈椎脱臼处死,取出肝脏,以100g/L的甲醛固定,石蜡包埋切片,苏木精-伊红染色和苦味酸-酸性复红染色,光镜观察病理变化。血标本用于测定生化及肝纤维化指标。对照组以等量的蒸馏水灌胃,于实验的第16周末处死,处理同造模组。组间比较采用单因素方差分析。结果:纳入Balb/c雌性小鼠100只,实验中造模组共23只小鼠死亡,多为急性和亚急性死亡。对照组全部成活。①灌胃初期,造模组小鼠出现精神萎靡等现象,实验开始4周后上述症状减轻,对照组小鼠则食欲正常,无嗜睡现象。②在实验刚开始1周时小鼠体质量(15.67±0.98)g,与实验开始时(16.38±0.58)g相比呈明显负增长(P<0.05)。第4,8,12,16周称质量时,造模组小鼠体质量[(16.17±0.91),(17.23±1.39),(18.27±0.85),(19.31±0.95)g]均明显低于对照组[(18.31±0.57),(19.52±0.85),(20.56±0.86),(21.41±0.95)g],(P<0.05)。③对照组小鼠肝脏表面光滑细润、色红等。造模组小鼠肝脏色泽较正常肝脏暗淡,表面充血,肝脏呈增大趋势。造模组小鼠的肝重比(肝脏湿重/小鼠体质量×100%)均大于对照组。④造模组4周时可见轻度酒精性脂肪肝病理改变,12周时酒精性肝炎改变加重并出现了纤维组织增生,16周时肝纤维化已明显形成。⑤不同时间点与对照组相比,血清中天冬氨酸氨基转氨酶、丙氨酸氨基转氨酶、天冬氨酸氨基转氨酶/丙氨酸氨基转氨酶、三酰甘油均呈升高的趋势:造模第8周后,天冬氨酸氨基转氨酶和三酰甘油的水平均逐步增高,尤其以天冬氨酸氨基转氨酶升高明显。⑥小鼠血清肝纤维化指标的变化:造模第8周后血清中透明质酸和层粘连蛋白的水平均逐步增高,与对照组相比,差异均有显著性意义。结论:应用酒精灌胃法可成功建立小鼠酒精性肝纤维化模型,为骨髓衍生肝干细胞的移植提供了前期的实验研究。     

2018年湖南省血防技术人员专业技能竞赛成绩分析

目的 了解湖南省血吸虫病防治机构专业技术人员血吸虫病和其他寄生虫病的防治理论与检测技能水平,为加强基层血吸虫病实验室能力建设提供科学依据。 方法 以组队竞赛的方式,对湖南省县级血防专业技术人员进行专业理论和操作技能考核。 根据评分标准,对每位专业技术人员进行评分。 对评分结果进行统计学分析,组间的定量结果采用方差分析,率的比较采用卡方检验。 结果 参与竞赛人员的平均分为(75. 80±10. 70)分,合格率为92. 59%。 其中,理论测试平均成绩为(63. 41± 14. 15) 分,合格率为 62. 96%;技能操作平均成绩为(81. 11± 11. 68)分,合格率为 96. 29%。 不同性别、年龄、职称、机构和疫区类别选手的理论成绩差异均无统计学意义(P 均>0. 05);不同年龄、职称选手的操作技能成绩差异均无统计学意义( P 均>0. 05),女性选手操作成绩高于男性(P <0. 05),专职血防机构(血防站、血防医院、血防办)选手操作技能成绩高于非专职血防机构(疾控中心) ( P <0. 05),疫情达传播阻断标准地区选手操作技能成绩高于达消除标准地区(P <0. 05)。 结论  我省血防专业技术人员操作技能水平较高,但理论知识掌握相对薄弱,应加强血吸虫病及相关专业技术人才培养和技术储备。