风疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及应用

为了建立产生风疹病毒（ＲＶ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株及检测ＲＶ感染的捕获ＥＬＩＳＡ。用ＲＶ抗原免疫后的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合建立杂交瘤细胞株。用相应单抗建立检测血清中ＲＶ行异性ⅠｇＭ的捕获ＥＬＩＳＡ，并以该法与间接ＥＬＩＳＡ进行了比较实验。获得的杂交瘤细胞５Ｄ５、５Ｇ５、２Ｆ７相应单抗均属ⅠｇＧ１，与纯化ＲＶ抗原有强阳性反应。两法比较，阳性血清Ｘ＾２＝０．２５，Ｐ〈０．     

抗SARS-CoV-2 N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAbs)并鉴定其生物学特性。方法 利用大肠杆菌原核表达重组SARS-CoV-2 N蛋白,通过杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与经重组蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞进行融合,采用间接ELISA法和有限稀释法筛选出阳性杂交瘤细胞株,并鉴定其亚型,腹水法制备mAbs, Protein G亲和柱纯化后通过SDS-PAGE、间接ELISA和Western blot检测其纯度、效价及特异性。结果 获得5株能稳定分泌抗SARS-CoV-2 N蛋白mAbs的杂交瘤细胞株,分别命名为N1～5。通过腹水法制备获得5个mAbs,亚型鉴定结果显示1个为IgG2a*κ型、4个为IgG1*κ型,其效价均达到2×104以上。Western blot结果表明5个mAbs都能与重组SARS-CoV-2 N蛋白结合。结论通过杂交瘤技术成功制备了5个能特异性识别重组SARS-CoV-2 N蛋白的mAbs,为开发免疫诊断试剂奠定了基础。     

国家药监局批准第二个国产托珠单抗注射液生物类似药上市北大核心CSCD

国家药品监督管理局批准珠海市丽珠单抗生物技术有限公司申报的托珠单抗注射液(商品名:安维泰)上市。该药是国内获批的第二个国产托珠单抗注射液生物类似药,适应症为类风湿关节炎。托珠单抗是一种重组人源化抗人白细胞介素6(interleukin-16,IL-6)受体单克隆抗体,可特异性地结合可溶性和膜结合性IL-6受体,并抑制由IL-6受体介导的信号转导。     

戊型肝炎病毒衣壳蛋白特异性人源单克隆抗体的筛选与鉴定

目的:建立从外周血快速筛选戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)衣壳蛋白特异性人源抗体的方法,从疫苗免疫者外周血中筛选出相应抗体并进行鉴定。方法:采用分选型流式细胞仪获得外周血中HEV 衣壳蛋白特异性的记忆B细胞,通过单细胞RT-PCR 的方法获得抗体序列,并进行重组表达,最后对获得的人源单克隆抗体进行初步性质鉴定。结果:成功筛选到识别HEV 衣壳蛋白的6 株人源单克隆抗体,6 株抗体均具有抗原结合活性,4 株抗体具有中和活性。结论:成功获得HEV 衣壳蛋白特异性人源单克隆抗体序列,并进行真核表达,对抗体的性质进行初步鉴定,为后期研究疫苗免疫的人体内的抗体演化打下基础。     

人心肌肌钙蛋白玉鲁米诺化学发光酶免疫分析法的建立

目的:制备两株抗人心肌肌钙蛋白玉(human cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)单克隆抗体,建立鲁米诺化学发光酶免疫分析法。方法:制备腹水型单抗、饱和硫酸铵沉淀法和亲和层析柱Protein G 纯化抗体,并通过SDS-PAGE 和ELISA 对抗体特异性进行鉴定,建立鲁米诺化学发光酶免疫分析法,并对30 份临床血清样本进行检测。结果:本实验制备的两株单抗(分别命名为Ab1、Ab3;亚型都是IgG1)能够识别以cTnⅠ单体、cTnⅠ-C 复合物和cTnⅠ-T-C 复合物不同形式存在的cTnⅠ。Ab1、Ab3 的效价分别为1 :80 万和1 :40 万,亲和力常数分别为1.62×10⁹L/ mol、2.60×10⁸ L/ mol。利用2 株单抗建立的鲁米诺化学发光酶免疫分析法检测范围为:6.25 ~ 400 ng/ ml。对30 份临床样本进行检测,阳性检出率为77.3%,阴性检出率为100%。结论:建立了可以检测以cTn玉单体、cTnⅠ-C 和cTnⅠ-T-C 复合物形式存在的cTnⅠ的鲁米诺化学发光酶免疫分析法,具有更高的实用性。     

FGF2 人源化单抗E12 及其联合顺铂/ 紫杉醇体外抑制乳腺癌细胞增殖作用的研究

目的:研究人源化FGF2 单抗体E12 体外联合化疗药物抑制乳腺癌肿瘤细胞增殖的作用。方法:分析人源化FGF2 单抗可变区人源氨基酸序列比率;SDS-PAGE 和HPLC 检测单抗纯度;ELISA 测定单抗效价;BSA 法检测单抗浓度;CCK-8 法检测单抗联合化疗药物对乳腺癌肿瘤细胞株的细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测FGF2 单抗联合化疗药物对乳腺癌细胞株的促凋亡作用;使用Discovery Studio 4.5 软件对单抗的表位进行分析。结果:单抗可变区人源氨基酸序列比率重链为98.89%,轻链为100.00%;单抗纯度为99.02%;单抗ELISA 效价为1/243 000;单抗浓度为8.74 mg/ ml;CCK-8 结果表明顺铂为10、5、2.5、0.625 μg/ ml 时,单抗+顺铂组比顺铂组对MCF-7 细胞抑制率提高了14.5%、10.4%、1.5%、0.5%;对MDA-MB453 细胞抑制率提高了15.5%、14.8%、13.0%、6.8%,紫杉醇为1.0、0.1、0.01 μg/ ml 时,单抗+紫杉醇组比紫杉醇组对MCF-7 细胞抑制率提高了14.5%、11.1%、9.3%,紫杉醇为0.1、0.01、0.001 μg/ ml 时,单抗+紫杉醇组比紫杉醇组对MDA-MB453 细胞的抑制率提高了18.6%、19.9%、6.8%;流式结果表明,单抗、紫杉醇及单抗+紫杉醇组的MCF-7 细胞在AnnexinV/ PI 双阳性区所占比例提高了6.13%、7.36%和12.83%,同理MDA-MB453 细胞所占比例提高了4.86%、7.1%和14.1%,单抗、顺铂及单抗+顺铂组MCF-7 细胞在Annexin V/ PI 双阳性区所占比例提高了6.39%、9.46% 和17.76%,同理MDA-MB453细胞所占比例提高了5.38%、9.06%和19.39%;表位分析结果表明FGF2 单抗有效封闭FGF2 与受体结合的部分位点。结论:FGF2 人源单抗E12 人源化程度较高;FGF2 人源化单抗联合化疗药物相对单药组可较明显地提高肿瘤细胞增殖抑制作用以及促细胞凋亡作用;本研究为FGF2 抗体药物研发提供了前期基础。     

Construction,expression and tumor targeting of a single-chain Fv against human colorectal carcinoma

AIM: A single-chain antibody fragment, ND-1scFv, agains thuman colorectal carcinoma was constructed and expressedin E.coli, and its biodistribution and pharmacokinetic properties were studied in mice bearing tumor.METHODS: VH and VL genes were amplified from hybridoma cell IC-2, secreting monoclonal antibody ND-1, by RT-PCR,and connected by linker (Gly4Ser)3 to form scFv gene, which was cloned into expression vector pET 28a(+) and finally expressed in E.coli The expressed product ND-1scFv was purified by metal affinity chromatography using Ni-NTA, its purity and biological activity were determined using SDS-PAGE and ELISA. ND-1scFv was labeled with ^99mTc, and then injected into mice bearing colorectal carcinoma xenograft for phamacokinetic study in vivo.RESULTS: SDS-PAGE analysis showed that the relative molecular weight of recombinant protein was 30kDa with purity of 94%. ELIAS assay revealed that ND-1scFv retained the immunoactivity of parent mAb, being capable of binding specifically to human colorectal carcinoma cell line expressing associated antigen. Radiolabeled ND-1scFv exhibited rapid tumor targeting, with specific distribution in mice bearing colorectal carcinoma xenograft observed as early as 1h following injection. In vivo pharmacokinetic studies also demonstrated that ND-1scFv had very rapid plasma clearance(T1/2α of 5.7min, T1/2β of 2.6h).CONCLUSION: ND-1scFv shows significant immunoactivity,and better pharmacokinetic and biodistribution characteristics compared with intact mAbs, demonstrating the possibility as a carrier for tumor-imaging.