基于雨课堂融合CBL教学法的传染病学见习课程建设及应用

建立基于雨课堂融合CBL教学法结合床旁教学的传染病见习课程模式并评价其应用效果。通过问卷调查+过程性评价+终结性评价的综合评价体系评价教学效果。研究结果表明,基于雨课堂的传染病见习课程模式有助于提高学生的学习兴趣和锻炼临床思维能力,过程性评价联合终结性评价的评价体系能够较全面反映学生学习的过程与效果。因此,有必要进一步推广应用这种教学模式,并在实践的过程中持续改进。     

TGF-β1多肽疫苗抗肝纤维化的鉴定

目的 鉴定转化生长因子β1（TGF-β1）的优势抗原表位偶联钥孔戚血蓝素（KLH）蛋白人工合成多肽疫苗对SD大鼠的免疫原性,并探讨对SD大鼠实验性肝纤维化的抑制效应.方法 人工合成TGF-β1优势抗原表位多肽偶联KLH蛋白后,作为多肽疫苗免疫SD大鼠.40只SPF级SD大鼠随机分为4组,即正常对照组、佐剂对照组、造模组（CCl4诱导）、多肽疫苗组,每组各10只,采用CCl4复合因素诱发大鼠肝纤维化模型.多肽疫苗组动物第1、14、28天连续三次每次腹股沟处及腋窝处多点注射50 μg 0.5ml乳剂（相同体积的弗氏佐剂加合成肽）,此后每隔7d免疫一次无任何佐剂的合成肽（50 μg0.5 ml水剂）,共免疫10周;造模组及多肽疫苗组自第3周起首次皮下注射40％ CCl4橄榄油溶液2 ml/kg,以后每周2次背部皮下注射40％ CCl4橄榄油溶液1.5 ml/kg、30％乙醇6 ml/kg隔日灌胃并给予高脂饮食连续造模8周.正常对照组大鼠同时给予相同剂量的橄榄油溶液皮下注射;佐剂对照组大鼠同期给予注射用水加弗氏佐剂0.5ml乳剂.第10周处死所有大鼠,ELISA检测血清TGF-β1抗体、肝纤维化指标（HA、Ⅳ-C）,全自动生化仪检测血清ALT、AST、TBIL、ALB和GLB,碱水解法检测肝脏羟脯氨酸（Hyp）含量,并进行肝脏病理检查.结果 TGF-β1多肽疫苗可以诱导SD大鼠产生一定量的抗TGF-β1抗体,但是与对照组比较没有统计学差异（P＞0.05）.多肽疫苗组生化指标ALT、AST、TBIL与造模组比较有统计学差异（P＜0.05）,但是血清HA、Ⅳ-C含量及肝脏Hyp含量与造模组相比并没有统计学差异（P＞0.05）.HE、VG染色可见多肽疫苗组较造模组肝组织病理变化及纤维化程度无明显差异.结论 TGF-β1多肽疫苗可以诱导SD大鼠产生一定量的抗TGF-β1中和抗体,且可能具有保肝作用,但其干预治疗实验性大鼠肝纤维化的疗效较差,有待进一步研究.     

HAART治疗20例艾滋病患者疗效评估

目的评价高效抗逆转录病毒疗法(Highly active antiretroviral therapy,HAART)对我国艾滋病(AIDS)患者的疗效。方法对20例接受免费HAART治疗1~2年(平均18个月)的HIV-1感染的晚期患者进行横断面调查,检测HIV-RNA病毒载量、CD4 T淋巴细胞绝对计数、HIV特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答、常规生化检验和临床指标观察。结果所有观察对象在HAART治疗1~2年(平均18个月)后,临床症状明显改善:大部分患者病毒复制得到有效抑制,80%患者血浆中HIV-RNA载量在检测水平以下,CD4 T淋巴细胞绝对计数平均356.9±155.7/mm3,其中8例(40%)大于400/mm3;CTL应答频率和效应在每个蛋白区都有应答,对Nef蛋白应答较为突出。结论HAART治疗对我国HIV/AIDS患者疗效显著,能提高HIV-1感染者的生活质量,降低机会性感染,并使部分免疫功能重建,具有较高的安全性和耐受性。     

咖啡酸苯乙酯对实验性肝损伤大鼠的保护作用

目的 探讨不同给药途径及不同剂量咖啡酸苯乙酯(CAPE)对四氯化碳(CCl4)等复合因素诱导大鼠肝损伤的保护作用.方法 选取95只雄性SD大鼠,随机分为9组,A:正常对照组;B:溶剂对照组,皮下注射橄榄油,腹腔注射10％乙醇;C:单纯模型组,腹腔注射10％乙醇;D:维生素E组,腹腔注射维生素E 10 mg/kg,1次/...     

咖啡酸苯乙基酯缓解L02细胞脂毒性机制研究*

目的 探讨咖啡酸苯乙基酯(CAPE)对棕榈酸酯诱导的L02细胞脂毒性的保护机制。方法 取正常肝脏L02细胞和过氧化物酶体增殖激活受体共激活因子1α(PGC1α)敲除细胞,分别分为对照组、棕榈酸酯处理组和CAPE联合棕榈酸酯处理组,后两组分别给予终浓度300mM棕榈酸酯处理7 d或是联合终浓度10μM CAPE处理7 d。分别检测细胞甘油三酯(TG)、上清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)水平,使用流式细胞术检测线粒体活性氧(ROS)水平,采用qPCR定量法检测PGC1α和过氧化物歧化酶2(SOD2)mRNA水平,采用Western-blot法检测PGC1α蛋白表达。结果 棕榈酸酯处理组细胞TG含量为(16.92±1.43)mg/g protein,显著高于CAPE联合棕榈酸酯处理组【(10.53±0.81)mg/g protein,P<0.05】;棕榈酸酯处理组细胞上清TNF-α和IL-6水平分别为(117.6±3.72)pg/ml和(67.9±2.7)pg/ml,均显著高于CAPE联合棕榈酸酯处理组【分别为(74.88±3.37)pg/ml和(53.94±2.39)pg/ml,P<0.05】;棕榈酸酯处理组线粒体ROS水平为(1.7±0.06),显著高于CAPE联合棕榈酸酯处理组【(1.36±0.04),P<0.05】;CAPE联合棕榈酸酯处理组SOD2和PGC1α mRNA水平分别为(0.76±0.03)和(0.73±0.04),显著高于棕榈酸酯处理组【(0.55±0.05)和(0.57±0.03),P<0.05】;CAPE联合棕榈酸酯处理组PGC1α 蛋白表达水平显著高于棕榈酸酯处理组;在敲除PGC1α后,CAPE联合棕榈酸酯处理组细胞TG含量为(23.73±1.95)mg/g protein,与棕榈酸酯处理组的(25.86±1.02)mg/g protein比,无显著性差异(P>0.05),上清TNF-α和IL-6水平分别为(128.33±4.41)pg/ml和(80.33±3.76)pg/ml,与棕榈酸酯处理组的(145.78±5.79)pg/ml和(87.23±4.85)pg/ml比,无显著性差异(P>0.05);线粒体ROS水平为(1.83±0.25),与棕榈酸酯处理组的(2.05±0.14)比,无显著性差异(P>0.05)。结论 通过上调PGC1α信号通路,CAPE对棕榈酸酯诱导的肝脏L02细胞脂毒性具有有效的保护作用。     

人α防御素的稳定表达和活性鉴定

目的: 制备有较高生物学活性的分泌型人α防御素1与α防御素3,并初步鉴定其抗菌活性;方法: 将真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-TOPO-HNP1,3与含有dhfr基因的质粒pDCH1P11共转染入CHO-dhfr-,ELISA检测到培养上清中重组蛋白的表达,对阳性表达的细胞进行G418筛选,对其中9个表达量较高的阳性克隆进行氨甲喋呤(MTX)加压扩增, ELISA法、RT-PCR法及间接免疫荧光(IFA)分析蛋白表达情况,并同步测定其体外抗菌活性.结果: α防御素1的表达量是18.85～47.46 mg/L*48 h*106个细胞; α防御素3的表达量是16.89～35.57 mg/L*48h*106 个细胞.用RT-PCR从稳定表达的细胞株中扩增出全长约303 bp的片段;IFA 显示稳定转染的细胞胞质核周质中有强的绿色荧光;K-B纸片琼脂扩散法显示α防御素1,3在大肠埃希菌MH平板上形成了明显的抑菌圈.结论: 成功高效地表达了分泌型的α防御素1,3,并具有良好的生物学活性,为进一步探讨α防御素1,3对HIV-1的抑制作用提供了物质基础.     

人类免疫缺陷病毒-1B和C亚型Nef蛋白特异性CD8+T细胞交叉应答反应的研究

目的：探讨中国人群人类免疫缺陷病毒-1B（HIV-1B亚型）Nef蛋白特异性CD8^＋T细胞应答在B、C亚型间的交叉反应性。方法：选取51例HIV-1B亚型感染者，采取外周血单个核细胞（PBMC），用合成的54个HIV-1B、C亚型Nef全基因序列肽库作为抗原，酶联免疫斑点吸附试验（ELISpot）方法检测HIV-1B亚型Nef蛋白特异性CD8^＋T细胞对B、C亚型抗原的应答反应。结果：在产生特异性应答效应的个体中，82．9％（29／35）感染个体同时识别B和C亚型肽段。感染个体在对两个亚型肽段的识别数量及应答强度上无显著差异（P=0．529和P=0．754）。HIV-1B亚型特异性CD8^＋T细胞能针对70．4％无论B还是C亚型的Nef肽段产生应答反应。被特异性CD8^＋T细胞同时识别的B、C亚型Nef肽段间氨基酸序列的同源性显著高于仅能被识别的B亚型或C亚型肽段的氨基酸序列（P=0．01）。结论：HIV-1B亚型Nef蛋白特异性CD8^＋T细胞应答在B、C亚型间具有良好的交叉反应性，能产生交叉反应的氨基酸序列具有较高的亚型间同源性。     

干扰素治疗慢性丙型肝炎发生甲状腺功能异常的分析

目的：探讨干扰素治疗慢性丙型肝炎患者后发生甲状腺功能异常的情况及相关因素的分析。方法回顾性分析206例慢性丙型肝炎患者,观察89例干扰素治疗前和117例治疗后甲状腺功能的异常情况及其影响因素,Logistic分析发生甲状腺功能异常的危险因素。结果干扰素治疗前的89例患者中,有23例合并甲状腺功能异常,其中甲状腺功能减退症7例,甲状腺功能亢进症2例,亚临床甲状腺功能减退症14例;干扰素治疗后的117例患者中,有17例发生甲状腺功能异常,其中甲状腺功能减退4例,为桥本甲状腺炎2例和非自身免疫性甲状腺功能减退2例;甲状腺功能亢进1例;亚临床甲状腺功能减退症12例。多元Logistic回归分析显示,女性（OR＝5．828）、体内预存抗甲状腺自身抗体（OR＝35．393）是慢性丙型肝炎患者使用干扰素治疗后诱发甲状腺疾病的独立危险因素。结论干扰素治疗慢性丙型肝炎可导致甲状腺功能异常的发生;对体内预存大量抗甲状腺过氧化物酶抗体的女性,要监测甲状腺功能,定期复查。     

人中性粒细胞多肽1真核表达载体的构建与表达

目的 构建人中性粒细胞多肽1(HNPl)基因真核表达载体，为探讨HNP1基因工程生产的可能性奠定基础。方法 从健康人中性粒细胞中提取总RNA，用RT-PCR方法扩增出HNPl基因cDNA片段，将纯化PCR产物与pMD18-T载体连接，经酶切鉴定及测序确证，将其亚克隆入真核表达载体pcDNA3．1／V5-His-TOPO中．用脂质体转染CA3S-7细胞，用BA-ELISA法检测转染细胞上清中HNP1的表达。结果 从人中性粒细胞中克隆出人HNP1基因，经测序分析与GenBank公布的人HNP1核苷酸序列完全一致，并在COS-7细胞中获高效瞬时表达。结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3．1／V5-His-TOPO／HNP1，为后续哺乳动物工程细胞株的建立奠定了实验基础。