Schwann细胞与硫酸肝素-胶原蛋白支架材料的复合

本研究目的是观测硫酸肝素-胶原蛋白支架材料对Schwann细胞的相容性,采用: (1)冷冻干燥法制备硫酸肝素-胶原蛋白支架材料,培养、纯化并鉴定Schwann细胞后,将Hoechst荧光标记的Schwann细胞复合于硫酸肝素-胶原支架材料中,荧光显微镜、扫描电镜及光镜下观察其在材料内部的空间排列形式; (2)以台盼蓝染色、MTT法检测Schwann细胞与硫酸肝素-胶原蛋白共培养时的生物活性。结果显示:作者制备的支架材料具有纵行的、平行排列的微管结构,Schwann细胞在支架材料微管内成线性平行排列,类似于神经基底膜与Schwann细胞形成的Büngner带;台盼蓝染色Schwann细胞死亡率仅6. 47%,MTT法证明Schwann细胞与硫酸肝素-胶原蛋白材料共培养时保有高度的生物活性。本研究结果表明:以硫酸肝素复合胶原蛋白结合特定条件下冷冻干燥技术可以制备在组分和内部空间结构上高度仿生神经的新型神经组织工程支架材料,与Schwann细胞有良好的细胞相容性。     

磷酸钙骨水泥/纤维蛋白胶注射型复合载体的凝固时间和显微结构对修复骨缺损的意义

目的:分析由注射型磷酸钙骨水泥(calciumphosphatecement,CPC)和纤维蛋白胶(fibringlue,FG)组成的复合支架材料的凝固时间和显微结构特征,探讨其作为注射型复合载体的可行性。方法:将注射型CPC和FG按凝固后的体积计算,以2∶1的体积比混合,制成复合载体。测定复合材料的凝固时间,并用扫描电镜观察其煅烧前后的结构特征。结果:复合材料的初凝时间平均为9.54min,终凝时间平均为21.38min。扫描电镜发现,FG贯穿于CPC晶体间,并将CPC晶体紧密连接。煅烧后有较多大孔产生,空隙率为32.6%。且有延伸的沟隙将CPC微孔相连。结论:复合材料凝固时间适合临床操作;随着FG的降解,复合材料的空隙率将提高,有望加速CPC的降解和骨的生长,用作生物活性分子的注射性载体。     

骨保护素对破骨细胞分化和骨吸收活性的抑制作用

背景：骨保护素(osteoprotegerin，OPG)可抑制破骨细胞的分化，抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性并诱导其凋亡，在骨质疏松、类风湿性关节炎、癌症骨转移的领域有潜在的应用价值。目的：鉴定在CHO细胞中表达的人骨保护素生物学活性。设计：随机对照的实验研究。地点和对象：实验在解放军第四军医大学西京医院骨科研究所完成，研究对象：人骨肉瘤细胞株MG63、中国仓鼠CHO细胞株、克隆质粒pUC19及真核表达质粒pcDNA3为本室保存，12只6～8周龄BABL／c雄性小鼠由本校动物中心提供。干预：RT-PCR法获得人OPG编码区cDNA并构建真核表达载体，在脂质体介导下转染CHO细胞，经Western blot鉴定筛选稳定表达OPG的细胞系。获取含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液，实验组：体外培养的鼠破骨细胞培养基中加人含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液。对照组1只加入转染pcDNA3空载体的CHO细胞培养基的浓缩液。对照组2只加入完全培养基。主要观察指标：观察人OPG对破骨细胞的分化和骨吸收的影响。结果：转染人OPG编码区基因的CHO细胞能分泌表达OPG。小鼠骨髓细胞在la，25(OH)zD3(1&;#215;10^-8mol／L)的存在下可稳定分化出具有骨吸收功能的破骨细胞样细胞，在该培养体系中加入含有OPG的CHO细胞培养上清浓缩液，TRAP染色阳性细胞数明显减少(t=5．547，p&;lt;0．01)，骨吸收陷窝的数量显著减少(t=3．409，P&;lt;0．01)。结论：人骨保护素可在CHO细胞中分泌表达，并对体外培养状态下的破骨细胞的分化和骨吸收功能有抑制作用。     

转化生长因子β对异种骨移植局部免疫因子表达的调节

背景:异种骨移植免疫排斥反应是影响预后的主要问题。然而,对异种骨移植中免疫因子表达和调节的认识尚少。白细胞介素1,白细胞介素6和肿瘤坏死因子α是重要的免疫因子,与移植后排斥反应密切相关。目的:观察异种骨移植局部白细胞介素1、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白质的表达,并探索转化生长因子β对这些免疫因子的调节作用。设计:随机对照实验。单位:解放军第四军医大学西京医院骨科研究所。对象:雄性Balb/c小鼠72只,体质量20～25g,随机分为3组,复合松质骨载体组,单纯松质骨载体组和空白对照组,每组24只。方法:实验于2003-06/2004-06在解放军第四军医大学西京医院骨科研究所完成。复合松质骨载体组小鼠左侧股部肌间隙植入复合转化生长因子β的松质骨载体;单纯松质骨载体组植入单纯松质骨载体;空白对照组仅行手术,不植入材料。术后4,7,14和21d观察各组小鼠植骨或手术区周围组织中增殖细胞记数;应用原位杂交和免疫组化技术检测植骨局部多种免疫因子的表达。主要观察指标:各组小鼠移植骨局部组织学观察及细胞密度测定;移植骨局部白细胞介素1α,白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白质的表达。结果:①各组小鼠移植骨局部组织学观察及细胞密度测定:7d时,复合松质骨骨粒组较单纯牛松质骨骨粒组增殖组织中细胞密度明显高[(470.63±132.89),(311.46±93.69)个/视野,P<0.01];但14,21d时两组间则无明显差异。②各组小鼠移植骨局部白细胞介素1α,白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白质的表达:异种骨移植后的7,14d,复合了转化生长因子β的异种骨移植局部白细胞介素1α和白细胞介素6蛋白质表达分别较单纯异种骨低(7d白细胞介素1α:42.55±9.65比67.95±17.82,白细胞介素6:48.26±11.17比77.21±15.16;14d白细胞介素1αmRNA:84.77±7.42比112.94±7.02,白细胞介素6:78.10±17.22比121.18±15.44,P<0.01),但对肿瘤坏死因子α而言,则无明显差异(P>0.05)。结论:在异种骨移植局部,多种细胞可以表达白细胞介素1α,白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白质,且这种表达受到转化生长因子β的调节。提示了转化生长因子β调节异种骨移植免疫的一种方式。     

个体化人工半膝关节假体计算机辅助设计和快速成型的基础：股骨髁三维建模

背景：目前保肢方法有异体骨关节置换、人工金属假体置换、肿瘤骨段灭活再植等，各有优缺点。四肢骨肿瘤切除深低温冷冻大段异体骨关节置换术存在异体一自体关节不匹配和后期关节软骨坏死影响关节功能的问题。 目的：评估一种由螺旋CT扫描数据获取关节软骨表面轮廓信息的方法，为基于快速成型技术的个体化人工半膝关节研究奠定基础。 设计：开放性实验。 单位：解放军兰州军区乌鲁木齐总医院创伤一科。 材料：实验于2001-09／2003-05在解放军第四军医大学西京医院骨科研究所和西安交通大学先进制造研究所完成。样本来源：CT扫描对象为25岁健康男性志愿者。 方法：采用Picker 6000螺旋CT对股骨远端进行层厚lmm扫描，在Picker 6000 CT机的Voxel Q图像工作站进行三维容积重建，之后对重建数据间隔0.1mm下载二维断层图像。自行开发数据格式转换软件，对下载图像进行滤波、去噪等处理，求出断面图像的二维边缘轮廓矢量化数据，输入美国Imageware公司Surfacer 9．0软件进行矢量化三维重建。然后通过对关节软骨轮廓的识别及假体设计需要，提取出感兴趣的关节软骨表面轮廓的三维图像，用于个体化人工半膝关节的计算机辅助设计。 主要观察指标：CT图像的矢量转换和股骨髁三维重建矢量图像。 结果：利用自主开发的医学图像矢量转换软件，实现了CT图像数据的矢量转换，在Surfacer9.0三维处理软件中构建出个体化股骨髁三维实体模型，并根据设计需要进行编辑，提取出可进行人工半膝关节假体计算机辅助设计需要的关节软骨三维模型。所构关节面轮廓可进一步处理，从而完成人工半膝关节假体的计算机辅助设计；其文件格式为．stl格式，可直接被快速成形软件识别和用于工程学制造。 结论：由螺旋CT数据进行关节软骨外形轮廓的矢量化重建可获得精确的关节软骨轮廓三维实体模型，模型可编辑性强，为复合大段异体骨移植的人工半膝关节假体的计算机辅助设计和快速成型制造打下了基础；用此方法进行医学图像信息的矢量转换简单易行，在骨科、口腔颌面外科生物制造领域有良好的应用前景。     

人骨髓间充质干细胞的优化培养

目的:骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcellsMSCs)培养大多集中在动物,探讨人MSCs的优化培养方法,为组织工程临床应用奠定基础。方法:手术切取患者骨松质3mm×3mm×3mm,在含血清培养基内用剪刀将其剪为1mm×1mm×1mm大小,然后用注射器冲洗;抽取患者骨髓5mL。分别用贴壁法和密度梯度离心法原代培养。比较不同培养方法MSCs的生长情况。对各组传代细胞用化学药物进行成骨诱导培养,并检测成骨细胞表型。结果:手术切取患者骨松质和抽取患者骨髓均能培养出骨髓间充质干细胞,切取骨松质获取的细胞数量大,5m骨髓培养细胞数平均可达L2.43×108,3mm×3mm×3mm骨松质可以获取MSCs的平均细胞数可达9.57×108;全骨髓法细胞贴壁时间早两三天,密度梯度离心法细胞均一性好,利于纯化。结论:临床组织工程中可以根据情况和需要采用不同方法获取MSCs。     

快速成形的多孔材料作为骨髓基质细胞支架材料的生物相容性特征

目的：采用体外细胞培养法对聚乳酸／聚羟乙酸共聚物／磷酸三钙(Poly-lactic-co-glycolic and Tri-calcium phosphate，PLGA／TCP)和聚乳酸／聚羟乙酸共聚物(PLGA)的生物相容性进行研究，探讨其作为组织工程支架材料的可行性。方法：将传代培养的新西兰兔骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)分别接种于快速成形的三维支架材料PLGA和PLGA／TCP，单纯接种细胞作为对照组，于接种后不同时间通过倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞生长、黏附情况，并绘制细胞生长曲线观察细胞增殖情况。结果：骨髓基质细胞可以在PLGA／TCP和PLGA支架材料表面黏附、生长并连接成片，分泌细胞外基质，对照组与实验组、各实验组之间生长曲线相近，统计学分析无显著性差异。结论：PLGA／TCP和PLGA对兔骨髓基质细胞的形态学、细胞生长增殖等均无影响，具有良好的生物相容性，可作为组织工程的支架材料而安全应用。     

牛骨形态发生蛋白上调小鼠血管内皮细胞生长因子基因表达对骨修复过程中血管生长的影响

目的：采用RT-PCR方法检测牛骨形态发生蛋白(Bovine bone morpho-genetic protein，bBMP)对小鼠血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)基因表达的影响。方法：将bBMP植入Balb／C小鼠肌袋，取材后提取组织总RNA，利用RT-PCR检测bBMP在体内对VEGF基因表达的影响。结果：实验组VEGF3种亚型的扩增产物的表达皆高于对照组。结论：体内环境下，bBMP可上调VEGF表达，从而在一定程度上促进骨修复过程中的血管生长。     

脊髓诱发电位和腓总神经传导速度的实验研究

电生理检查已广泛运用于临床疾病的诊断及相关动物实验研究，尤其在脊髓和周围神经损伤方面［１５］。我们根据家兔、犬的解剖特点，确立其电生理检查的方法和正常值，现报告如下。１材料与方法健康杂种犬４８只，体质量（１４．３±２．８）ｋｇ。健康纯种新西兰兔５４...     

外固定架在足下垂治疗中的应用

[目的] 探讨外固定架在足下垂畸形治疗中的作用.[方法] 足下垂患者9例,平均足下垂畸形时间15.5个月,将外固定架螺纹杆连接于胫骨与下垂足之间,对足下垂进行缓慢牵拉,每日螺纹旋转3次.[结果] 所有患者均获得随访,平均随访时间11.2个月(6～19个月);足下垂矫形时间3～6周(平均4.2周),足下垂均矫正到中立位,带架时间7～11周(平均8周),所有患者均未发现有神经、肌腱和血管的损伤;6例胫骨骨折、骨不连患者矫形后经过锻炼踝关节功能恢复良好,活动范围约30°～50°;小腿前外侧和后侧肌群挫灭伤患者经过锻炼,踝关节活动范围约12°.[结论] 通过外固定架的缓慢牵拉,可以有效治疗足下垂畸形.