参苓白术散抗小鼠炎症性肠病的机制研究

目的:探讨参苓白术散对小鼠炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)的保护作用及其机制.方法:5％葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulphate,DSS)自由饮水7d诱导BLALB/c小鼠急性炎症性肠病,同时予以生理盐水、5-氨基水杨酸、参苓白术散高、中、低剂量(12,6,3 g·kg-1)ig,15d后观察小鼠体重、粪便性状、隐血便血,计算疾病活动度(DAI)积分,病理检测肠黏膜病变、测量肠道组织中活性氧簇( ROS),髓过氧化物酶(MPO),丙二醛(MDA)含量,检测肠道组织中TNF-α,IL-1β,IL-6蛋白水平表达变化.结果:模型组肠黏膜病理改变明显,与正常对照组相比,肠组织中ROS( 142.8±9.6) RFU ×104,MPO(15.4±2.4) pg·mg-1,MDA(11.6士1.2)pg· mg -含量显著增加(P＜0.01);同时TNF-α,IL-1β,IL-6蛋白水平表达明显升高;不同剂量的参苓白术散降低DAI积分的同时改善IBD病变,显著降低肠组织中ROS,MPO,MDA含量并下调TNF-α,IL-1β,IL-6的蛋白表达水平.结论:参苓白术散通过抑制氧化应激及随后触发的炎症反应而起到抗IBD的作用.     

补阳还五汤抗动脉粥样硬化8个效应成分UPLC-MS/MS测定方法研究

目的:建立补阳还五汤抗动脉粥样硬化8个效应成分(羟基红花黄色素A、芍药内酯苷、芍药苷、苦杏仁苷、黄芪甲苷、正丁烯基苯酞、Z-蒿本内酯和阿魏酸)的UPLC-MS/MS含量测定分析方法。方法:基于Citespace软件进行文献分析,明确补阳还五汤中8个抗动脉粥样硬化效应成分。采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,柱温40℃,以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,进样量0.3 mL·min^-1,电喷雾离子化(ESI)源,正离子模式扫描,多反应监测模式(MRM)检测各有效成分。结果:羟基红花黄色素A的质量浓度在10.00~1350.00 ng·m L^-1的范围内线性关系良好(r=0.9999),芍药内酯苷、芍药苷和苦杏仁苷的质量浓度均在2.00~2700.00 ng·m L^-1的范围内线性关系良好(r=0.9999),黄芪甲苷、正丁烯基苯酞和Z-蒿本内酯的质量浓度均在2.00~270.00 ng·mL^-1的范围内线性关系良好(r=0.9999),阿魏酸的质量浓度在5.00~675.00 ng·mL^-1的范围内线性关系良好(r=0.9998);平均回收率分别为94.6%、100.5%、96.3%、91.8%、108.2%、104.1%、99.8%、105.2%,RSD分别为8.5%、9.0%、5.2%、3.7%、3.9%、5.0%、7.1%、6.2%。补阳还五汤样品中上述抗动脉粥样硬化8个效应成分含量的RSD均<5%。结论:该方法重复性、回收率好,可为抗动脉粥样硬化复方补阳还五汤质量控制提供分析方法。     

卡托普利对蛋氨酸所致血管内皮功能损伤的保护作用与对氧磷酶1的关系

目的探讨卡托普利对高蛋氨酸饮食所致大鼠血管内皮功能损伤的保护作用及其机制。方法将蛋氨酸通过灌胃的方法,1次.d-1,连续4周,诱导大鼠血管功能损伤,治疗组同时给予卡托普利、依那普利、N-乙酰半胱氨酸灌胃。4周后处死动物,检测血清一氧化氮(nitric oxide,NO)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、对氧磷酶(paraoxonase 1,PON1)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase enzyme,SOD)、血管紧张素转换酶(an-giotensin-converting enzyme,ACE)活性。取胸主动脉检测由乙酰胆碱(acetylcysteine,Ach)诱导的血管内皮依赖性舒张反应。结果高蛋氨酸损伤组大鼠血管内皮依赖性舒张反应显著减弱,血清中MDA浓度升高,PON1活性、血浆NO浓度与SOD活性降低;卡托普利、N-乙酰半胱氨酸和依那普利能显著改善血管内皮依赖性舒张反应、降低MDA浓度、提高血清中的PON1活性、SOD活性和NO浓度。结论卡托普利能够改善高蛋氨酸引起的血管内皮功能的损伤,该作用可能与保护PON1活性及其抗氧化作用、促进内皮细胞释放NO有关。     

同型半胱氨酸硫内酯损伤血管内皮细胞的机制研究

目的: 在体外培养的内皮细胞中探讨同型半胱氨酸硫内酯(HTL)致血管内皮细胞损伤作用及其机制。方法: 体外培养的人脐静脉内皮细胞,与不同浓度的HTL孵育,用ELISA检测内皮细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和可溶性细胞间黏附分子(sICAM)-1的浓度,荧光显微镜检测活性氧簇(ROS)的含量、核转录因子κB(NF-κB)的激活及IκBα蛋白表达,同时检测内皮细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)漏出量与一氧化氮(NO)水平。结果: HTL(1 mmol/L)孵育内皮细胞3 h后显著增加细胞 ROS含量,刺激NF-κB转入胞核而活化,孵育细胞24 h后明显升高细胞上清液中sICAM-1和TNF-α浓度;降低细胞活力和NO的水平,增加LDH的漏出量。抗氧化剂NAC、NADPH氧化酶抑制剂Apocynin和NF-κB抑制剂PDTC可显著抑制HTL所致ROS含量的增加以及NF-κB激活,降低HTL刺激的培养液中sICAM-1和TNF-α的浓度,增加培养液中NO水平。结论: HTL诱导的血管内皮细胞功能损伤的机制可能与诱导氧化应激以及NF-κB活化有关。     

卡托普利对同型半胱氨酸硫内酯损伤血管内皮功能的保护作用

目的探讨卡托普利对同型半胱氨酸硫内酯所致在体大鼠血管内皮功能损伤的保护作用及其机制。方法采用同型半胱氨酸硫内酯(50mg/kg)灌胃8周的方法造成大鼠的血管内皮损伤模型,治疗组同时给予卡托普利(10、20、40mg/kg)进行灌胃。检测血管内皮依赖性舒张反应、血中对氧磷酶1、血管紧张素转化酶活性,血管组织内皮细胞核因子κB活性;肝组织中对氧磷酶1mRNA表达水平。结果同型半胱氨酸硫内酯显著抑制大鼠胸主动脉的内皮依赖性舒张反应,导致大鼠血清对氧磷酶1活性的降低,肝组织对氧磷酶1mRNA表达下调;同型半胱氨酸硫内酯同时激活血管内皮细胞核因子κB活性;卡托普利呈剂量依赖性地改善同型半胱氨酸硫内酯损伤的大鼠胸主动脉的内皮依赖性舒张反应,抑制血管内皮细胞核因子κB活性;同时降低血清中血管紧张素转化酶活性、维持对氧磷酶1活性、促进对氧磷酶1mRNA的表达。结论卡托普利对同型半胱氨酸硫内酯所致大鼠血管内皮功能损伤具有保护作用。     

葛根抑制高糖诱导巨噬细胞损伤与调控内质网应激信号通路的关系探讨

目的 观察葛根含药血清对高糖诱导的重度内质网应激（ERS）模型中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、内质网应激信号通路蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、活化转录因子4（ATF4）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、真核翻译起始因子2α（eIF2α）的作用,观察葛根对高糖诱导巨噬细胞炎症损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用血清药理学方法,制备空白血清和葛根含药血清,体外培养RAW264.7巨噬细胞,采过62.5 mmol·L^-1葡萄糖诱导巨噬细胞建立体外重度ERS模型,使用不同体积分数的葛根含药血清及内质网应激抑制剂（4-PBA）干预细胞。通过细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测不同葡萄糖浓度（22.5、23.5、25.0、27.5、32.5、47.5、72.5、122.5 mmol·L^-1）及不同体积分数葛根含药血清（0%、2.5%、5%、7.5%、10%、15%、20%）对RAW264.7巨噬细胞存活率的影响;在CCK-8法检测葡萄糖浓度对巨噬细胞存活率影响结果基础上采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测不同葡萄糖浓度浓度（22.5、32.5、42.5、52.5、62.5、72.5 mmol·L^-1）及不同时间段下（6、12、24、36、48 h） ERS的标志性蛋白GRP78的表达量,筛选出建立重度ERS模型最适造模浓度和时间,基于上述实验结果将细胞分为分别将细胞分为空白组、62.5 mmol·L^-1葡萄糖模型组、2 mmol·L^-1 4-PBA组、高、中、低（15%、10%、5%）葛根含药血清组开展后续实验,通过酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测重度ERS模型中RAW264.7巨噬细胞上清液中TNF-α的表达,Western blot检测重度ERS模型中相关通路蛋白表达情况。结果 CCK-8法检测发现,在葡萄糖浓度为27.5 mmol·L^-1刺激下巨噬细胞存活率达到最高（P<0.01）、而在葡萄糖浓度22.5~27.5 mmol·L^-1刺激下,巨噬细胞存活率随浓度增加而呈上升趋势,葡萄糖浓度在25.0 mmol·L^-1时差异有统计学意义（P<0.01）,在葡萄糖浓度37.5~122.5 mmol·L^-1刺激下,则出现了下降趋势,葛根含药血清在1%~15%皆差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）,Western blot法检测不同葡萄糖浓度和不同时间段下的GRP78蛋白表达量发现,在24 h时,GRP78蛋白表达显著性最强（P<0.01）,葡萄糖浓度为62.5 mmol·L^-1时,GRP78蛋白表达量最强（P<0.01）;由此可知葡萄糖浓度为62.5 mmol·L^-1可作为诱导重度ERS模型的最适浓度。与空白组相比较,模型组中TNF-α、GRP78、ATF4蛋白表达水平,磷酸化（p）-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α明显升高（P<0.05,P<0.01）,而与模型组比较,各给药组的TNF-α、GRP78、ATF4蛋白表达水平,p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 在体外实验结果表明,葛根在一定程度上可缓解高糖诱导巨噬细胞所出现的炎症损伤及通过抑制ERS信号通路中GRP78、ATF4、PERK、eIF2α的表达,以此来恢复细胞稳态。     

补阳还五汤稳定ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化易损斑块的作用机制

目的:探究补阳还五汤(BYHWT)对高脂饮食的载脂蛋白E敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)易损斑块的影响及其相关的作用机制。方法:8周龄ApoE~(-/-)小鼠高脂饮食喂养12周复制AS易损斑块模型,以C57/BL-6J小鼠作为正常组给于正常饮食饮水。随机取4只小鼠中头臂动脉与主动脉弓制作病理切片,通过计算斑块面积及其易损指数判定模型复制成功。72只ApoE~(-/-)小鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、自噬诱导剂组及BYHWT低、中、高剂量组,BYHWT低、中、高剂量组分别给予5,10,20 g·kg~(-1)BYHWT灌胃8周,自噬诱导剂组给予雷帕霉素4 mg·kg~(-1)灌胃8周,正常组继续给于正常饮食饮水。8周后,小鼠处死,游离胸主动脉到腹主动脉末端,制备血管组织标本用于斑块的易损指数测定,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分析血管组织中自噬体形成。结果:ApoE~(-/-)小鼠成功诱导AS易损斑块模型,模型组AS斑块形成明显,斑块易损指数显著大于正常组(P0.01);补阳还五汤各剂量组明显缩小斑块面积,易损指数与模型组比较有不同程度的降低(P0.05)。模型组斑块血管组织中基质金属蛋白酶(MMP)-1,2,3mRNA水平明显高于正常组;与模型组比较,补阳还五汤、雷帕霉素组的MMP-1,2,3 mRNA的水平明显降低(P0.05,P0.01);与正常组比较,模型组的微管轻链蛋白3(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)含量显著降低,高、中、低剂量的补阳还五汤及其雷帕霉素组可以明显升高LC3-Ⅱ/LC-Ⅰ含量(P0.05)。结论:补阳还五汤具有缩小AS斑块面积、降低血管中的基质金属蛋白酶的表达,调节斑块内巨噬细胞自噬从而降低斑块的易损指数,提高AS斑块的稳定性的作用。     

参苓白术散通过调节ROCK/MLCK信号通路作用于IBD的机制研究

摘要 ：目的 探讨参苓白术散抗脂多糖（LPS）诱导的炎症性肠病（IBD）损伤的作用和机制。方法：建立肠隐窝上皮细胞（IEC-6）与小鼠T淋巴细胞瘤细胞(Cyc-Tag)共培养体系；按空白组（10%空白血清），模型组（10%空白血清 LPS），参苓白术散低中高剂量组（4%含药血清 LPS、8%含药血清 LPS、16%含药血清 LPS），10?S LPS对照组，Rho激酶（ROCK）阻断剂Y27632 LPS组，肌球蛋白亲链激酶（MLCK）阻断剂ML-7组。采用蛋白质印迹法分别检测共培养体系下和Cyc-Tag单独培养下ROCK、MLCK，磷酸化ROCKⅡ及磷酸化MLC蛋白的表达情况。检测共培养体系下IEC-6电阻值变化。结果 共培养体系下：与空白组进行比较，模型组ROCK、MLCK，磷酸化ROCKⅡ及磷酸化MLC蛋白水平均上调(P<0.01)；与模型组比较，参苓白术散低中高剂量组与抑制剂组ROCK、MLCK，磷酸化ROCKⅡ及磷酸化MLC蛋白表达明显降低（P<0.01，P<0.05）。Cyc-Tag单独培养下：也将模型组与空白组进行比较，ROCK、MLCK，磷酸化ROCKⅡ及磷酸化MLC蛋白水平均上调（P<0.01），而参苓白术散低中高剂量组与抑制剂组对其均有明显的下调（P<0.01，P<0.05）。共培养体系下IEC-6电阻值变化：与空白组比较，模型组IEC-6细胞跨膜电阻的TEER值显著下降；与LPS模型组比较，参苓白术散含药血清低、中、高剂量组IEC-6细胞跨膜电阻的TEER值显著升高，ROCK阻断剂Y27632 LPS组、MLCK 阻断剂Ml-7 LPS组也显著升高IEC-6细胞跨膜电阻TEER值。结论 参苓白术散含药血清对LPS诱导的IEC-6细胞损伤具有明显地抑制作用，与调节ROCK/MLCK信号通路及改善IEC-6细胞通透性有关。     

基于肠道菌群和炎症因子探讨牛至油对溃疡性结肠炎小鼠的作用

目的 研究牛至油对葡聚硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠的改善作用，并探讨其可能的作用机制。方法 将小鼠随机分为正常组，模型组，阳性药组(美沙拉嗪),牛至油高、中、低剂量组，大豆油组(溶剂组),每组15只，造模同时灌胃给药，连续7 d。第8天，处死小鼠并收集结肠、血清及粪便，HE染色观察结肠组织病理变化，ELISA法检测血清炎症因子水平，16S rRNA高通量测序法检测粪便中肠道菌群变化。结果 与正常组比较，模型组小鼠疾病活动指数(DAI)评分和结肠组织病理评分升高(P<0.01),血清促炎因子IL-1β、TNF-α水平升高，抑炎因子IL-10水平降低；与模型组比较，各给药组上述指标均有改善(P<0.05,P<0.01),其中牛至油高剂量组效果最佳。肠道菌群分析表明，与正常组比较，模型组小鼠肠道中乳酸菌属(Lactobacillus)等丰度有所降低，而厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、放线杆菌门(Actinobacteriota)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠球菌属(Enterococcus)等丰度均有所...     

基于肠道菌群分析探讨葛根减轻T2DM db/db小鼠胰岛素抵抗的作用及机制

基于肠道菌群分析探讨葛根对2型糖尿病(type 2 diabetes, T2DM)db/db小鼠胰岛素抵抗的作用及可能机制。将50只db/db小鼠随机分为模型组、二甲双胍组以及葛根高、中、低剂量组，另取10只db/m小鼠为正常组。持续给药8周，测量小鼠体质量和血糖；酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测糖化血清蛋白(glycosylated serum protein, GSP)、血清空腹胰岛素(fasting serum lisulin, FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色观察胰腺组织病理学变化；免疫组化检测胰腺肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表达；16S rRNA技术检测正常组、模型组和葛根中剂量组小鼠粪便肠道菌群结构变化；蛋白免疫印记法检测回肠组织中法尼醇X受体(farnesoid X receptor, FXR)、G蛋白胆汁酸偶联受体5(takeda G protein-coupled receptor 5,TGR5),肝组织中胆固醇7α...