稳定性心绞痛伴胰岛素抵抗患者内皮祖细胞功能研究

近年研究认为冠状动脉(冠脉)病变的起因为内皮细胞损伤与修复机制失衡[1].内皮祖细胞(EPCs)来源于骨髓,可分化为成熟内皮细胞使内皮再生,形成新牛血管,参与内皮损伤的修复.2型糖尿病、代谢综合征及胰岛素抵抗(IR)者体内EPCs数量及功能均下降[2],提示IR是影响EPCs数量及功能的因素之一[3].本研究旨在观察IR与EPCs数量及功能的关系,探讨IR在冠心病发生机制中的作用.     

载Rapamycin多聚物涂层支架在猪冠状动脉模型预防再狭窄的实验研究

目的　评价载Rapamycin(RAP)新型可降解多聚物涂层支架在小型猪冠状动脉模型的可行性、安全性和预防再狭窄的疗效。方法　体外模拟测定从药物从膜释放的持续时间。支架多聚乳酸 /多聚羟基乙酸 (PLGA)涂层包埋RAP药物剂量为 4 0 0 μg(小剂量 )或 80 0 μg(大剂量 )。小型猪冠状动脉置入过大的裸支架、单PLGA涂层支架或含RAP涂层支架并形成冠状动脉损伤模型 ,术后第 5周重复定量冠状动脉造影术 (QCA)后处死动物 ,测定三组支架血管段的损伤积分、冠状动脉横断面积、管腔面积、内膜厚度和面积 ,并作比较。同时观察支架边缘段 5mm内血管组织。结果　药物从涂层膜释放时间达 30d。三组分别为裸支架组 (置入支架数n =5 ) ,单涂层组 (n =7)和RAP组 (n =8,其中小剂量为 3只 ,大剂量组为 5只 )。三组冠状动脉大小和血管损伤程度基本相同 ,裸支架组、单涂层组和RAP组的血管平均损伤积分分别为 1 84± 0 32 ,1 83± 0 35和 1 83± 0 2 6 (P =0 996 )。术后 5周 ,三组的管腔面积分别为 (6 7± 1 5 )mm2 ,(5 8± 4 0 )mm2 和 (9 7± 2 1)mm2 (P <0 0 5 ) ,RAP组最大。平均内膜厚度分别为 (0 5 1± 0 12 )mm ,(0 6 4± 0 46 )mm和 (0 2 0± 0 11)mm(P <0 0 5 ) ,RAP组最小。三组均未见支架边缘狭窄和     

银杏叶提取物GBE50及其主成分总黄酮对缺氧致人脐静脉内皮细胞凋亡及活性氧自由基生成的作用

目的观察银杏叶提取物GBE50及其主成分总黄酮对缺氧致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性氧自由基(ROS)生成及凋亡的保护作用。方法通过消化法获得HUVECs,传代后干预分为N组(正常对照)、H组(缺氧24 h)、HG组(缺氧前GBE50干预4 h)和HF组(缺氧前总黄酮干预4 h),其中GBE50和总黄酮各有12．5、25．0和50．0μg／mL 3个浓度。采用流式细胞仪测各组ROS水平及早期凋亡率(Annexin V),通过TUNEL测晚期凋亡率,探讨缺氧及GBE50和总黄酮对HUVECs凋亡及其ROS生成的影响。结果①H组ROS水平较N组明显升高(P<0．05),由(9．88±0．97)％升至(29．27±2．21)％;HG各浓度组与H组相比ROS水平均降低,但与N组及H组相比差异均无统计学意义(P值均>0．05);HF各浓度组与H组相比ROS水平均明显下降(P值均<0．05),其中HF组中总黄酮浓度为50．0μg／mL时ROS降到最低,为(7．42±1．81)％。②H组细胞Annexin V阳性率较N组明显增加(P<0．05),由(9．00±1．00)％升至(18．47±2．53)％:HG 25．0μg／mL时为(10．69±2．08)％,显著降低了HUVECs的Annexin V阳性率(P<0．05);HF各浓度组均能不同程度地降低Annexin V阳性率,但差异均无统计学意义(P值均>0．05),该保护效应在总黄酮浓度为50．0μg／mL时最明显,Annexin V阳性率为(14．25±2．22)％。③H组TUNEL阳性率较N组明显增加(P<0．05),由(1．28±0．65)％升至(8．59±1．10)％; HG 25．0μg／ml时降至(3．58±0．28)％,HF 50．0μg／ml为(3．06 0．40)％,较H组均明显下降(P值均<0．05)。结论缺氧可导致HUVECS ROS生成增加伴凋亡增多。而GBE50及总黄酮可降低缺氧所致的ROS生成增多及凋亡增加,对缺氧所致的内皮功能障碍有一定的保护作用。     

脉络“络气虚滞”动物模型的建立与评价

目的：探讨络脉“络气虚滞”动物模型的建立方法,为“络气虚滞”的临床研究和中药新药研究提供理想的动物模型。方法：选用8周龄SD大鼠,采用力竭性跑台运动,并结合基础饮食（5g·100g^-1体质量）建立气虚证候模型,同时采用200ng·min^-1·kg^-1血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）（背部埋埴AngⅡ药物缓释泵）损伤血管,建立大鼠脉络“络气虚滞”的病理证候复合模型,补气药物组对所建模型予以验证。实验分成正常组、运动组（基础饮食）、AngⅡ组、复合模型组和药物组5组,每组10只。用放射免疫法测定血液中内皮素（endothelin-1,ET）、去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）、AngⅡ、促肾上腺皮质激素（adreno-coticotropic hormone,ACTH）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）含量,扫描电镜观察主动脉内皮形态的变化。结果：运动组、AngⅡ组、复合模型组均出现内皮损伤,血液中ET、IL-6、TNF-α均有不同程度的升高,以复合模型组改变明显。符合模型组出现气虚症状,内皮细胞充血、水肿、脱落,内弹力板暴露,而ACTH、NE下调,药物组运动耐力明显改善,内皮损伤轻。结论：采用基础饮食、力竭运动及AngⅡ多因素建立络脉“络气虚滞”病理症候复合模型可行,基本符合中医气虚证候特点和现代医学血管损伤病理变化。     

辛伐他汀对apoE-/-小鼠心肌肥厚的抑制作用及其机制探讨

目的探讨辛伐他汀对高脂喂养的 apo E-/-小鼠心肌肥厚及氧化应激分子的影响。方法 5 周龄雄性 apo E-/-小鼠和 C57 小鼠,分为野生型组 (Wild)、apo E-/-小鼠组 (Apo E)及 apo E-/-小鼠+辛伐他汀组 (Apo E-S),予以高脂喂养。8 周龄开始分别给药,干预 3 周后测量舒张期左室前壁厚度 (LVAWd)、舒张期左室后壁厚度 (LVPWd)、心脏体重比 (HW/BW)、左室横截面面积 (LVCSA) 和心肌心房钠尿肽 (ANP) 蛋白表达等心肌肥厚参数及心肌 ROS 水平、p22phox 和 p47phox 蛋白表达等氧化应激指标。结果 Apo E 组 LVAWd 、LVPWd、HW/BW、LVCSA、ANP、ROS、p22phox 及 p47phox 水平均明显高于 Wild 组 (p<0.05),而 Apo E-S 组上述指标均显著低于 Apo E 组 (p<0.05)。结论辛伐他汀可能通过抗氧化应激作用改善高脂饮食条件下 apo E-/-小鼠心肌肥厚。     

银杏叶提取物主成分总黄酮对缺氧致内皮功能障碍的保护作用

目的:探讨缺氧对人脐静脉内皮细胞功能的影响及银杏叶提取物主成分总黄酮(flavonoids)在其中的作用。方法:应用流式细胞技术及TUNEL染色等方法探讨缺氧及总黄酮对内皮细胞功能的影响。结果:缺氧干预内皮细胞24h后,细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及早期凋亡(Annexin V)率、晚期凋亡(TUNEL)率均明显增加。缺氧前4h予总黄酮干预后发现,总黄酮50μg.ml-1时可显著降低细胞ROS水平及晚期凋亡率(P<0.05),部分降低因缺氧而升高的早期凋亡率(P>0.05)。结论:缺氧可导致血管内皮功能障碍,而总黄酮可部分或显著逆转缺氧所致的内皮功能障碍,总黄酮对缺氧所致的内皮功能障碍有一定的保护作用。     

兔自体颈动脉移植于静脉后形态学及分子改变

目的以往的研究已证实动脉移植到静脉后，即使在高血脂状态下，也不发生粥样硬化，而是发生萎缩样改变，提示了血流动力学特别是切应力在动脉粥样斑块形成和血管重构中的作用。为探讨移植后动脉重构的机理，该文对移植动脉段进行了细胞分子生物学研究。方法建立动脉移植到静脉的新西兰白兔模型，6个时间点后取材，HE染色光镜下观察血管内、中膜厚度与面积；扫描电镜观察内皮变化，透射电镜观察超微结构改变；TUNEL方法观察细胞凋亡状况，RT－PCR检测基因表达水平。结果HE染色发现移植动脉在极低切应力状态下，随时间推移，除管壁发生“类静脉化”的萎缩样改变外，管腔面积先减小后增加；TUNEL结果显示移植动脉发生了细胞凋亡，而且凋亡先发于血管内膜细胞，进而过度到中层，最后累及外膜；通过弹力纤维和胶原纤维双染色证实，弹力纤维在整个过程中并未有显著数量改变，而胶原纤维却发生崩解，最终导致管壁萎缩；术后一周移植动脉的MMP2和MMP9表达明显增高，以后渐下降。结论低切应力作用于血管内膜层细胞致使其凋亡继而由内而外信号转递的过程，这构成了移植动脉发生萎缩样变的基础；胶原纤维的崩解在移植动脉萎缩样变过程中也发挥了重要作用，伴随着MMP表达的上凋。     

机械牵张调控LRP6磷酸化介导心脏侧群干细胞增殖

 目的 研究机械牵张对心脏侧群干细胞(cardiac side population cell, CSP)增殖的作用及机制。方法 通过流式细胞仪分选并培养大鼠乳鼠CSP,牵张后观察细胞的增殖。并通过胸主动脉缩窄(transverse aorta constriction, TAC)建立压力负荷小鼠模型,流式细胞仪分选后观察CSP的比例。进一步通过荧光染色以及Western blot检测CSP的LRP6磷酸化水平。结果 成功分离及培养CSP,机械牵张可促进CSP增殖。体内实验表明,压力负荷可明显促进CSP比例的升高。免疫荧光及Western blot实验表明,机械牵张可明显促进CSP的LPR6磷酸化。CSP过表达LRP6可明显增强机械牵张介导的促增殖效应。结论 机械牵张可促进LRP6磷酸化,从而促进CSP增殖,有利于机体对病理性刺激产生适应性反应以维持心功能。     

乙醛脱氢酶2通过缺氧诱导因子／热休克蛋白因子及P53途径抑制心肌细胞凋亡

目的研究乙醛脱氢酶2(ALDH2)发挥心脏保护作用的途径。方法实验分细胞水平部分和动物模型水平部分。细胞水平部分:原代培养心肌细胞,分为对照组、缺氧组、ALDH2*1 (野生型,具备ALDH2活性)预处理缺氧组和ALDH2*2(缺失型,ALDH2活性缺失)预处理缺氧组。动物模型水平部分:制备ALDH2心脏高表达小鼠模型(5只),以注射空质粒的腺病毒小鼠作为对照组(5只),结扎冠状动脉左前降支,1个月后得到心力衰竭模型。运用免疫组织化学和反转录-聚合酶链反应检测缺氧诱导因子(HIF1α)／热休克蛋白因子(HSF1)和P53的表达情况。结果活性氧自由基(ROS)的产生并不随ALDH2(不论是野生型还是缺失型)的转染而发生改变,而且Western印迹法亦显示ROS下游的ERK、JNK的磷酸化也未发生改变,说明ALDH2并未通过ROS途径影响心肌细胞凋亡。4-羟壬烯(4-HNE)的产生在转入ALDH2*1后明显减少,而转入ALDH2*2后明显增多,提示ALDH2对心肌细胞的保护作用与加快4-HNE的消除有关。转入ALDH2*1后,HIF1α／HSF1明显升高,P53明显降低,而转入ALDH2*2后HIF1α／HSFl明显下降,P53明显升高。动物模型中HIF1α／HSF1和P53的表达情况与细胞水平的实验结果高度一致。结论ALDH2发挥保护心肌细胞的作用并非通过ROS途径实现,ALDH2至少部分是通过HIF1α／HSFl的上调和P53的下调实现抑制心肌细胞凋亡的作用。     

血流生理脉动切应力与内皮细胞一氧化氮产生的关系

目的研究生理脉动切应力对血管内皮细胞一氧化氮产生的影响.材料与方法利用本室已建立的平行板模拟血流循环装置,在模拟生理脉动切应力(19.29,56.25dynes/cm2)分别作用于培养人脐静脉内皮细胞0,1,2,4,6,10,24h后,用一氧化氮微量测定法测定循环液中一氧化氮的含量.结果在两组模拟生理脉动切应力的作用下,于2h时一氧化氮释放出现一峰值,之后逐渐下降,并且内皮细胞释放一氧化氮的量随切应力的增大而增加.结论生理脉动切应力对血管内皮细胞一氧化氮的产生具有调节作用,可能对血管动脉粥样硬化的形成与发展中,临床手术前后发生的血管痉挛与血栓形成等增多有重要影响.