丝素蛋白材料细胞相容性的研究

目的：研究再生丝素膜对大鼠真皮细胞生长和细胞遗传学的影响。方法：采用静置贴壁培养法在再生丝素膜上培养大鼠真皮细胞，并用活细胞计数法和常规染色体检测技术，观察再生丝素膜对细胞生长和染色体的影响。结果 再生丝素膜能支持细胞正常生长，呈现正常的生长繁殖曲线且染色体的形态和数目正常。结论 再生丝素膜对大鼠真皮细胞具有良好的细胞相容性。     

医学遗传学教学中学生学习动机激发初探

现从实施启发式教学、激发学习成就感、妥善组织学习竞赛、运用多媒体课件等方面进行阐述,并结合教学实践经验探索激发学生学习动机的有效途径.     

花式IUD使用24个月临床效果观察

为观察花式宫内节育器(HCu280IUD)的临床使用效果,以2003年7月~2004年7月要求放置HCu280IUD的199例妇女作为观察对象,观察其24个月的临床应用效果,现报告如下。一、对象与方法1·对象要求放置IUD的经产妇女,身体健康,月经周期规律,无异位妊娠及葡萄胎史,血常规和白带实验室检查     

用一次性避光输液器制作微量泵延长管避光装置

硝普钠（50mg／支）是一种速效强效降压药．能直接扩张小动脉、静脉。降低外周阻力,使血压下降,在临床上应用比较广泛。但硝普钠必须避光保存,而且6h需更换。目前许多临床科室使用微量泵泵人硝普钠,为了使输液延长管避光,临床上常用黑色塑料袋缠绕延长管．操作麻烦,影响美观。鉴此．我科于2008年5月起．剖开一次性避光输液器包裹延长管,效果好．具体方法介绍如下。     

125I-神经生长因子对人脑胶质瘤细胞株U251的作用

目的 探讨125I-神经生长因子(125I-NGF)对U251细胞的杀伤能力及作用机制.方法 通过噻唑蓝(MTT)试验检测分别以18.5、37.0、74.0、148.0、296.0、592.0、1184.0、1480.0、1850.0、2590.0、3330.0、3700.0 kBq/ml 125I-NGF处理的U251的吸光度值,选择吸光度值趋于最低时最小125I-NGF浓度为其最低有效浓度.采用平板克隆形成试验,比较分别给予完全培养液、592 kBq/mlNa125I、1 mg/L NGF和592 kBq/ml 125I-NGF溶液处理的各组细胞克隆形成率,评价上述因素处理后U251细胞的增殖能力.采用放射自显影技术观察细胞内银颗粒分布,从而反映125I-NGF进入细胞的能力.并通过彗星试验及微核形成试验观察125I-NGF作用后U251细胞DNA的损伤,有明显彗尾及微核形成者DNA损伤严重.通过流式细胞仪检测125I-NGF作用后U251 G0/G1及S期细胞比例变化.结果 125I-NGF的最低有效浓度为592 kBq/ml,在此浓度下,125I-NGF可以有效进入细胞核内并损伤靶细胞DNA,经125I-NGF处理的胶质瘤细胞克隆形成率(0.02±0.01)较对照组(0.33±0.02)明显降低(P<0.01).125I-NGF作用后S期细胞比例(10.69±0.02)较对照组(35.47±0.02)下降,G0/G1期细胞比例(75.10±0.22)较对照组(53.17±0.03)升高(P<0.01).结论 125I-NGF在U251细胞中可以被转运入细胞核内,并可以有效杀伤靶细胞,其杀伤作用主要针对S期胶质瘤细胞.     

类风湿关节炎患者外周血髓源性抑制细胞的检测及与Th1/Th2细胞的相关性分析

目的: 检测类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血中髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells, MDSCs)的水平,分析其与Th1/Th2细胞的相关性。 方法：选取确诊的RA患者36例,根据临床资料计算DAS28评分,将其分为活动组和稳定组;另选取10例健康者作为对照组。3组MDSCs、Th1及Th2细胞的比例用流式细胞术检测并进行比较。分析MDSCs与Th1/Th2细胞的相关性。结果： 活动组MDSCs的比例明显高于稳定组和对照组(P均<0.05);稳定组MDSCS的比例与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。经Spearman相关性分析,MDSCs与Th1细胞呈负相关(P<0.05);而与Th2细胞无相关性(P>0.05)。 结论： MDSCs在RA活动期显著增高,且与CD4+T细胞亚群关系密切,可作为辅助评估RA活动状态的指标。     

人血清及神经生长因子对成人鼻黏膜嗅鞘细胞体外增殖的影响

目的:观察人血清及神经生长因子对成人鼻黏膜嗅鞘细胞体外增殖的影响.方法:取成人(自愿者)鼻腔嗅黏膜,制成细胞悬液,分别用DF12培养基(对照组)、10 ng/ml NGF DF12培养基、10%胎牛血清的DF12培养基、10 ng/ml NGF 10%胎牛血清的DF12培养基、10%人血清的DF12培养基和10 ng/mlNGF 10%人血清的DF12培养基培养细胞,并用差时贴壁法纯化嗅鞘细胞.采用MTT法观察上述各种培养液对嗅鞘细胞增殖的影响.结果:加入与不加入NGF培养液组之间的光密度无统计学意义(P＞0.05);胎牛血清组、人血清组与对照组之间的光密度有显著统计学意义(P＜0.01);胎牛血清组和人血清组之间的光密度无统计学意义(P＞0.05).结论:人嗅鞘细胞的体外培养对血清具有依赖性,人自体血清培养可替代胎牛血清用于嗅鞘细胞的体外培养、扩增.本研究结果为人嗅鞘细胞的自体移植治疗脊髓损伤提供了可行性基础.     

表面修饰对纳米晶胶原基骨细胞相容性的影响

目的:探索纤维蛋白(fibrin,FB)修饰的纳米晶胶原基骨(nanoHydroxyapatite/collagen,nHAC)支架材料上成骨诱导的骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)黏附、增殖及分化的情况。方法:实验分为两组:实验组,纤维蛋白修饰的纳米晶胶原基骨(FB-nHAC);对照组,单纯的纳米晶胶原基骨(nHAC)。将SD大鼠骨髓间充质干细胞定向诱导为成骨细胞,种植于支架材料上,体外复合培养。通过检测支架材料的细胞黏附率、不同时间点(3,7,10,14 d)支架材料中细胞数、碱性磷酸酶表达量以及扫描电镜观察细胞在支架材料上的生长状况,比较分析不同支架材料与细胞生物相容性差异。结果:大鼠MSCs经诱导培养14 d后,I型胶原免疫荧光染色为阳性;实验组支架材料的细胞黏附率显著高于对照组(P<0.05);且相同时间点实验组支架材料中的细胞数及碱性磷酸酶表达量也明显高于对照组(P<0.05);电镜观察发现两组材料上均有细胞生长,但实验组的细胞生长状况明显好于对照组。结论:表面修饰纤维蛋白后的nHAC支架材料具有更好的细胞黏附、增殖及促成骨分化能力。     

再生丝素蛋白膜作为人嗅鞘细胞移植支架的研究

探讨再生丝素蛋白膜对人嗅鞘细胞(hOECs)生物学特性的影响.人嗅鞘细胞接种在再生丝素蛋白膜上,取不同时相的细胞做下列实验.72 h固定,用免疫荧光染色技术观察人嗅鞘细胞的标志蛋白NT-3、S-100、GFAP、NGFRp75,用电子显微镜观察细胞在再生丝素蛋白膜上的生长状况;分别于48、72、96 h提取总蛋白,用免疫印迹法分析人嗅鞘细胞标志蛋白的表达情况;用MTF法分析细胞在再生丝素蛋白膜上的生长曲线.hOECs在再生丝素蛋白膜上能够很好地附着、铺展、生长,嗅鞘细胞的形态大多为梭形,嗅鞘细胞标志蛋白NT-3、NGFRp75、S-100及GFAP均呈免疫反应阳性,且免疫印迹结果与形态学结果一致;电镜结果显示,再生丝素蛋白膜的表面微纳结构适于细胞贴附、铺展;嗅鞘细胞在再生丝素蛋白膜上的生长曲线与培养板上无明显差异.再生丝素蛋白膜适合人嗅鞘细胞的贴附、增殖、生长,再生丝素蛋白膜与hOECs有较好的相容性,可以作为hOECs生长的候选组织工程支架用于修复神经损伤.     

成年大鼠活体嗅粘膜原代培养细胞中神经干细胞的生长特性及形态学观察

为建立成年活体嗅粘膜神经干细胞的简便、实用的体外培养方法 ,进而为神经干细胞自体移植治疗中枢神经系统损伤的研究提供更为安全的候选细胞 ,本实验自成年大鼠活体分离剪取部分嗅粘膜经胰酶消化制成细胞悬液 ,接种于玻璃培养皿 ,用含 10 %胎牛血清的 F12培养基培养 ,动态观察神经干细胞克隆球的形成及分化过程 ,并用 nestin、NSE、GFAP、vim entin及laminin等抗体作免疫细胞化学染色 ,对阳性细胞进行形态学鉴定。结果显示 ,成年大鼠经嗅粘膜活体取材后 ,可长期存活。成体嗅粘膜细胞混合体外培养时不同类型细胞的贴壁时间存在差异 ,神经干细胞呈球形 ,不直接贴附于培养皿 ,仅粘着在首先贴壁的扁平基底细胞上分裂形成克隆球 ,球内细胞 nestin免疫细胞化学染色阳性。原代培养 14 d后克隆球不再生长 ,球周细胞逐渐向外迁移分化为嗅细胞和嗅鞘细胞。提示 ,成体嗅粘膜神经干细胞可在普通培养基中形成干细胞克隆球 ,嗅粘膜中的其它细胞作为神经干细胞的基底饲养细胞有助于干细胞克隆球的形成 ;活体分离成体嗅粘膜作混合细胞体外培养获取神经干细胞的方法简便、安全、可行 ;本结果为嗅粘膜神经干细胞自体移植治疗中枢神经系统损伤的可行性研究提供了动物实验资料。