地塞米松诱导的危重病性肌病大鼠的TGF-β／Smad表达

目的 探讨地塞米松诱导的危重病性肌病（CIM）大鼠的TGF-β1、Smad3表达。方法将40只大鼠随机分为正常对照组10只、观察组30只；观察组又分为7、9、11d三个亚组各10只。观察组用地塞米松腹腔注射，对照组用等量生理盐水腹腔注射，均每日1次。按照Lennon分级法对大鼠进行肌功能缺损评分；处死大鼠后，用免疫组化法检测其比目鱼肌中的TGF-β、Smad3表达。结果对照组全部存活，无肌功能缺损症状；观察组死亡8只，其中观察7d组出现肌功能缺损症状7只，观察9d、11d组均出现明显肌功能缺损症状，以观察11d组最严再；与对照组比较，观察组TGF—β1，Smad3阳性表达明显升高（P均〈0．05），以观察11d组最明显（P〈0．05）。结论地塞米松诱导的大鼠CIM随病程延长，其TGF-β1、Smad3表达升高，以11d最明显。     

大鼠心肌细胞内游离钙的Fura-2荧光测定

Fura-2的化学名为2-[6-双乙酸基-5-（2-双乙酸氨基）-5-甲苯氧乙氧基]-2-苯骈呋喃基-5-恶唑羧酸五钾盐。属于第二代荧光指示剂，是测定细胞内游离钙的重要试剂。用Ca^2＋荧光指示剂Fura-2检测活细胞胞浆中[Ca^2＋]i是十几年来兴起的一门技术，已广泛应用于细胞生理、病理的研究，已有文献报道应用于测定细胞、组织块等内的游离钙。     

小檗碱对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化及TGF-β/Smad通路的影响

目的研究小檗碱(BBr)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化(EMT)及TGF-β/Smad通路的影响。方法常规培养肾小管上皮细胞、传代、分组:1正常对照组;2TGF-β1组(10ng/ml TGF-β1作用48h);3小檗碱作用组(30μM小檗碱作用24h后加10ng/ml TGF-β1作用48h)。采用相差显微镜观察各组细胞表型改变,免疫荧光及Western Blot方法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Smad2、Smad3、磷酸化的Smad2、3(P-Smad2、3)蛋白表达;应用流式细胞术,采用活性氧自由基(ROS)检测试剂盒检测各组别的ROS蛋白表达情况。结果 TGF-β1处理可导致NRK-52E细胞的α-SMA蛋白表达明显升高,E-cadherin蛋白表达降低。而小檗碱处理能够减少肾小管上皮细胞α-SMA的高表达,提高E-cadherin蛋白的表达;同时,小檗碱可有效降低由TGF-β1引起的NRK-52E细胞中ROS的过多产生。此外,小檗碱可有效抑制Smad2/3的活化。结论小檗碱可逆转TGF-β1所致的肾小管上皮细胞的EMT,其作用机制可能是通过抑制氧化应激及TGF-β/Smad信号通路而发挥作用。     

人参皂苷Rgl对抗脑缺血-再灌注大鼠脑组织FAS、FAS—L蛋白表达的定量分析

目的：探讨人参皂苷Rgl对脑缺血-再灌注大鼠脑组织FAS、FAS-L表达的影响。方法：取健康雄性SD大鼠30只。将其随机分为假手术组,模型组,人参皂苷Rgl10、20、40mg／kg组,阳性药物对照组,每组5只。采用线栓法制作大脑中动脉栓塞模型。于MCAO术后6小时,采用免疫印迹法对CA1区的FAS、FAS-L蛋白表达情况进行定量检测。结果：模型组大鼠大脑右侧海马CA1区FAS、FASL含量最高;假手术组FAS、FAS-L含量最低;Rgl20、40mg／kg组的FAS、FAS-L蛋白含量显著降低,与模型组比较有显著性差异（P〈O．05）,其中Rgl40mg／kg组FAS、FAS-L蛋白含量最低。结论：人参皂苷Rgl防治大鼠脑缺血-再灌注损伤的机制可能与抑制脑组织FAS、FAS-L表达有关,且以高剂量效果较好。     

BRCA-1在三阴性乳腺癌中的表达及意义

目的:检测BRCA-1在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的表达情况,分析其与TNBC临床病理特征之间的关系。方法:采用免疫组化方法检测三阴性乳腺癌患者术后癌旁正常组织、恶性组织、乳腺良性病变组织中BRCA-1蛋白的表达情况。结果:在TNBC中BRCA-1的阳性表达率为76.4%,均高于癌旁正常组织及乳腺良性病变中的表达,差异有统计学意义,且BRCA-1的表达与淋巴结转移情况、临床分期有关(P<0.01)。结论:三阴性乳腺癌中BRCA-1蛋白表达上调,参与TNBC发生、发展过程,可能成为评估TNBC预后的潜在敏感指标。     

特异性下调葡萄糖调节蛋白78降低人涎腺腺样囊性癌侵袭和转移的能力

目的 探讨特异性下调葡萄糖调节蛋白78（GRP78）对涎腺腺样囊性癌（ACC）侵袭和转移能力的影响; 方法 应用siRNA干扰技术,特异性下调ACC-2细胞内GRP78的表达,通过划痕实验、Transwell实验、四甲基偶氮唑盐（MTT）实验和细胞骨架染色,观察下调GRP78表达后细胞的变化,并应用免疫印迹法检测下调GRP78表达对基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP）-1和TIMP-2的影响。 结果 划痕实验显示,下调GRP78的表达能够抑制划痕愈合;Transwell实验发现,下调GRP78在ACC-2的表达明显降低穿过的细胞数;下调GRP78表达后细胞骨架染色发现,骨架纤维明显增粗;MTT实验显示,下调GRP78后细胞的增殖能力降低1/3;免疫印迹法检测结果发现,下调GRP78表达后ACC-2细胞的MMP-2、MMP-9的表达降低,TIMP-1、TIMP-2的表达增高。 结论 特异性下调GRP78的表达能够降低ACC的侵袭和转移能力,这与GRP78参与调节MMP和TIMP的表达有关。     

大鼠缺血性急性肾损伤对肝细胞形态学的影响

目的 观察大鼠缺血性急性肾损伤对其肝细胞形态学的影响. 方法 健康SD大鼠30只被分为假手术组( sham)、缺血性急性肾损伤组(IAKI)和双肾切除组(BNx),每组10只.成功制造IAKI模型后24 h经颈总动脉取血进行肾功能和肝功能检测;采用光学显微镜、电子显微镜技术观察缺血性急性肾损伤大鼠的肝脏形态学变化;分别采用免疫组织化学和免疫印迹方法检测IAKI大鼠肝脏多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1( PARP-1)和Caspase-3蛋白的表达情况. 结果 缺血性急性肾损伤的动物发生了急性肝损伤,肝功能受损.肝脏出现了大小不等坏死病灶.肝细胞损伤的形态学分类包括苍白样坏死、空泡样坏死,固缩性死亡以及细胞凋亡,其中细胞坏死多见.免疫印迹和免疫组织化学染色结果显示,IAKI诱导的肝细胞受损过程中PARP-1和Caspase-3被激活.结论 缺血性急性肾损伤可引起肝细胞坏死和凋亡,但以细胞坏死为主.PARP-1介导细胞死亡、Caspase依赖细胞死亡均参与了IAKI诱导的肝细胞损伤.     

贝那普利对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及左心室重构的影响

目的探讨贝那普利对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及左心室重构的作用及其机制。方法 SD大鼠ip给予链脲佐菌素制备糖尿病模型。实验分为正常对照组、糖尿病模型组和贝那普利治疗组。贝那普利治疗组大鼠ig给予贝那普利10mg.kg-1,每天1次,连续12周。测定心脏质量指数、左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)、左心室压(LVP)、左心室舒张末压(LVEDP)、血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平;取左心室心肌,用TUNEL方法检测心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Fas配体(FasL)mRNA及蛋白表达。结果与正常对照组相比,糖尿病模型组大鼠血浆AngⅡ水平明显增高,从440±20增高到(863±38)ng.L-1(P<0.05);LVP从19.3±0.5明显降低到(14.7±1.2)kPa(P<0.05);+dp/dtmax从1020±55降低到(778±80)kPa.s-1(P<0.05);-dp/dtmax从705±44降低到(420±62)kPa.s-1(P<0.01);LVEDP从0.13±0.06升高到(0.50±0.09)kPa(P<0.05);心脏质量指数明显升高,从2.93±0.10升高到(4.13±0.18)mg.g-1(P<0.01);心肌细胞凋亡数目增多,凋亡率从(0.5±0.3)%明显增加到(23.1±1.6)%(P<0.01),FasL基因和蛋白表达显著增强(P<0.01)。与模型组相比,贝那普利组大鼠连续12周ig给予贝那普利后,AngⅡ水平从863±38明显降低到(619±24)ng.L-1(P<0.05);LVP从14.7±1.2明显升高到(17.6±0.8)kPa(P<0.05);+dp/dtmax从778±80明显升高到(913±58)kPa.s-1(P<0.05),-dp/dtmax从420±62明显升高到(574±54)kPa.s-1(P<0.05),LVEDP从0.50±0.09明显降低到(0.28±0.47)kPa(P<0.05),心脏质量指数从4.13±0.18明显降低到(3.42±0.13)mg.g-1(P<0.05);心肌细胞凋亡数目减少,从(23.1±1.6)%降低到(17.1±1.0)%(P<0.05);FasL基因和蛋白表达均明显下调(P<0.05)。结论贝那普利的干预可以抑制糖尿病心肌细胞凋亡,改善心室重构,保护心脏功能。其机制可能与下调凋亡相关基因FasL表达有关。     

肝细胞生长因子对肝细胞癌细胞系SMMC-7721黏着斑激酶的影响

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对黏着斑激酶(FAK)、Src表达及活性的影响以及PI3K在该过程中的作用.方法:LY294002预处理阻断PI3K的活性、HGF处理SMMC-7721后检测FAK和Src的表达、磷酸化及在细胞内的分布. 应用免疫印迹技术检测FAK、Src的表达及磷酸化, 免疫荧光技术检测FAK在SMMC-7721细胞中的分布.结果:HGF(50 μg/L)可以促进FAK Y397位点的磷酸化, 对FAK的表达没有影响. 应用PI3K抑制物LY294002处理后, FAK Y397的磷酸化水平显著降低. HGF处理后, FAK主要位于细胞边缘, 呈簇状分布, 应用PI3K抑制物, FAK在细胞内弥散分布. HGF处理后, Src激酶和SrcY416的磷酸化水平明显增加, 而经LY294002处理后, Src激酶与Src Y416的磷酸化水平明显降低.结论:肝细胞癌中, HGF以PI3K依赖性的方式促进FAK和Src的活化.     

人参皂苷Rg1对脑缺血再灌注大鼠大脑细胞死亡方式的影响

目的　探讨人参皂苷Rg1（ginsenoside Rg1）对脑缺血再灌注大脑皮层细胞死亡方式的影响。 方法　健康SD大鼠随机分为假手术组（Sham 组）、缺血再灌注组（Model组）、人参皂苷 Rg1 10、20、40 mg/kg处理组、尼莫地平处理组（阳性对照组）,每组15只。各组于术前5 d至取材当日分别注射生理盐水（Sham、Model组）、人参皂苷Rg1（Rg1处理组）、尼莫地平（阳性对照组）。采用右侧大脑中动脉栓塞法制备脑缺血模型,动物清醒后进行神经功能评分和TTC染色验证模型是否成功;采用免疫组化法和免疫印迹法定性定量检测大脑皮层缺血再灌注24h后多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1（poly ADP-ribose 　polymerase-1,PARP-1）、半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的表达。 结果　免疫组化和免疫印迹结果显示,Sham组大脑皮层区可见PARP-1、及少量caspase-3阳性细胞;Model组可见大量PARP-1阳性细胞及caspase-3阳性细胞;人参皂苷Rg1处理组神经功能缺损评分及PARP-1、caspase-3的表达显著低于　Model组。 结论　人参皂苷Rg1预处理对大鼠脑缺血再灌注具有保护作用,其机制可能与下调脑组织　PARP-1、caspase-3的表达,对抗脑细胞凋亡和胀亡有关。