戊型肝炎病毒衣壳蛋白特异性人源单克隆抗体的筛选与鉴定

目的:建立从外周血快速筛选戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)衣壳蛋白特异性人源抗体的方法,从疫苗免疫者外周血中筛选出相应抗体并进行鉴定。方法:采用分选型流式细胞仪获得外周血中HEV 衣壳蛋白特异性的记忆B细胞,通过单细胞RT-PCR 的方法获得抗体序列,并进行重组表达,最后对获得的人源单克隆抗体进行初步性质鉴定。结果:成功筛选到识别HEV 衣壳蛋白的6 株人源单克隆抗体,6 株抗体均具有抗原结合活性,4 株抗体具有中和活性。结论:成功获得HEV 衣壳蛋白特异性人源单克隆抗体序列,并进行真核表达,对抗体的性质进行初步鉴定,为后期研究疫苗免疫的人体内的抗体演化打下基础。     

厦门地区孕妇戊型肝炎病毒血清流行病学调查CSCD

目的 调查厦门地区孕妇戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV）感染率及特征.方法 2014年9月至2015年6月,收集在厦门市湖里区妇幼保健院建卡、产检的910名孕妇血清;对计划于该院分娩的孕妇（前瞻性亚组）收集第二份产检血清.使用ELISA法检测血清抗-HEV IgM和抗-HEVIgG抗体;对抗-HEV IgM阳性血样进行HEV RNA检测,抗-HEV IgG阳性血样进行IgG定量检测.结果 910名孕妇中8人抗-HEV IgM阳性（0.88％,95％ CI 0.45％ -1.73％）,其中3人HEV RNA阳性,病毒载量介于600 - 700 copies/ml;140人抗-HEV IgG阳性（15.38％,95％ CI 13.19％ -17.68％）,几何平均浓度0.385 Wu/ml（95％ CI0.332 -0.445 Wu/ml）;抗-HEV IgG抗体阳性率存在年龄累积效应.前瞻性亚组共随访150名孕妇,其中4人随访期间出现血清抗-HEV IgM或IgG阳转,新发感染率10.7/100人年（95％ CI 3.39 - 25.7/100人年）,未观测到不良妊娠结局出现.结论 厦门地区孕妇HEV感染率较低,但孕期HEV新发感染风险远高于一般人群,应进一步扩大样本量,明确孕期发生HEV感染的疾病负担.     

戊型肝炎病毒新潜在中和性表位的发现

目的 探讨戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白是否存在除主要免疫优势中和表位aa459～606以外的其他中和表位.方法 通过对几株单克隆抗体及其表位的性质进行分析,对比位于主要免疫优势表位区aM59～606和位于该表位N端序列aa394～458区域的数个表位的中和活性.结果 发现位于aa423～437的表位对应的单抗具有潜在中和活性,不同于已知的HEV中和性表位(aa459～606),该表位是一个线性非免疫优势表位.结论 HEV ORF2 aa423～437为新的潜在的线性非免疫优势中和表位,该发现丰富了对HEV衣壳结构的认识,为HEV预防与治疗提供了新的针对靶点.     

热休克蛋白90与戊型肝炎病毒重组衣壳蛋白P239相互作用的初步研究

目的 对前期研究中所筛选出的能够与戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)重组衣壳蛋白颗粒P239存在特异性的相互作用的蛋白进行分析验证.方法 使用pull-down、MALDI-TOF-MS、免疫共沉淀技术及免疫荧光技术对与P239有潜在相互作用的蛋白进行鉴定和进一步分析.结果 MALDI-TOF-MS及免疫共沉淀技术,均表明该蛋白为热休克蛋白90(HSP90)并与P239相互作用.随后,对P239进入细胞的过程中胞内HSP90蛋白量及其分布的变化做了初步研究.发现虽然HSP90在蛋白总量上并没有发生明显的变化,但其定位却伴随着P239在胞内的迁移发生了由细胞膜向细胞核核周的转移.结论 HSP90可能参与了P239入胞后的转运并介导了HEV入胞后向效应细胞器的转运,为研究HEV的感染机制及对HEV的预防和控制提供了有益的线索.     

预防性戊型肝炎疫苗

近年来, 戊型肝炎逐渐被认为是被低估的全球疾病负担。感染导致相关损伤或死亡较严重的人群包括孕妇、有基础肝病的患者和老年人。疫苗是预防戊型肝炎病毒(HEV)感染的最有效手段。由于缺乏高效的HEV细胞培养系统使得开发灭活或减毒疫苗不可行, 因此研究者们对重组疫苗进行深入研究。HEV中和位点几乎完全位于病毒粒子的开放式阅读框2所编码的衣壳蛋白(pORF2)中。基于pORF2的许多候选疫苗显示出保护灵长类动物的潜力, 其中两种在成人中耐受性良好, 对预防戊型肝炎高度有效。全球首个戊型肝炎疫苗239(HEV Hecolin?疫苗)于2012年在中国获批上市。     

SARS-CoV-2广谱中和抗体性质鉴定

目的：对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)广谱中和抗体XMA09进行性质鉴定,探究其广谱中和突变株的潜在机制,为SARS-CoV-2的疫苗设计与广谱中和抗体筛选提供参考。方法：通过ExpiCHO真核表达系统与Protein A层析柱表达纯化XMA09蛋白;冷冻电镜技术确定XMA09识别的受体结构域（RBD）上的关键氨基酸位点;间接ELISA与表面等离子共振（SPR）技术检测XMA09对SARS-CoV-2及其突变株Spike蛋白的亲和力;采用基于水疱性口炎病毒（VSV）的假病毒系统检测XMA09对SARS-CoV-2野生型及突变株的中和能力。结果：本研究发现XMA09识别的表位较为保守,对多种突变株Spike蛋白均具有强结合能力,能广谱中和关切突变株（VOCs）,包括广泛流行的Omicron亚突变株BA.4/5。结论：XMA09是SARS-CoV-2广谱中和抗体,具有作为SARS-CoV-2治疗性抗体的潜力,并可为SARS-CoV-2的广谱疫苗设计与抗体药物开发提供参考意义。     

呼吸道合胞病毒融合蛋白(F蛋白)结构及中和表位的研究进展

正呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV),是造成全世界范围内婴幼儿下呼吸道感染的主要原因之一,2岁前的幼儿几乎全部感染过RSV[1],造成肺炎及毛细支气管炎等呼吸道疾病[2]。0~2个月的婴儿在感染RSV后易出现严重的病症[3]。而在最新的全球疾病死亡率分析中,1月到1周岁的儿童死亡中约有6.7%是由RSV感染造成的[4]。青壮年人群感染后病症较轻,但在老年人群中会出现严重病症及死亡病例[5]。人体被RSV感     

戊型肝炎的实验室诊断指标与临床应用

戊型肝炎病毒(HEV)感染引起的戊型肝炎已成为我国最主要的急性病毒性肝炎之一。近年来HEV各检测指标, 包括HEV RNA、HEV抗原、抗-HEV IgM及抗HEV-IgG等指标, 在方法学上有了新进展及在实验室诊断中有了新发现。急性戊型肝炎患者、慢性戊型肝炎患者、肝外临床症状患者诊断以及病原体携带者、相关职业体检人员检测等不同人群中应进行多指标联合诊断。不同人群各指标检测结果有各自的临床意义。     

呼吸道合胞病毒 L 蛋白单克隆抗体的制备

目的：制备人呼吸道合胞病毒L蛋白单克隆抗体，并对其进行性质鉴定。方法：选取RSV-A2 L蛋白上具有亲水性可能的loop区段，将这些目的片段展示在HBc149上进行原核表达并纯化。重组蛋白免疫6~8周BALB/c雌性小鼠，根据免疫后血清的ELISA和WB分析结果选择L3935和L4099组小鼠进行脾脏免疫。融合后，用间接ELISA法筛选和多次克隆化，获得稳定分泌抗L蛋白单克隆抗体细胞株，并结合ELISA、免疫荧光和免疫印迹对所获得的单抗进行鉴定。结果：获得11株L蛋白特异性单克隆抗体，亚类鉴定结果IgG1、IgG2a和IgG3单抗各3株，IgG2b单抗2株。结论：成功制备了L蛋白特异性单克隆抗体，也为RSV感染的免疫和发病机制研究奠定基础。     

4型戊型肝炎病毒重组衣壳研究及感染模型初探

目的 表达4型戊型肝炎病毒(HEV)开放式阅读框ORF2重组衣壳蛋白并初步建立用于4型HEV早期感染过程研究的细胞模型.方法 从猪胆汁中调取4型HEV ORF2的肽段(aa368-606)基因,并且利用大肠杆菌系统得到重组D66蛋白.结果 重组D66蛋白在水相中以二聚体为基本单位自组装成分子半径约为13 nm的颗粒.该颗粒与HEV感染的急性期、恢复期患者的血清均有较强的反应性.将D66颗粒与细胞共孵育,发现该颗粒可以与肝实质细胞系HepG2的细胞结合并进入细胞内,这种结合可被恢复期及急性期HEV患者血清所阻断.结论 这些结果表明重组D66蛋白颗粒,可以一定程度上模拟4型HEV的表面位点,并且可以特异性吸附并进入细胞,为进一步研究4型HEV感染的分子机制提供基础和平台.