蚀斑减数试验的建立及在体外抗流感病毒药物敏感性试验中的应用

目的 建立PRA以评估奥司他韦(达菲)、金刚烷胺、利巴韦林和板蓝根4种药物的体外抗流感病毒作用.方法 建立PRA,选取临床分离的流感病毒株8株,其中甲型流感病毒3株,乙型流感病毒5株.病毒培养并接种,利用PRA测定奥司他韦、金刚烷胺、利巴韦林和板蓝根4种药物体外对流感病毒的IC_(50)值.结果 8株甲、乙型流感病毒临床分离株的PRA测定结果显示,奥司他韦对甲型流感病毒IC_(50)值为0.064-0.128 mg/L,金刚烷胺为0.5 mg/L,利巴韦林对甲型流感病毒不敏感(IC_(50)>8 mg/L),板蓝根无抗病毒作用;奥司他韦、金刚烷胺、利巴韦林和板蓝根对乙型流感病毒均未发现体外抗病毒作用.结论 奥司他韦和金刚烷胺对甲型流感病毒敏感,利巴韦林不敏感,板蓝根无抗病毒作用,该4种药物未发现体外抗乙型流感病毒作用.     

实时荧光PCR法和流式细胞术检测HLA-B27的结果分析

目的比较实时荧光PCR法和流式细胞术两种方法检测人类白细胞抗原B27(HLA-B27)的临床应用价值。方法分别采用实时荧光PCR法和流式细胞术两种方法检测225例疑似强直性脊柱炎患者血中HLA-B27,比较和分析两种方法的检测结果。结果 95.11%样本检测结果相同,差异不具有统计学意义(P0.05),将存在差异的标本进行基因测序后,结果与实时荧光PCR的检测结果一致。结论两种方法检测HLA-B27均具有较高的灵敏度和特异度,实时荧光PCR法在结果的准确性上更优于流式细胞术。     

肿瘤标志物联合检测提高消化道肿瘤的诊断阳性率

目的研究联合检测肿瘤标志物 CEA、CA199、CA50和 CA242对消化系肿瘤的诊断价值。方法分别采用微粒子酶免分析和 ELISA 法测定了结直肠癌,结直肠癌合并肝转移或肝癌患者血清 CEA、CA199、CA50和 CA242水平。结果结直肠癌患者 CEA、CA199、CA50和 CA242单项检测灵敏度(阳性率)分别为71.4%、80%、48.3%和80%,四项联合检测灵敏度为91.4%;肝癌患者单项检测灵敏度分别为0.0%、61.3%、20%和25.8%,联合检测灵敏度为80.6%,结肠癌肝转移患者单项灵敏度均为100%。结论 CEA、CA199、CA50和 CA242四项联合检测能够提高对消化系肿瘤的诊断灵敏性和诊断价值,并有利于结直肠癌肝转移和原发性肝癌的鉴别诊断。联合检测可以明显提高消化道肿瘤的检测率。     

Caspase-8信号事件对免疫反应的活化调节作用

在机体的免疫系统中，抗原诱导淋巴细胞活化增殖并使其具备效应功能，而后生理性的死亡诱导信号活化并促使扩增的效应淋巴细胞通过凋亡而被清除，从而得以维持机体的免疫稳态。caspase是介导细胞凋亡的关键蛋白酶，然而最近的一些研究显示处于凋亡信号通路上游的caspase-8分子介导的信号事件却在免疫细胞的增殖活化中发挥着重要作用。     

多重荧光定量PCR和液态芯片技术对下呼吸道病毒检测的应用比较

目的比较荷兰Patho Finder公司多重荧光定量PCR技术(Respi Finder 2SMART试剂盒,简称Respi Finder检测)和加拿大Luminex公司液态芯片技术(呼吸道病毒检测试剂盒,简称x TAG RVP)对下呼吸道标本病毒检测的结果。方法收集2015年1至12月于北京协和医院疑似病毒性肺炎住院患者100例下呼吸道标本,分别利用Respi Finder和x TAG RVP检测试剂进行常见呼吸道病毒核酸检测,并全部进行PCR及测序分析,比较两种方法的敏感性和特异性。结果 100份下呼吸道标本经Respi Finder和x TAG RVP方法检测,阳性率分别为60.0%和51.0%,混合感染率均为8.0%。两种方法结果一致率为80.0%。以PCR及测序结果为准,经Respi Finder和x TAG RVP方法检测的敏感性分别为97.9%和94.3%,特异性分别为74.5%和97.9%,阳性预测值分别为78.3%和98.0%,阴性预测值分别为95.0%和93.9%,两法检测特异性及阳性预测值差异有统计学意义(P0.05)。结论与Respi Finder方法相比,x TAG RVP对常见呼吸道病毒检测的特异性较好,敏感性相当,对呼吸道病毒的检测性能优于Respi Finder检测。     

一个家族性异常白蛋白高甲状腺素血症的表型和基因型分析

目的报告一个家族性异常白蛋白高甲状腺素血症(familial dysalbuminaemic hyperthyroxinaemia，FDH)家系。方法测定家系4个成员(先证者、母亲、女儿和弟弟)血清甲状腺激素和促甲状腺激素，荧光标记甲状腺素(thyroxine，T4)和血清温育后进行蛋白电泳，白蛋白基因点突变检测。结果先证者、母亲和女儿的血清总甲状腺素升高，游离甲状腺素、总三碘甲腺原氨酸、游离三碘甲腺原氨酸和促甲状腺激素正常，蛋白电泳显示T4-白蛋白峰明显升高增宽，白蛋白基因DNA编码区653G→A。弟弟的甲状腺激素正常，T4结合蛋白电泳未见异常，白蛋白基因未见突变。结论首次报道国内一个FDH家系，白蛋白基因DNA编码区653G→A引起白蛋白和T4亲和性增加，导致血清T4测定假性升高。     

人群CagA阳性幽门螺杆菌感染调查

自1983年Warren及Marshall在人胃粘膜中发现螺状弯曲菌（即幽门螺杆菌，HP）以来，国内外进行了大量临床病理的研究，人们发现HP在人群中发病率很高，流行广泛。幽门螺杆菌与慢性胃炎消化性溃疡，胃癌和粘膜相关性淋巴样组织淋巴瘤密切相关。1996年WHO将其列为一级致癌因子，在我国普通人群中，HP感染率以达50％到60％。     

巢式PCR检测滤纸血片CMV DNA方法的建立及评价

目的 建立巢式PCR检测滤纸血片标本巨细胞病毒核酸(CMV DNA) 的实验方法,并对其灵敏度、最低检测限、稳定性等进行评价.方法 采集医院确诊CMV阳性的血液样品,分别制备成全血和滤纸血片标本.选取5份滤纸血片标本,分别打取3个或6个直径3 mm的圆片用于DNA提取,并对所得DNA溶液的浓度和纯度进行测定.采用巢式PCR对12份滤纸血片和全血标本进行检测,获得该方法的灵敏度和最低检测限数据.将滤纸血片标本储存于-20 ℃ 3个月后重新进行检测,以判断巢式PCR方法的稳定性.结果 将DNA提取时所用圆片数由3个增加到6个后,DNA溶液浓度提高2～8倍,巢式PCR的灵敏度升高;与全血检测结果相比,巢式PCR检测滤纸血片标本CMV DNA方法的灵敏度为100%,最低检测限为75 copy/mL.滤纸血片标本在-20 ℃放置3个月,实验的灵敏度未下降.结论 使用巢式PCR检测滤纸血片标本CMV DNA能够获得准确、可靠、稳定的结果.与3个圆片相比,使用6个圆片进行滤纸血片标本DNA的提取,可使DNA溶液浓度大大增加,因而有助于提高检测的灵敏度.     

qPCR-HRM法检测NSCLC组织EGFR突变

目的比较qPCR-HRM法和测序法检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的差异。方法收集北京协和医院胸外科2010年6月至2011年7月收治的42例非小细胞肺癌患者的石蜡标本,分别用qPCR-HRM法和测序法检测肿瘤组织EGFR基因突变,使用McNemar检验比较其差别。结果 42例标本qPCR-HRM法检测EGFR突变率为33.3%(14/42),测序法为28.6%(13/42),统计学计算未见差异(P=0.5)。结论 qPCR-HRM法检测NSCLC组织EGFR基因突变是一种灵敏、可靠的检测方法,可用于体细胞EGFR突变的检测和测序前突变的筛选。     

qPCR-HRM法检测NSCLC血清循环EGFR突变

目的探讨利用qPCR-HRM法检测血清循环EGFR突变的可能性并与组织检测结果比较。方法收集北京协和医院胸外科2010年6月至2011年7月收治的42例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的石蜡标本及术前静脉血样,用qPCR-HRM法分别检测其EGFR突变情况。结果 42例血样中EGFR突变率35.7%(15/42),肿瘤组织则为33.3%(14/42)。统计表明血浆和组织中的EGFR突变的检测结果未见差别(P0.05)。κ值为0.842(P0.001)。结论使用qPCR-HRM法检测NSCLC患者血清与肿瘤组织的EGFR突变具有极好的一致性。