趋化因子受体在肝癌细胞中的表达及其意义

目的 观察趋化因子受体(CCR1 CCR7 CXCB3 CXCR4)在人肝癌细胞系(Hep3BHepG2 HLE和HLF)的表达,并探讨其作用机制.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、细胞免疫组织化学、流式细胞仪测定趋化因子受体在肝癌细胞表面的表达,通过肝癌细胞Hep3B体外侵袭实验即重组大鼠巨噬细胞激动蛋白(CCL3)-1对Hep3B细胞穿透人工重组基底膜能力的影响来检测趋化因子受体在肝癌侵袭转移时所起的作用,并通过激光共聚焦显微镜观察趋化因子受体在肝癌细胞侵袭转移过程中的作用机制.结果 通过RT-PCR,流式细胞术可检测到CCR1 mR-NA及蛋白在肝癌细胞中表达,免疫组织化学显示CCR1在肝癌细胞包膜和胞质内都有表达.细胞侵袭实验提示Hep3B在CCL3的刺激下,实验组Hep-3B细胞通过基底膜的数量(213±12)多于对照组细胞通过基底膜的数量(102±11),差异有统计学意义(P<0.01).运用激光共聚焦检测到实验组胞内钙离子的浓度增加到.结论 肝癌细胞系(Hep3B HepG2 HLE和HLF)的表面的表达CCRl,且CCR1在肝癌细胞侵袭转移中发挥重要的作用,其作用机制与细胞内钙离子浓度有很关.     

CXC趋化因子与肿瘤血管新生

趋化因子在免疫调节、血管新生以及介导肿瘤的器官特异性转移中发挥重要作用。其中CXC趋化因子超家族由于N-端谷氨酸-亮氨酸-精氨酸基序(Glu-Leu-Arg,ELRmotif)的有无使其在血管新生过程中具有了促进或者抑制血管新生的不同作用:含有ELR(ELR )的CXC趋化因子经血管内皮组织上CXCR2介导血管新生促进作用;而不含有ELR(ELR-)的CXC趋化因子通过血管内皮组织上CXCR3介导血管新生抑制作用。     

巨噬细胞炎性蛋白4的突变和原核表达

目的 探索如何抑制嗜酸细胞的趋化作用，选择β-趋化因子巨噬细胞炎性蛋白4（MIP4）的突变性（Met-MIP4)作为趋化因子受体3的拮抗剂，将Met-MIP4基因在原核细胞中进行表达。方法 设计MIP4基因的PCR引物并进行氨基酸突变，将MIP4N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸，以正常人肺酸突变，将MIP4N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸。以正常人肺cDNA文库为模板，PCR方法获取Met-MIP4基因，克隆入载体pUC19，测序验证序列已得到突变，将正确的基因插入到GST融合表达载体pGEX-4T中，以IPTG诱导表达。结果 PCR产物为220bp左右的片段，连接入pUC19质粒后测序验证获得正确突变，构建的pGEX-4T融合表达载体在大肠杆菌中表达，经SDS-PAGE凝胶电泳显示有大小约34kU的新生融合蛋白表达。结论 成功突变并克隆了β-趋化因子MIP4基因，SDS-PAGE表明，与GST融合的Met-MIP4突变体已得到表达，为进一步研究其生物学活性奠定了基础。     

肺结核患者血清趋化因子CXCL8、RANTES与 疗效的相关性

目的 探究肺结核（pulmonary tuberculosis,PTB）患者血清CXC趋化因子配体8（C-X-C motif chemokine ligand 8,CXCL8）、调节活化正常T细胞表达和分泌因子（regulate upon activation normal T cell expressed and secreted,RANTES）水平与治疗效果的关系。方法 选取2020年2月至2021年2月温州医科大学附属衢州医院收治的450例初诊涂阳的PTB患者为研究对象。所有患者均采用标准抗PTB治疗,根据治疗效果分为有效组（n=383）和无效组（n=67）。比较两组一般资料及血清CXCL8、RANTES水平,采用Logistic回归分析PTB患者治疗效果的影响因素以及CXCL8、RANTES对PTB患者治疗效果的预测价值。结果 治疗后,450例PTB患者治疗有效率为85.11%。无效组的全程督导占比低于有效组,吸烟、外地户籍占比及治疗前血清CXCL8、RANTES水平高于有效组,差异均有统计学意义（P<0.05）,性别、职业、年龄比较,差异无统计学意义（P>0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,吸烟、户籍类型、CXCL8及管理方式是PTB患者治疗无效的影响因素（P<0.05）。血清CXCL8、RANTES预测PTB患者治疗效果的曲线下面积（areas under the curve,AUC）分别为0.877、0.865,敏感度分别为77.6%、79.1%,特异性分别为88.3%、89.3%;CXCL8、RANTES联合预测PTB患者治疗效果的AUC为0.955,敏感度为94.0%,特异性为85.4%。结论 血清CXCL8、RANTES高水平与PTB患者治疗不良密切相关,检测血清CXCL8、RANTES有利于评估PTB患者治疗效果,且二者联合预测效果更佳。     

妊娠糖尿病患者孕晚期血清LRG1、CCL2水平与产后血糖转归的相关性分析

目的 探究妊娠糖尿病（GDM）患者孕晚期血清富亮氨酸α2-糖蛋白1(LRG1）、趋化因子配体2(CCL2）水平与产后血糖转归的相关性。方法 选取2019年6月—2021年6月衡水市人民医院收治的98例GDM孕晚期患者为研究对象,根据患者产后6周的口服葡萄糖耐量试验（OGTT）结果分为异常组42例和恢复组56例。收集两组患者的基线资料,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清LRG1、CCL2水平;采用Pearson法分析血清LRG1、CCL2水平与产后血糖及胰岛素指标的相关性;采用多因素一般Logistic回归分析影响产后血糖异常的因素。结果 异常组患者孕前体质量指数（BMI）高于恢复组（P<0.05）;异常组患者孕晚期及产后血清LRG1、CCL2水平均高于恢复组,且恢复组产后血清LRG1、CCL2水平低于孕晚期（P<0.05）;异常组患者孕晚期及产后甘油三酯（TG）、空腹血糖（FPG）、餐后1 h血糖（1 hPG）、餐后2 h血糖（2 hPG）、空腹胰岛素（FINS）及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）均高于恢复组（P<0.05）,异常组患者产后FPG、FINS、H...     

依达拉奉联合瑞舒伐他汀治疗心源性脑梗死的疗效及对血清CXCL12、UCH-L1、HC-gp39水平的影响

目的 探究依达拉奉联合瑞舒伐他汀治疗心源性脑梗死的疗效及对血清趋化因子12（CXCL12）、泛素C末端水解酶L1（UCH-L1）、人类软骨糖蛋白-39（HC-gp39）水平的影响。方法 选取2020年3月—2022年4月达州市中心医院收治的90例心源性脑梗死患者作为研究对象,随机分为对照组和观察组,各45例。对照组给予瑞舒伐他汀治疗,观察组给予依达拉奉联合瑞舒伐他汀治疗。比较两组疗效、CXCL12、UCH-L1、HC-gp39、血液流变学指标、血脂水平及美国国立卫生研究院脑卒中量表（NIHSS）评分。结果 观察组总有效率高于对照组（P <0.05）。观察组治疗前后血清CXCL12、UCH-L1、HC-gp39水平的差值高于对照组（P <0.05）。观察组治疗前后全血低切黏度、全血高切黏度及纤维蛋白原水平的差值高于对照组（P <0.05）。观察组治疗前后TC、TG、LDL-C水平的差值高于对照组（P <0.05）。观察组治疗前后NIHSS评分的差值高于对照组（P <0.05）。结论 依达拉奉联合瑞舒伐他汀治疗心源性心肌梗死可有效提高患者临床疗效,改善血液流变学指标、血脂、神经功能及炎症反应。     

巨细胞病毒感染对动脉粥样硬化的影响

目的：研究巨细胞病毒(CMV)感染和动脉粥样硬化的关系，并探讨其可能机制。方法：通过一个大样本从血清流行病学(ELISA检测患者血清中抗CMV的IgG抗体)和分子生物学(PCR检测动脉粥样硬化病变中CMV特异性基因)方面探讨巨细胞病毒感染和动脉粥样硬化的关系，并检测CMV感染对内皮细胞趋化因子表达的影响。结果：动脉粥样硬化组血清中CMV的阳性率显著高于非动脉粥样硬化组(分别为82．2％和61．0％，P=0．02)；而且动脉粥样硬化斑块中HCMV基因出现率显著高于正常血管组织(13／15和2／7，P=0．01)；CMV感染还可上调内皮细胞：ECV-304表达MCP-1。结论：CMV感染参与动脉粥样硬化的形成和发生，这可能与CMV上调内皮细胞趋化因子表达有关。     

HIV-1协同受体CXCR4、CCR5及相关趋化因子SDF-1在胎盘的表达

目的：研究HIV-1协同受体CXCR4、CCR5及CXCR4的特异性配体SDF-1在人胎盘组织的表达，探索HIV-1子宫内垂直传播的分子机制。方法：半定量RT-PCR检测早、中、晚孕期胎盘及早孕滋养细胞CXCR4、CCR5 mRNA水平；免疫组化和免疫细胞化学检测早孕胎盘及原代培养滋养细胞CXCR4、CCR5蛋白表达；原位杂交及免疫组化分析SDF-1在早孕胎盘的表达；ELISA测定滋养细胞SDF-1的动态分泌水平。结果：各孕期胎盘表达CXCR4及CCR5 mRNA；CXCR4蛋白定位于滋养细胞，而CCR5蛋白定位于绒毛基质中。滋养细胞可转录并翻译SDF-1，且能分泌可溶性SDF-1。结论：滋养细胞同时表达CXCR4及SDF-1，SDF-1可能通过降调CXCR4而拮抗X4-HIV-1感染胎儿细胞；R5-HIV-1或许能通过滋养层裂隙感染CCR5^#基质细胞和/或Hotbauer细胞，从而发生子宫内垂直传播。     

负载乳腺癌抗原单核细胞来源树突状细胞迁移能力的调控因素研究

目的：体外培养乳腺癌抗原负载的人单核细胞来源DC，应用不同刺激因子使其表面CCR7表达上调，在体外观察其迁移能力。方法：用rhGM-CSF和rhIL-4诱导MoDCs，并负载乳腺癌抗原后，分别与PGE2、LTC4或Bryo-1共培养，检测其表型及其功能变化。结果：PGE2、LTC4和Bryo-1在体外不影响MoDCs刺激淋巴细胞增殖能力和自体特异性淋巴细胞杀伤活性。与对照组MoDCs相比，PGE2和LTC4作用MoDCs后CD86表达增高，可以上调CCR7 mRBA和蛋白表达（P〈0．05）。PGE2可以使MoDCs对其配体CCL19和CCL21反应性增强（P〈0．05），而LTC4仅能使MoDCs对CCL19反应性增强。Bryo-1虽然可以促进MoDCs成熟，使其CCR7 mRNA表达增强，但在CCR7蛋白表达、迁移能力方面与对照组相似。结论：以PGE2和LTC4作用MoDCs后可以通过上调其CCR7表达，促进其迁移趋化能力。     

CCL25和CCL28及其相应受体CCR9和CCR10

CCL25和CCL28是CC趋化因子家族成员,主要表达于胸腺树突状细胞和黏膜上皮细胞,CCL25和CCL28相应的受体分别是CCR9和CCR10,表达于T淋巴细胞和B淋巴细胞。CCL25和CCL28及其相应受体对循环IgA浆母细胞和T淋巴细胞的归巢起重要作用,而且CCL28还具有广谱的抗微生物活性。