不同年龄段大鼠脂肪间充质干细胞增殖及成骨能力的研究

通过研究年龄对大鼠脂肪间充质干细胞增殖、成骨分化的影响,从而为临床寻找理想的种子细胞来源。用密度梯度离心法分离不同年龄段脂肪间充质干细胞进行培养,并保留贴壁细胞传代,观察细胞生长情况,检测其增殖活性,诱导后茜素红染色,钙离子浓度测定。结果显示,传代细胞的增殖速度比原代细胞快,但随着年龄的增长脂肪间充质干细胞的增殖能力下降。诱导条件下,各年龄组均出现矿化结节,但钙离子浓度随年龄增加而降低。本实验提示,脂肪间充质干细胞增殖和成骨分化能力随着年龄的增加而降低,但各年龄段脂肪间充质干细胞经过体外增殖、诱导后均可满足临床应用中不同患者的要求。     

桥本甲状腺炎与黏膜相关淋巴组织的病理学特征

目的阐明桥本甲状腺炎（hashimoto thyroiditis,HT）的组织形态学及免疫组织化学特征,分析轻链限制在鉴别HT与黏膜相关淋巴组织（mucosa associated lymphoid tissue,MALT）淋巴瘤中的意义。方法 30例HT的石蜡标本和2例MALT淋巴瘤,分别用HE染色行组织病理学检查以及免疫组织化学检测CD20、CD3、lgκ、lgλ和细胞角蛋白,评价淋巴细胞的浸润及淋巴上皮病变（lymphoepithelial lesion,LEL）,轻链限制用于鉴别甲状腺早期淋巴瘤和HT。2例甲状腺原发性淋巴瘤作为对照。结果所有HT标本均显示HT特征性的组织病理特点。免疫组织化学染色显示了形态不显著的LEL,其中B细胞少见,而T细胞大量增生。轻链限制检测显示浆细胞多克隆性增生。2例MALT淋巴瘤显示破坏性淋巴上皮病变、B细胞免疫表型,其中浆细胞样细胞群中显示lgκ轻链限制。结论 HT与淋巴瘤的组织病理学及免疫组织化学特征显著不同,免疫组织化学有助于鉴别。     

胚胎小鼠大脑c-jun N-末端激酶表达的定量分析

目的:探讨c-jun N-末端激酶(JNK)在胚胎小鼠脑发育中的作用。方法:按受孕时间将昆明小鼠随机分为6组,分别为胚龄10(E10)、12(E12)、14(E14)、16(E16)、18d(E18)组、新生组(P0),采用免疫印迹技术和光密度分析法对各组小鼠脑JNK进行定量检测,以测得的JNK最大量为1(100%),计算蛋白相对含量。结果:免疫印迹法测得E10、E12、E14、E16、E18及P0组JNK1含量分别为24.57%、46.62%、62.99%、82.06%、100%、89.65%,JNK2/3含量分别为58.89%、51.37%、28.67%、20.33%、6.54%、5.03%。结论:JNK在胚胎发育期间呈明显的变化规律,提示JNK可能在小鼠大脑的发生与发育中起重要作用。     

人参皂苷Rg1对抗脑缺血-再灌注大鼠脑组织p—JNK蛋白表达的定量分析

目的：探讨人参皂苷Rg1对脑缺血-再灌注大鼠脑组织p-JNK表达的影响。方法：取健康雄性SD大鼠30只，将其随机分为假手术组，模型组，人参皂苷Rg1 10、20、40mg／kg组，阳性药物对照组，每组5只。采用线栓法制作大脑中动脉栓塞模型。于MCAO术后6h，采用免疫印迹法对CA1区的州NK蛋白表达情况进行定量检测。结果：模型组p-JNK含量最高；假手术组含量最低；Rg1 20、40mg／kg组和阳性药物对照组p-JNK蛋白含量显著降低，与模型组比较有显著性差异（P〈0．05），其中Rg1 40mg／kg组p-JNK蛋白含量最低。结论：人参皂苷Rg1防治大鼠脑缺血-再灌注损伤的机制可能与抑制脑组织p-JNK表达有关，且以高剂量效果较好。     

急、慢性染铅对cAMP反应元件结合蛋白的影响

目的探讨急、慢性染铅对大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的影响。方法急性染铅实验:取正常30d大鼠海马脑片培养,分别用含20μmol·L-1醋酸铅及不含醋酸铅的人工脑脊液(ACSF)孵育,作为急性染铅标本。慢性染铅实验:孕鼠在体染铅,取新生大鼠海马作为慢性染铅标本。用蛋白质免疫印迹法测定标本CREB的活性(即磷酸化CREB)和总量CREB的含量。结果急性染铅实验:海马脑片培养中,染铅组CREB的活性随时间延长而下降,染铅组和对照组总量CREB含量均无显著性变化。慢性染铅实验:总量CREB的含量无显著性变化。结论急性染铅引起CREB的活性下降,对总量CREB含量没有显著影响。慢性染铅总量CREB含量无显著性变化。     

Grp78基因转染肝细胞癌SMMC-7721克隆筛选及鉴定

目的 用Grp78基因转染人肝细胞癌SMMC-7721,筛选阳性克隆并鉴定.方法 利用真核表达载体pcDNA3.1+Grp78转染SMMC-7721,pcDNA3.1+Grp78与转染试剂的比例(μg/μL)分别为2:3、2:4、2:5、2:6、2:7、2:8、2:9,400 μg/mL G418筛选阳性克隆后,传代扩增,Western Blot鉴定克隆的Grp78表达情况.应用pcDNA3.1空载体作为阴性对照.结果 Western Blot显示,转染后的SMMC-7721经G418筛选,除一个克隆不高表达外,其余克隆均高表达Grp78.结论 Crp78转染SMMC-7721的最佳转染效率是8:2(转染试剂/DNA),由于假阳性克隆的存在,筛选后的克隆需要鉴定.     

对一种源于蜗牛的壳聚糖水解酶的不同纯化方法的选择

目的研究源于蜗牛的壳聚糖水解酶的纯化方法，得到壳聚糖水解酶的纯品，从而为氨基酸序列分析、基因克隆及工业菌制备奠定前期基础。方法对比疏水作用层析、离子交换层析、羟基磷灰石柱（HA）层析、凝胶过滤层析等方法纯化蜗牛酶的实际效果，确定纯化的最佳条件，从而设计出最合理的纯化方案。结果分别用苯基琼脂糖柱层析，DEAE—Sepharose离子交换层析，羟基磷灰石柱层析，Sephacryl S-300凝胶过滤层析分离蜗牛酶，最终确定为用弱阴离子交换填料DEAD—Sepharose，疏水作用层析，凝胶过滤层析进行分离。结论本文探讨了蜗牛酶的不同纯化方法，建立了一种从蜗牛酶中分离高效高纯度壳聚糖水解酶的方法，为壳寡糖的酶解工业生产提供了新方法。     

壳聚糖的降解及其研究进展

壳聚糖对机体的免疫增强作用及抗肿瘤活性越来越引起人们的重视。高脱乙酰度、高分子量的壳聚糖粉剂已推向保健市场。甲壳素脱乙酰后得到的壳聚糖分子量通常在几十万上百万，虽然能溶于包括醋酸、稀盐酸、乳酸等多种稀酸溶液中，但不能溶于水，在开发应用上存在一定不利条件。     

吡格列酮对淀粉样β蛋白片段1-42引起的大鼠海马有丝分裂原激活蛋白激酶p38信号传导通路变化的影响

目的探讨吡格列酮(Pio)对淀粉样β蛋白片段1-42(Aβ1-42)所致大鼠海马损伤的保护作用及其作用机制。方法大鼠随机分为正常对照组,Aβ1-42损伤组,Aβ1-42+Pio20,40及80mg·kg-1组。d1与d2,Pio处理组大鼠灌胃给予Pio,正常对照组和Aβ1-42损伤组灌胃给予0.2%二甲亚砜。d2给药处理后,Aβ1-42损伤组及Pio处理组大鼠左侧脑室内单次注射Aβ1-425μL(2.0mmo·lL-1)制备大鼠痴呆模型,正常对照组注射等量生理盐水。继续给药6d,处死大鼠,取海马CA1区,Western蛋白印迹法观察磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶激酶3/6(MKK3/6)、磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶P38(p38MAPK)、磷酸化活化转录因子2(ATF-2),磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MAPKAPK-2)和磷酸化热休克蛋白27(HSP27)的蛋白表达水平的改变。结果脑室内注射Aβ1-42可引起海马CA1区磷酸化的MKK3/6、磷酸化的p38MAPK和磷酸化的ATF-2表达明显增加,而磷酸化的MAPKAPK-2和磷酸化的HSP27表达明显降低。Pio可明显抑制Aβ1-42引起的磷酸化的MKK3/6、磷酸化的p38MAPK和磷酸化的ATF-2表达的增加;逆转Aβ1-42引起的磷酸化的MAPKAPK-2和磷酸化的HSP27表达降低的变化。结论Pio对Aβ1-42引起的海马神经损伤的保护作用可能与其抑制Aβ1-42引起的磷酸化p38MAPK信号传导通路的改变有关。     

胚胎小鼠肾脏发育中神经型一氧化氮合酶的定量分析

目的:探讨神经型一氧化氮合酶在胚胎小鼠妊娠不同时期肾脏发育中的意义。方法:选用成年健康昆明小白鼠,按雌雄比例3:1同窝饲养,采用检查阴道栓脱落的方法确定雌鼠受孕时间。选取胚龄12天(ED12)、14天(ED14)、16天(ED16)、18天(ED18)的胎鼠及出生时(PD0)仔鼠,分5组,每组各6只母鼠,每只母鼠取2只胎鼠或仔鼠,剖腹取肾脏,用免疫印迹技术(Westernblot)及光密度分析系统分别对各组胎鼠或仔鼠肾脏内nNOS进行定量检测。结果:Western blot及光密度分析显示,ED14组肾脏nNOS含量最少,随后逐渐增多,PD0组肾脏nNOS含量最多。结论:胚胎小鼠肾脏nNOS在胚胎第14天开始呈阳性表达,以后含量逐渐升高,出生时含量最高,表明nNOS在胚胎小鼠肾脏发育的早期阶段起重要作用。