Ki-67启动子的克隆及其转录活性

目的 克隆肿瘤特异Ki-67启动子,观察其在人肿瘤细胞中的转录活性.方法 提取肾癌Ketr-3细胞基因组总DNA作为模板,聚合酶链反应(PCR)获取1.6 kb的Ki-67启动子DNA片段.克隆到pGL3-Basic载体构建双荧光素酶检测质粒pGLB-Ki-67.将pGLB-Ki-67转染4种人肿瘤细胞及人脐静脉内皮Huvec细胞,使用双荧光素酶检测系统鉴定启动子活性及肿瘤特异性.结果 电泳与测序结果 显示克隆出的Ki-67启动子片段序列与Genbank中记录一致,pGLB-Ki-67质粒构建成功.其启动子活性在Hela、BIU-87、Ketr-3、A549 4种人肿瘤细胞内分别达到SV40 promoter/enhancer活性的21.0%、31.1%、23.9%和7.2%;在Huvec细胞内仅为0.5%.结论 克隆出I(5-67基因启动子(-820～+771),并证明其具有良好转录活性.     

含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽白细胞介素-24突变体蛋白对肝癌细胞抑制作用

目的 观察含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽模体的白细胞介素(IL)-24突变体蛋白(RGD-IL-24)对肝癌细胞的抑制作用.方法 肝癌HepG2细胞分别加入各10μl的RGD-IL-24(8 mg/L)、IL-24(8 mg/L)和磷酸盐缓冲液(PBS),噻唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞生长抑制作用;DAPI染色检测HepG2细胞凋亡;免疫印迹法检测HepG2细胞bax、bcl-2及Caspase-3蛋白表达;黏附实验检测与HepG2细胞的靶向黏附.结果 RGD-IL-24、IL-24治疗4 d后HepG2细胞存活率分别为(0.219±0.015)、(0.397±0.009),与对照组(0.823±0.013)比较差异有统计学意义(P<0.01).RGD-IL-24、IL-24治疗组细胞凋亡率分别为(0.631±0.027)、(0.472±0.031),与对照组(0.082±0.013)比较差异有统计学意义(P<0.01).RGD-IL-24抑制HepG2细胞生长、诱导凋亡效果均比IL-24显著增强(P<0.05).与IL-24治疗组比较,RGD-IL-24治疗组HepG2细胞促凋亡蛋白bax增加、抗凋亡蛋白bcl-2减少、活化Caspase-3蛋白量增加.黏附实验证实RGD-IL-24与HepG2细胞的靶向结合作用增强.结论 含RGD肽模体的IL-24蛋白能通过与肝癌HepG2细胞的靶向结合增强其凋亡诱导作用.     

表达端粒酶逆转录酶siRNA的溶瘤腺病毒对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用

目的 观察表达针对端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的小干扰RNA(hTERT siRNA)的溶瘤腺病毒(ZD55-hTERT)抑制肾癌移植瘤生长作用.方法 荷肾癌裸鼠随机分4组,每组8只.瘤体内分别注射ZD55-hTERT、增殖缺陷型腺病毒(Ad-hTERT)、溶瘤腺病毒ZD55-EGFP及磷酸盐缓冲液(PBS),每次注射病毒7×108pfu/只,连续注射3 d.注射后第7天,每组处死3只取肿瘤组织,免疫组织化学检测肿瘤hTERT、E1A表达及凋亡.第50天时处死动物测量肿瘤体积.结果 ZD55-hTERT、Ad-hTERT、ZD55-EGFP及PBS处理组肿瘤体积(mm3)分别为:124.1±27.5、609.0±102.5、499.8±77.1、1552.1±206.4,ZD55-hTERT处理组与各组之间差异有统计学意义(P<0.01).Ad-hTERT处理组肿瘤无E1A表达,ZD55-hTERT处理组E1A大量表达,表明病毒复制.ZD55-hTERT处理组肿瘤hTERT表达显著低于Ad-hTERT处理组,凋亡细胞阳性率均显著高于Ad-hTERT处理组.结论 表达hTERT siRNA的溶瘤腺病毒ZD55-hTERT具有更强的抑制肾癌生长作用.     

肿瘤Ki-67抗原HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的鉴定

目的 鉴定Ki-67抗原HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位,为制备肿瘤疫苗提供依据.方法 根据BIMAS和SYFPEITHI数据库对人Ki-67抗原CTL表位综合评分结果,合成7条候选肽.通过T2-肽结合实验检测候选肽与HLA-A2分子亲和力;通过酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测HLA-A2阳性CTL细胞分泌IFN-γ能力,评价候选肽免疫原性.结果 合成的候选肽及阳性对照肽HIV-1 pel 476-484纯度均超过95%.T2-肽结合实验结果显示280～288位置Ki-67氨基酸序列LQGETQLLV与HLA-A2分子结合力较强,其能够诱导特异性CTL活化.结论 LQGETQLLV(280～288)是Ki-67抗原的HLA-A2限制性CTL表位.     

胆囊多发性腺瘤性息肉一例

患者男、33岁,上腹疼痛4个多月,并放射至右腰背部。检查:上腹部无压痛;皮肤巩膜无黄染;全身浅表淋巴结不肿大。B超见胆囊壁多发实质、非均质占位病变(考虑胆囊多发性息肉可能性大)。临床诊断:1.胆囊炎;2.胆囊多发性息肉?术中见胆囊内靠颈部有大小不等的息肉多个,最大0.5×0.5×0.5cm,最小约0.2×0.2cm。病理检查:胆囊7×4cm大小,浆膜面光滑,壁厚0.2～0.3cm,胆囊颈部见5枚菜花样、细乳头状新生物,大的有0.6×0.5cm,可见一小蒂,小的0.3×0.2cm,表面灰绿色、质软、切面灰白色。镜检:片示胆囊粘     

低铁环境对去势小鼠血清骨钙素及骨组织影响的初步研究

目的 观察去势小鼠在低铁环境下血清骨钙素及骨微结构的变化.方法 24只12周龄C57BL/6小鼠,体重(19.5±0.5)g分为假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、低铁组(OVX+DFO),每组8只.低铁组于卵巢切除后第2天腹腔注射甲磺酸去铁胺(DFO),剂量为30 mg/kg,每周3次,共5周;模型组、假手术组均腹腔注射同等刹量0.9％生理盐水,共5周;第5 周末取血后处死小鼠并分离子宫、左侧股骨;ELISA试剂盒检测血清骨钙素、血清铁蛋白;分析天平称子宫重量;显微CT扫描股骨末端并取目标区进行三维重建,获取骨小梁、骨皮质三维结构图像,进行松质骨、皮质骨定量分析.结果 (1)血清骨钙素、血清铁蛋白:低铁组均显著低于模型组、假手术组(P＜0.01);(2)松质骨、皮质骨骨密度:低铁组均显著低于模型组、假手术组(P＜0.01),骨小梁厚度、骨小梁间隔低铁组显著增加(P＜0.01),骨小梁数量、骨体积分数低铁组显著降低(P＜0.01).结论 一定剂量的DFO(30 mg/kg)可以降低去势小鼠血清铁蛋白水平和骨组织形成指标.     

数字医疗

<正>腕表监测血压新加坡健咨国际(HealthSTATS International)研发出血压测量新技术,他们通过腕部桡动脉处微小的脉搏来监测患者的血压。该公司与惠普公司合作,由新加坡电信     

红外线跟踪摆位系统与电子射野影像装置对摆位误差测量结果的比较研究

目的 比较红外线跟踪摆位系统(IM-BPS)和电子射野影像装置(EPID)对食管癌和肺癌患者摆位误差测量结果的优劣。方法 2007-2008年间接受三维适形或调强放疗的40例食管癌和27例肺癌患者,使用IM-BPS和EPID测量其在左右、头脚、前后方向上的摆位误差,并对两种测量结果行配对t检验和符合程度的x2检验。结果 用EPID每例患者摆位验证需10～12 min,而IM-BPS仅需2～5 min。IM-BPS和EPID测量的食管癌患者左右、头脚、前后方向摆位误差均值分别为3.49、3.19、3.31和4.03、3.41、3.43 mm (t=5.17、1.88、1.57,P=0.000、0.060、0.119);肺癌患者的分别为4.23、3.51、3.39 mm和4.85、3.53、3.74 mm (t=5.63、0.28、3.88,P=0.000、0.780、0.000)。≥65％食管癌和≥55％肺癌患者两种测量结果在3个方向摆位误差差值为±1 mm内时差异有统计学意义(x2 =51.09,P=0.000和x2 =53.35,P=0.000)。结论 IM-BPS对食管癌及肺癌患者摆位误差的测量结果大部分优于EPID,虽然两种方法都能对患者治疗摆位进行较为准确测量和质量控制,但因IM-BPS应用直观、简便、耗时短、可实时l监测校正而更易于临床使用。     

舒芬太尼用于腹腔镜手术对患者血流动力学的影响

目的观察舒芬太尼用于腹腔镜手术对患者血流动力学的影响。方法 60例择期行胆囊腹腔镜手术（LC）的患者,ASAⅠ~Ⅱ级,随机分为舒芬太尼组（S组,n=30）和芬太尼组（F组,n=30）。观察两组患者不同时段的平均动脉压（MAP）和心率（HR）。结果与F组比较,S组在气管插管、气管拔管期的MAP较低（P〈0.05）。结论在腹腔镜手术中,舒芬太尼对患者血流动力学的稳定优于芬太尼。     

Modify Kugel术与Rutkow术治疗成人原发腹股沟疝的对比研究

目的 与Rutkow术治疗成人原发腹股沟疝比较,探讨Modify Kugel术的优点.方法 回顾性分析笔者所在医院2006年3月~2009年3月开展的30例(35侧)Rutkow 疝环填充式无张力疝修补术及Modify Kugel 无张力疝修补术35例(40 侧)的临床资料.结果 全组病例按手术情况、术后并发症等,对两种手术方式进行比较,Modify Kugel术术后止痛剂应用次数、平均恢复自主活动时间、切口疼痛及异物感例数均明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);平均切口长度、平均手术时间、发热例数、平均住院时间均减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论 与Rutkow术比较,Modify Kugel术更符合工程力学原理,适应证更广,免缝合,减少了手术时间及并发症,术后疼痛轻、恢复快;具有微创手术的特点,与腹腔镜手术具有相似的效果.Modify Kugel术是一种具有良好发展潜力的无张力疝修补术.