癌胚抗原肿瘤基因疫苗胶囊的研制

 目的研制癌胚抗原(CEA)阳性肿瘤基因疫苗结肠溶胶囊。方法通过分子克隆技术将加强型绿色荧光EGFP cDNA连接于CEA cDNA的上游,构建示踪子EGFP-CEA融合基因疫苗pVGC2。使用特制的微小结肠溶空心胶囊制备鼠用基因疫苗口服胶囊。收集小鼠口服用药后的腹腔游离细胞,采用荧光显微镜观察绿色荧光以便评估EGFP-CEA融合蛋白质的表达情况。结果所构建的重组质粒的目的基因片段测序结果证实所接入的EGFP-CEA cDNA序列与母本cDNA序列100%一致。所制备的口服胶囊的平均溶出度为(91.1±3.65)%。检测结果显示,口服胶囊后小鼠腹腔游离细胞中可见到绿色荧光。结论成功地制备了口服基因疫苗胶囊。小鼠腹腔游离细胞中绿色荧光融合蛋白的表达预示,口服基因疫苗胶囊是一种潜在可行的抗肿瘤免疫途径。     

内镜下局部注射化疗药物治疗晚期食管癌

我院是一个以肿瘤治疗为主的综合性医院,许多癌症患者得到了早期诊断和早期治疗,但仍有不少患者在就诊时已失去了手术的机会.为改善这些患者的生存质量,延长其生存期,我们开展了内镜下局部注射化疗药物治疗晚期食管癌,取得了一定的疗效,现报告如下.     

加味逍遥散对乳腺增生模型生殖内分泌系统的影响

目的探讨加味逍遥散治疗乳腺增生病的疗效和对性激素的调节作用。方法通过动物实验观察加味逍遥散治疗乳腺增生病的疗效和性激素的变化。结果治疗组家兔乳腺高度及乳腺直径均较模型对照组明显缩小;雌二醇和垂体催乳素明显降低(均P<0.05),孕酮和睾酮则有回升(均P<0.05),促卵泡成熟激素和促黄体生成素改变无显著性差异(均P>0.05)。结论加味逍遥散对实验性增生家兔有明显防治作用,能调整家兔体内的性激素分泌。     

K562-DC融合瘤苗刺激的CIK/NK细胞在荷瘤NOD/SCID小鼠体内的杀瘤活性

目的 探讨经K562细胞-树突细胞(DC)融合瘤苗刺激的脐血源性细胞因子诱导的杀伤(CIK)/自然杀伤(NK)细胞在荷瘤NOD/SCID小鼠体内的杀伤效能及其安全性.方法 通过不同细胞因子的组合分别诱导脐血单个核细胞(MNC)成为DC和CIK/NK细胞,通过聚乙二醇(PEG)将灭活K562细胞与DC融合形成K562-DC融合瘤苗.以10:1比例在CIK/NK细胞培养体系中加入K562-DC融合瘤苗,制备K562-DC融合瘤苗刺激的CIK/NK细胞.小鼠均经尾静脉接种K562细胞1×106诱导荷瘤鼠;于接种肿瘤细胞后24 h按不同分组分别经尾静脉输注K562-DC融合瘤苗刺激的CIK/NK细胞1×107、CIK/NK细胞1×107,同时设相应的非荷瘤鼠对照.比较各组小鼠的生存率、存活时间;用流式细胞术检测小鼠外周血、肝、肺组织中人CD13+细胞和外周血人CD56+细胞.结果 在接种1×106K562细胞后未经处理的小鼠39 d内全部死亡,8只鼠中肉眼可见瘤块的小鼠5只,其中位于肝脏的4只、脾脏的1只.接种K562细胞后接受K562-DC瘤苗刺激的CIK/NK细胞治疗的8只小鼠第65天时死亡1只,抗瘤有效率为87.5%;接受CIK/NK细胞治疗小鼠死亡2只,时间分别为接种K562细胞后第56天及第62天,抗瘤有效率为75.0%,均未发现肉眼可见瘤块.该两组小鼠存活时间分别为(69.4±1.8)d、(67.2±5.3)d,两组间差异无统计学意义(P＞0.05),均高于未予治疗的荷瘤对照组[(30.4±4.6)d](P＜0.01),荷瘤后接受K562-DC瘤苗刺激的和未经瘤苗刺激的CIK/NK细胞治疗的两组其余小鼠存活均超过70 d.经CIK/NK细胞治疗的两组存活小鼠外周血,肝、肺组织中人CD13+细胞率差异无统计学意义,均显著低于荷瘤未治疗组(P＜0.01),而治疗的两组存活小鼠外周血人CD56+细胞率与输注不同CIK/NK细胞的非荷瘤对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经过灭活肿瘤细胞预孵育的脐血源性CIK/NK细胞接种在动物体内具有抗瘤活性,无致瘤性.     

环磷酰胺预处理脐血移植小鼠模型的建立及其对骨髓龛位的影响

【目的】建立环磷酰胺 (CTX)预处理脐血移植 (UCBT)小鼠模型 ,并探讨预处理后骨髓龛位腾出的特点和机制。【方法】分别以 10 0 ,2 0 0 ,380mg/kg 3种剂量CTX腹腔注射BALB/c小鼠 ,检测注射后 1周内外周血象、骨髓及外周血CD34 细胞含量、骨髓细胞凋亡及病理学改变。用C5 7BL/ 6鼠脐血 (FNPB)作供体移植经“致死量”CTX预处理的BALB/c鼠 ,动态观察移植后受鼠存活状况、植入水平、造血与免疫功能恢复及移植物抗宿主病 (GVHD)情况。【结果】在CTX处理后 3～ 4d内 ,骨髓造血细胞损伤渐加重 ,血窦结构紊乱 ,细胞碎屑弥漫分布 ,外周血与骨髓CD34 细胞水平进行性降低至最低值 ,下降的速度和程度与CTX剂量呈正比。骨髓细胞凋亡发生率的峰值出现在第 1天 ,第 3天恢复正常。FNPB移植能明显提高受鼠存活率 ,重建部分造血与免疫功能 ,未见明显GVHD表现 ,并在受体内检出供体细胞的植入。【结论】成功建立CTX化疗预处理小鼠脐血移植模型。干细胞占据的龛位是在化疗预处理后 4d逐渐完成腾空 ,凋亡是参与此过程的机制之一。     

放射性核素32磷瘤内注射治疗胰腺癌的实验研究

我们进行放射性核素3 2 磷 (3 2 Ｐ)瘤内注射治疗胰腺癌的动物实验 ,旨在为临床治疗提供理论依据 ,现报道如下。一、材料与方法1.药物 :Ｃｒ3 2 ＰＯ-4 胶体 (3 2 Ｐ ,中国原子能科学研究院提供 )颗粒直径 2 0 0～5 0 0 μｍ ,放化纯 >98%。2 .动物、细胞株及方法 :ＢＡＬＢ/ｃ ｎｕ裸小鼠 2 8只 ,体重 2 0～ 2 3ｇ ,鼠龄 10周。胰腺癌细胞株ＳＷ 1990由中山医科大学孙逸仙纪念医院消化科惠赠。将ＳＷ1990瘤细胞培养扩增后以 2× 10 6个肿瘤细胞接种量分别种于 3只裸鼠的背部皮下 ,待接种部位肿瘤生长直径达 1.0ｃｍ时将 3只小鼠处死。在无…     

光动力疗法对实验性视网膜母细胞瘤细胞植瘤超微结构的影响

目的：评价血卟啉衍生物（HPD）介导的光动力疗法（PDT）对裸鼠眼内视网膜母细胞瘤（KB）移植瘤超微结构的影响。方法：将15只裸小鼠视网膜细胞瘤眼内动物模型眼分成A、B、C、D及E五组,其中A和B组为观察组,即既给光敏剂HPD又照光,但光照剂量不同,A组为150mw/cm^2,B组为300mw/cm^2;C组不给光敏剂,只照光;D组只给光敏剂HPD,不照光;E组为未作任何处理的对照组。血卟啉衍生物剂量为5mg/kg,经尾静脉注射给药。照光时机为光敏剂注射后72小时。照光仪的绿激光小为532nm。照光后24小时摘除眼球作透射电镜检查。结果：①实验组A：肿瘤细胞结构不完整,胸质呈浓缩状。核膜不完整,核染色质浓缩成块或裂解成碎片;②实验组B：肿瘤细胞破坏程度更明显,看不到完整的细胞轮廓,也见不到膜性结构及细胞器,仅见一些呈浓缩状态的片状物质,见不到完整的细胞核。③对照组E组：未见组织或细胞损害。瘤细胞轮廓清晰,胞膜完整。胞质内有丰富的线粒体、粗面内质网、核糖体。核膜完整,核间隙未见明显增宽。C组的D组瘤细胞超微结构的改变状况同E组。结论：本研究结果提示：血卟啉衍生物介导的光动力作用对裸鼠眼内RB移植瘤具有显著的杀伤作用,高照光剂量下肿瘤细胞坏死程度更明显。     

人结肠癌动物皮下实体瘤模型的建立

 摘 要：【目的】 建立临床背景清楚的结肠癌动物皮下实体瘤模型,为结肠癌发病机制及治疗策略的研究提供可靠的实验动物模型。【方法】 采用组织块直接移植法将收集到的12例结肠癌组织临床标本移植到免疫缺陷小鼠右侧肩胛皮下,第1-2代用NOD-Scid小鼠;将每个病例的第二代皮下肿瘤,分别连续皮下接种至NOD-Scid小鼠和BALB/C裸小鼠两组动物中,传代至第5代。观察每个病例在两种品系动物的成瘤时间、标本的成瘤率;进行HE染色和CDX-2及 CK20免疫组化检测。【结果】 本实验NOD-Scid小鼠组的第3代和第5代皮下移植瘤的病例成瘤率分别为92%、58%,BALB/C裸小鼠组的分别为75%、50%。病理切片显示肿瘤组织细胞排列成不规则腺体状,有病理性核分裂相。CDX-2、CK20染色呈阳性。【结论】初步建立了临床背景清楚的人结肠癌的NOD-Scid小鼠和BALB/C裸小鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究结肠癌发病机理及治疗策略奠定基础。     

天花粉蛋白对单纯疱疹病毒1型DNA聚合酶和DNA结合蛋白mRNA表达的影响

目的探讨天花粉蛋白对体内外单纯疱疹病毒-1（HSV-1）DNA聚合酶和DNA结合蛋白mRNA表达的抑制作用。方法 36只小鼠随机分为正常组、模型对照组和天花粉蛋白治疗组,每组各12只,小鼠颅内接种HSV-1建立病毒性脑炎模型,治疗组于接种HSV-1前30min腹腔注射天花粉蛋白注射液,于接种病毒后12h、24h、48h、96h分别测定脑组织HSV-1DNA聚合酶和DNA结合蛋白mRNA表达水平。体外培养神经细胞分为正常组、药物对照组、病毒对照组和药物预处理组,接种病毒后12h、24h、48h、96h分别测定各组培养神经细胞的HSV-1DNA聚合酶和DNA结合蛋白mRNA表达水平。结果天花粉蛋白治疗组于小鼠颅内接种HSV-1后12h、24h、48h、96h脑组织HSV-1DNA聚合酶mRNA表达水平（8.39±0.84、9.62±0.87、7.81±0.90、7.66±0.85）显著低于模型组（11.26±1.02、12.43±1.17、11.56±1.68、12.78±1.71）（P〈0.05）;治疗组脑组织HSV-1DNA结合蛋白mRNA表达水平（7.28±1.07、8.25±0.78、7.56±0.96、7.85±1.22）显著低于模型组（10.45±2.72、12.33±1.97、11.24±1.86、12.54±2.32）（P〈0.01）。药物预处理组在12h、24h、48h、96h培养神经细胞HSV-1DNA聚合酶mRNA表达水平（9.33±0.87、9.57±0.97、9.73±0.94、9.84±0.86）显著低于病毒对照组（10.15±1.12、15.63±1.24、12.77±2.38、16.58±1.92）（P〈0.05）;药物预处理组在24h、48h、96h培养神经细胞HSV-1DNA结合蛋白mRNA表达水平（7.58±1.75、8.63±1.79、7.38±1.47）显著低于病毒对照组（10.24±2.16、10.85±1.67、11.63±2.05）（P〈0.05）。结论天花粉蛋白对体内外HSV-1DNA聚合酶和DNA结合蛋白mRNA表达具有抑制作用。     

天花粉蛋白对小鼠单纯疱疹病毒感染性脑损伤的保护作用

目的：探讨天花粉蛋白对小鼠实验性单纯疱疹病毒感染性脑损伤的保护作用。方法：动物随机分为3组,空白对照组(空白组),模型对照组(模型组),模型+天花粉蛋白处理组(治疗组)。小鼠颅内接种单纯疱疹病毒I型(HSV-1)建立病毒性脑炎模型,于接种HSV-1前30min腹腔注射天花粉蛋白注射液,接种病毒后1,12,24,48h、4和7d测定脑组织含水量;感染后7d测定脑组织病毒滴定度,观察脑组织形态变化及动物神经症状评分。结果：天花粉蛋白治疗组于接种HSV-1后48h至7d脑组织含水量明显低于对照组,差异有显著性(P<0.05),治疗组脑组织病毒滴度为1.16±0.45,明显低于模型组的2.89±0.44,差异有显著性;治疗组神经缺陷症状评分也明显低于对照组,病理形态观察治疗组脑组织间质水肿较轻,神经元无浓染、无坏死。结论：天花粉蛋白对小鼠实验性单纯疱疹病毒感染性脑损伤具有保护作用。