异体骨髓细胞在不同基因型辐照受鼠中动态分布与迁移规律研究

目的 观察异体小鼠骨髓细胞在不同基因型辐照小鼠体内的分布迁移规律和归巢特点.方法 分离萤火虫荧光素酶转基因C57BL/6J小鼠的骨髓细胞,分别输入γ射线辐照的C57BL/6J小鼠、CB6F1小鼠和BALB/c小鼠体内;在不同时间点,以活体成像仪观察供体骨髓细胞在受体内的动态分布和迁移规律.结果 供体骨髓细胞输注1h后,BALB/c小鼠肺脏中出现荧光且强度最强,与C57BL/6J小鼠和CB6F1小鼠肺脏的荧光强度差异有统计学意义(P=0.000);24 h后肺脏中荧光信号消失;48 h后在肺脏中又检测到荧光信号并逐渐增强.供体骨髓细胞输注4h后,各组小鼠均可在脾脏中检测到微弱荧光,C57BL/6J和CB6F1小鼠脾脏中荧光信号强度的差异无统计学意义(p=0.4051),而BALB/c小鼠和C57BL/6J、CB6F1小鼠脾脏的荧光强度差异有统计学意义(P=0.0012,P=0.001);48 h后各组小鼠脾脏中荧光均有增强,BALB/c小鼠脾脏中的荧光信号强度显著强于C57BL/6J和CB6F1小鼠(P=0.000).供体骨髓细胞输注24 h后各组小鼠肠系膜中均可检测到较弱的荧光信号,48 h后肠系膜中的荧光强度逐渐增强,BALB/c小鼠肠系膜表达的荧光强度强于CB6F1、C57BL/6J小鼠,差异有统计学意义(P=0.000),72 h后肠系膜的荧光强度继续增强,BALB/c小鼠肠系膜的荧光强度强于CB6F1小鼠,差异有统计学意义(P=0.000),CB6F1小鼠肠系膜的荧光强度强于C57BL/6J小鼠,但是两者之间的差异无统计学意义.结论 异体骨髓细胞通过尾静脉输入基因型相合、半相合和全不相合辐照小鼠体内,细胞均首先分布到肺脏,然后依次向肝脏、脾脏、肠系膜淋巴结迁移,最后定居于骨髓微环境后进行造血重建.异基因骨髓细胞输入基因型全不相合小鼠体内后,在脾脏和肠系膜中的分布要多于基因型相合和半相合的小鼠.     

红细胞贮存时间对脂多糖诱导的中性粒细胞炎症释放的影响

目的研究红细胞（RBC）随保存时间的延长对受者中性粒细胞（PMN）炎症释放水平的影响。方法分别将红细胞在保存的第1、21、35天（D1、D21、D35）分离上清,-20℃冻存备用。将冻存的上清与健康受者PMN体外培养12 h后,加入脂多糖（LPS）后培养12、24 h收集上清冻存待检。用ELISA方法检测其IL-6和TNF-α水平。结果红细胞在LPS的刺激下IL-6水平随保存时间延长而增高,差异有统计学意义（P〈0.05）,TNF-α水平也有所增高,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论在LPS的刺激下,D35较之D1红细胞上清促使PMN释放更多的IL-6和TNF-α,可以解释为输注保存时间长的红细胞增强了PMN的炎症反应,这对预防患者在大量输血后引发的相关免疫反应有一定作用。     

丙型肝炎的基因诊断

自从1989年美国Chiron公司的Kuo等人首先建立了检测抗HCV抗体的第一代ELISA方法(C100-3)以来,第二代ELISA(2nd-ELISA、C200)和确证实验——重组免疫印迹试验(RIBA)又相继问世。还有学者尝试用荧光免疫方法做HCV抗原的检测。上述方法所存在的共同问题是灵敏度与特异性都不十分理想,因此不能作为丙型肝炎早期诊断和最终判断传染性的依据。相比之下,基因诊断却可以解决上述问题。     

Acrp30生物学功能及调控的研究进展

Acrp30是脂肪来源的血浆蛋白，其生理学功能包括调节糖、脂代谢，提高胰岛素敏感性，抗动脉粥样硬化等。新近的研究表明，Acrp30有抗炎保肝的效果，有可能成为一种新的肝病治疗药物。Acrp30表达调控是与代谢相关的多种因素综合作用的结果，其中肾脏在Acrp30生物降解和清除中起重要作用，但目前Acrp30在体内的作用机制还有待于进一步研究。     

人抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)在巴斯德毕赤酵母中表达与纯化

目的 :在巴斯德毕赤酵母中进行表达及纯化AT Ⅲ ,以对其功能进行深入研究。方法 :将携带AT Ⅲ基因的表达载体电转染GS115细胞 ,用G4 18筛选抗性克隆 ,SDS PAGE与Western印迹检测及鉴定表达产物 ;采用生化法测定AT Ⅲ的表达量 ;利用凝血酶空斑法测定表达产物活性 ,经过Heparin hyperD柱纯化。结果 :Western印迹分析发现转移至膜上的表达产物能与抗AT Ⅲ单克隆抗体结合 ,证明成功地表达了AT Ⅲ ,纯度 >95 %。活性测定表明表达产物具有天然AT Ⅲ的生物活性。结论 :在巴斯德毕赤酵母中成功地表达与纯化AT Ⅲ ,得到同天然蛋白相似的比活性人AT Ⅲ。     

HCV感染人LDLR转基因小鼠肝癌细胞的初步研究

近年来在研究HCV与易感细胞的相互作用中发现 ,血清中的HCV颗粒是与 β 脂蛋白或IgG结合形成复合物(HCV RNAcarryingmaterial,HCVrcm ) ,HCVrcm通过与细胞表面的脂蛋白受体分子结合进入细胞 ,这种复合物的形成有利于HCV与靶细胞的结合和HCV的持续感染。人低密度脂蛋白受体(hLDLR)是一种表达在细胞表面的脂蛋白受体分子 ,是HCV感染细胞的重要受体 ,它在介导LDL进入细胞的过程中同时将HCV带入胞内。HCV能感染人的肝脏细胞 ,但是不能感染小鼠的肝脏细胞 ,分析可能原因是小鼠的肝脏细胞表面的小鼠低密度脂基金项目 :国家自然科…     

丙型肝炎病毒与宿主蛋白相互作用研究进展

宿主蛋白在丙型肝炎病毒(HCV)的复制、翻译以及致肝脏病变等过程中发挥着重要作用,本文就宿主蛋白与HCV 5′非编码区、3′编码区以及结构蛋白(核心蛋白C、包膜蛋白E1、E2)、非结构蛋白(NS3、NS4、NS5A和NS5B)之间的相互作用进行综述。     

应对生物恐怖的检测技术研究进展

生物恐怖对人类的威胁是巨大而多元化的,现场快速诊断以确定生物恐怖的性质,对于采取正确而及时的应对措施至关重要。本文综述了可能被用作生物恐怖活动的各类生物有害物质,包括传染性极强的病原体或剧毒物,以及针对这些生物有害物质的检测技术研究新进展。     

乙型肝炎病毒基因聚合酶链反应分型方法的建立

根据乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的Ｓ区序列设计了３条引物：ＨＢＳ１、ＨＢＳ２和ＨＢＳ３，与ＨＢＳ１和ＨＢＳ２配对，经２次聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。即可在检测有无ＨＢＶ－ＤＮＡ存在的同时对其基因型分类，可检出１０ａｇ的ＨＢＶ－ＤＮＡ，比免疫学方法更灵敏和特异。２５份不同亚型的标准血清中的绝大多数用Ｓ－ＰＣＲ和ＡＧＩＤ／ＲＰＨＡ的分型结果一致，Ｓ－ＰＣＲ的另一突出优越性的于能够对ＨＢｓＡｇ低滴度和阴性标本     

SEN病毒D亚型ORF1-C端基因的克隆、表达和鉴定

目的:获得SENV-D亚型ORF1-C端蛋白基因序列,并进行表达,为进一步研究及诊断、治疗应用奠定基础.方法:用PCR法从SENV阳性血清中获得SENV-DORF1C端基因,测序验证后,构建了pQE30-SENV-D重组表达质粒,并经过转化E.coli M15,IPTG诱导表达,Western blot分析表达结果.结果:获得了正确序列的SENV-D亚型ORF1-C端蛋白基因序列,表达出Mr约为38×103的蛋白.表达蛋白能与患者血清中相应的抗体结合,发生抗原抗体反应.结论:成功获得并表达了SENV-D-ORF1-C端蛋白,并经Western blot印迹法证实能与阳性血清中的抗体发生抗原抗体反应,有可能用于检测SENV-D抗体.为今后进一步研究有助于疫情监测及早期发现感染者的抗体奠定了坚实的基础.