流式细胞术的临床应用

流式细胞术(flowcytometry,FCM)是20世纪70年代发展起来的对单细胞定量分析的一种新技术。它借鉴了荧光标记技术、激光技术、单抗技术和计算机技术,具有极高的检测速度与统计精确性,而且从单一细胞可以测得多个参数,为生物医学与临床检验提供了全新视角和强有力手段。目前,随着单克隆抗体技术的发展,流式细胞仪检测技术已经广泛使用在基础研究和临床实践的各个方面,在肿瘤学、血液学,免疫学、微生物学、细胞生物学-遗传学及临床检验学等诸多领域内发挥着重要作用[1]。本文就其在临床上的应用综述如下。1流式细胞仪的工作原理流式细胞仪主要由细胞流动室、激光聚焦区、检测系统、数据处理系统等4部分组成,其工作原理是将待测标本制成单细胞悬液,经染色后进入流动室,流动室充满流动的鞘液,鞘液压力与样品压力是不同的,当两者的压力差异达到一定程度时,鞘液裹挟着的样品流中细胞排成单列逐个经过激光聚焦区。若将细胞中感兴趣的部分特异性地标上荧光染料,那么这些染料将在细胞通过激光检测区时受激光产生特定波长的荧光,通过一系列信号转换、放大、数字化处理,就可以在计算机上直观地统计染上各种荧光染料的细胞各自的百分率。选择不同的单克隆抗体及荧光染料...     

抗CD14单克隆抗体对脓毒症大鼠肺组织趋化因子和可溶性细胞间黏附因子-1表达的影响

目的探讨抗CD14单克隆抗体(Anti-CD14Mc Ab)治疗大鼠脓毒症急性肺损伤的保护机制。方法在体部分:18只雄性Wistar大鼠(200~250 g)随机均分为3组,假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)和抗CD14治疗组(Anti-CD14组),CLP组和Anti-CD14组采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症急性肺损伤模型,Sham组作为对照组,开腹后只翻动盲肠,不进行结扎穿孔。Anti-CD14组术后经股静脉注射Anti-CD14Mc Ab 0.2 ml(1μg/ml),Sham组、CLP组术后经股静脉注射等量生理盐水0.2 ml,6 h后经腹主动脉抽血,测定3组大鼠血浆中趋化因子(KC)和可溶性细胞间黏附因子-1(s ICAM-1)表达水平,右肺下叶HE染色,观察肺组织病理结构的改变。离体部分:将培养的NR8383一部分接种于24孔培养板,分为3组,对照组(Ⅰ组)、脓毒症模型组(Ⅱ组)和Anti-CD14干预组(Ⅲ组)。Ⅰ组加入正常血浆,Ⅱ组加入脓毒症血浆,Ⅲ组加入脓毒症血浆和Anti-CD14Mc Ab共同干预,37℃、5%CO2培养箱孵育1 h,刮取NR8383,采用Western blot测定NR8383内NF-κB(p65)蛋白的表达水平;另一部分接种在预先放入适当大小灭菌消毒的盖玻片的24孔板上,分组及干预措施同上,采用激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)检测NR8383内NF-κB(p65)蛋白入核情况。结果在体实验提示:(1)与Sham组[KC:(72.645±19.860)pg/ml;s ICAM-1:(252.766±19.921)pg/ml]相比,CLP组血浆KC、s ICAM-1水平[KC:(490.316±43.403)pg/ml;s ICAM-1:(686.952±36.411)pg/ml]和Anti-CD14组血浆KC、s ICAM-1水平[KC:(348.150±20.924)pg/ml;s ICAM-1:(411.050±47.170)pg/ml]明显升高,而Anti-CD14组KC、s ICAM-1水平明显低于CLP组,差异有统计学意义(P<0.05);肺组织病理结果提示CLP组肺间质明显增厚、肺间质及肺泡腔内有大量炎症细胞浸润,Anti-CD14组症状较CLP组明显减轻,但较Sham组有所增加;细胞实验Western blot检测显示:Ⅱ组(2.190 3±0.119 9)和Ⅲ组(1.365 8±0.101 8)NR8383的NF-κB(p65)入核量高于Ⅰ组(1.012 2±0.078 0),Ⅲ组的NF-κB(p65)入核量低于Ⅱ组,差别有统计学意义(P<0.05)。细胞实验CLSM检测结果提示:与Ⅰ组(0.131±0.009)相比,Ⅱ组(0.685±0.037)和Ⅲ组(0.210±0.008)NR8383 NF-κB(p65)蛋白入核明显升高,而Ⅲ组NR8383 NF-κB(p65)蛋白入核低于Ⅱ组(0.685±0.037),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Anti-CD14Mc Ab在脓毒症急性肺损伤时可能调控肺泡巨噬细胞NF-κB(p65)蛋白入核,使其KC表达减少,进而减少中性粒细胞浸润,起到肺保护作用;同时Anti-CD14Mc Ab能抑制内皮细胞表达s ICAM-1,减少中性粒细胞对内皮细胞的黏附作用,起到肺保护作用。     

大便隐血单克隆抗体法假阴性原因探讨

大便隐血原来的检测方法邻甲联苯胺法,由于灵敏度低、干扰性大等缺点已近淘汰,单克隆抗体检测法的高灵敏度、不受食物、药物等因素的影响而被广泛应用,由于单克隆抗体法具有高度的敏感性,只要人血红蛋白浓度少量到0.2μg/ml时,即可检出,所以如此高的灵敏度.使单克隆抗体法给人以不会出现假阴性的观念,然而,当便中血红蛋白浓度过高时,单克隆抗体法却会出现假阴性.原因探讨如下。     

实体瘤的单克隆抗体治疗

单克隆抗体是以肿瘤的特异性蛋白为靶点，在肿瘤治疗中具有特异性、有效性、低毒性的特点。单克隆抗体治疗的靶点包括细胞表面抗原和生长因子受体等。单克隆抗体单一治疗和联合化疗、放疗在实体瘤治疗中显示出了很好的疗效，抗体与放射性核素结合的放射免疫性治疗也有明显的疗效。本文通过单抗治疗机制和临床治疗试验两方面介绍了几种单克隆抗体以及抗体的治疗战略。     

转铁蛋白受体的结构、表达及功能

转铁蛋白受体(CD71)是参与铁的吸收和调节细胞生长的必需的蛋白.TfR敲除的胚胎在胚胎期的前12.5天内因为红细胞生成不足和神经发育不全而死亡.     

胰腺癌免疫疗法充满希望

目前临床上已在使用且证实有效的癌症免疫治疗手段主要有：单克隆抗体如西妥昔单抗、赫赛汀,癌疫苗,免疫检查点抑制剂,能激活非特异性免疫反应的细胞因子,非特异性免疫疗法如干扰素和干扰免疫系统分子。还有一些正在试验阶段的免疫疗法,比如体外培养专门攻击癌细胞的LAK淋巴细胞、TILs。     

成人急性淋巴细胞白血病29例免疫分型与临床观察

成人急性淋巴细胞白血病(acute Lymphocvtic leukemia,ALL)是一组异质性疾病,来源于不同恶性克隆的各亚型,在显著不同的生物学特征及预后因素.免疫分型是用已知的单克隆抗体(单抗)去鉴定细胞表面或细胞内的免疫标志,可用于剖析细胞的来源及分化阶段,尤其是与流式细胞术(FCM)联合应用以来,使诊断ALL的准确率提高到90%以上.免疫分型作为ALL的诊断和分型已为国际上广泛采用.本文对29例ALL进行免疫分型与临床观察总结,现报告如下.……     

免疫毒素清除人骨髓中克隆化白血病细胞的研究——Ⅰ.抗CD_7免疫毒素的制备及其细胞毒性质研究

本实验采用优化的方法通过SPDP交联抗CD_7单克隆抗体与蓖麻毒素制成免疫毒素。经MTT方法检测其对表达CD_7抗原的Molt-4及HPB-ALL细胞系均有显著特异性杀伤作用。克隆杀伤实验结果表明,该免疫毒素在10~(-10)mol/L浓度时达3个杀伤log(即清除99.9%的molt-4细胞),而在此浓度时,其只抑制21.6%的粗-单系造血祖细胞生长,从而初步证明其在自体骨髓移植中可用于清除骨髓中残留白血病细胞。