对新鲜冰冻血浆输注前滤除白细胞必要性的评估

目的 评估新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)输注前常规过滤白细胞的必要性,为合理使用FFP提供实验依据.方法 通过调整血浆分离时间和剩余血浆量,试验9种血浆制备条件,观察不同的制备条件对白细胞残留量的影响;调查4个采供血机构FFP白细胞残留量;使用5种国产血浆滤器对FFP进行过滤,观察白细胞去除效果和对血浆质量的影响.结果 延长血浆分离时间和增加血浆残留量可有效地降低血浆白细胞残留量,达到<1×106/U的水平;4个采供血机构FFP白细胞残留量大多<1×106/U;国产血浆滤器对血浆质量无显著影响,但去白细胞效率低于国外同类产品水平、血浆损失率较高.结论 在规范血浆制备规程的前提下,FFP输注前不必进行常规白细胞过滤,血浆置换等特殊情况可考虑白细胞过滤.     

HLA—DR分子的分离纯化

目的：纯化HLA－DR。方法：纯化抗HLA－DR单克隆抗体1243并与CNBr活化的Sepharose4B偶联亲和柱,应用免疫亲和层析方法纯化HLA－DR分子。结果;从5g HLA-DR阳性的人B淋巴瘤细胞系RAJI裂解液中得到20μHLA-DR分子。它们以二聚体形式存在,能与构象依赖型单抗L243进行结合,煮沸变性后分开为α和β两条单链。这为MHCⅡ类分子抗原表位研究奠定了基础。     

烟草致癌物诱发人支气管上皮恶性转化细胞中p16基因的变化

采用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测ＮＮＫ诱发ＢＥＰ２Ｄ恶性转化细胞中ｐ１６基因变化。与对照组比较,转化细胞中ｐ１６基因的Ｅ１．β外显子带型出现变异,而第１～３外显子均未见泳动变位,提示Ｅ１．β外显子突变和／或缺失所致细胞周期失调是ＮＮＫ诱发人类支气管上皮细胞癌变的可能原因之一。     

生物素化HCV多抗原表位融合基因的克隆及可溶性表达

为了建立丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)的双抗原夹心ELISA检测方法．克隆表达带有生物素标签的Hcv多种抗原优势表位融合蛋白，选取HCV各抗原如Core，NS3，NS4，NS5和E的优势抗原表位片段编码序列．克隆重组为融合基因，插入Pinpoint^TM Xa-1 T载体中诱导表达，并用Western blot进行抗原性及标签生物素活性鉴定；表达抗原经Promega SoftLink Soft Release Avidin Resin系统亲和层析纯化后包被酶联板，用抗HCV单片段抗体阳性血清对表达融合蛋白各区的抗原性作间接ELISA法鉴定。结果显示：成功构建了带有生物素标签的HCV多抗原表位融合基因表达载体，该载体可在JM109(DE3)中可溶性表达目的蛋白，表达产物携带生物素标签，融合的各片段区均具有良好的抗原性。结论：所构建融合抗原可可溶性表达，可以用作双抗原夹心ELISA的酶标抗原．所含生物素标签也可用作酶联检测的生物素一亲和素信号放大系统。     

血小板抗体检验技术进展

人类血小板抗原(HPA)是一组复杂的不均一的膜蛋白系统,由于感染或免疫因素引起的血小板抗体与临床输血和疾病诊断关系密切.近年来,随着检验医学的发展和检测技术的不断更新,对血小板抗体的本质和靶抗原的研究日益深入,HPA的生化特性及其遗传学多态性逐渐被揭示,血小板血型的研究从血清学方法发展到分子免疫学方法,为血小板抗体的检测及其膜糖蛋白分析提供了新的检验技术,对研究手段的完善以及疾病的诊断具有重要的临床意义.如何提高血小板抗体检测技术将成为输血与检验医学今后的研究重点.我们就上述方面的技术进展作一综述.     

PCR结合长臂光敏生物素探针检测粪便中志贺氏菌

本文报告了聚合酶链反应(PCR)结合长臂光敏生物素探针检测出腹泻病患者粪便中志贺氏菌。选择志贺氏菌和侵袭性大肠杆菌(EIEC)共有的DNA序列;质粒编码的侵袭相关焦点(ial)作为靶序列,PCR检测9株志贺氏菌,均扩增出320bp DNA片段,。19株非志贺氏菌均阴性。敏感试验显示其最小检菌量为100 cfu。58份粪际本中,23份阳性(39.6％),粪培养18份阳性(31％)。PCR敏感性高于粪培养8.6％。用长臂光敏生物素标记福氏2a扩     

丙型肝炎病毒内源性靶向基因疫苗对荷瘤小鼠抑瘤效果的初步研究

目的研究基于恒定链的丙型肝炎病毒(HCV)NS3内源性靶向巨噬细胞表面分子Ia的分子基因疫苗对HCV NS3荷瘤小鼠的抑瘤效果,探索HCV感染基因治疗的可行途径。方法BALB/c小鼠皮下接种稳定表达HCV NS3的小鼠骨髓瘤SP2/0-NS3细胞,3 d后于股四头肌注射疫苗进行免疫治疗,2周后进行一次加强免疫。BALB/c小鼠共64只,随机分为等渗盐水对照组、空质粒pCI-neo对照组、pHCV- NS3非靶向治疗组和pHCV-NS3-Thl靶向治疗组,观察成瘤时间、肿瘤大小和小鼠的60 d存活率。结果等渗盐水、pCI-neo、pHCV-NS3、pHCV-NS3-Th1组小鼠平均成瘤时间分别为(16.17±2.55)d、(14.40 ±1.82)d、(16.75±2.36)d、(24.00±5.57)d;成瘤率分别为100.0%(13/13)、100.0%(14/14)、57.1%(8/14)和46.7%(7/15);60 d存活率分别为0、0、50.0%(7/14)和53.3%(8/15)。对四个时间点成瘤小鼠肿瘤大小比较的结果显示,pHCV-NS3-Th1组成瘤小鼠的肿瘤直径最小,与其他组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结果显示,成瘤小鼠的平均存活时间比等渗盐水组延长6 d,比pCI-neo组延长12 d(P<0.05),比pHCV-NS3组延长6 d。结论pHCV-NS3-Th1具有延迟HCV-NS3荷瘤小鼠肿瘤形成、限制肿瘤生长、降低成瘤率、病死率以及提高存活率的作用。基于恒定链的内源性靶向性基因疫苗有望作为HCV感染防治的候选治疗性疫苗。     

脂肪细胞因子研究进展

脂肪组织能够分泌产生一系列细胞因子，通过自分泌、旁分泌、甚至通过血液循环作用于远处的靶器官，参与能量代谢及平衡，并可能参与糖尿病、动脉粥样硬化等一系列肥胖相关疾病的发生。本文综述脂肪细胞补体相关蛋白、抵抗素、肿瘤坏死因子-α、白介素-6、酰化刺激蛋白的研究进展。     

随机扩增多态性DNA反应体系优化设计方案的比较

目的：筛选出反应体系的最佳优化方案用于绿脓假单胞菌的随机扩增多态性DNA分析（RAPD）。方法：应用单因素设计和反应曲面设计（RSD）进行RAPD反应体系的优化。结果：单因素设计受多因素间交互作用的影响,从而使优化的反应体系具有多样性;RSD得出稳定良好的优化反应体系（关键成分浓度）为镁离子2．0mmol/L、引物0．5μmol/L和模板0．5μg/μl。结论：优化RAPD反应体系,RSD方案比单因素设计更简单、科学、合理。     

蜂胶-银离子复合纳米乳剂的研制及其杀菌活性评价

复合纳米消毒乳剂是以蜂胶和银离子为主要抗菌成分,为了解其理化性能、杀菌效果及安全性,采用悬液定量杀菌试验和动物实验及仪器分析方法进行了实验室研究。结果,该复合纳米消毒乳剂含蜂胶20 g/L,总黄酮含量为5.61 g/L,银离子含量为50μg/L。透射电镜观察可见复合乳剂中颗粒直径在30~100 nm,分布均匀。以含体积分数6.25%的复合纳米消毒乳剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌作用1 m in,杀灭率达到100%;以含体积分数12.5%该消毒乳液对白色念珠菌作用5m in,杀灭率亦达100%。该纳米消毒乳液小鼠急性经口毒性LD50>5000 mg/kg,属实际无毒;该乳剂原液对家兔皮肤、眼结膜和阴道粘膜刺激指数均为0,属于无刺激性。结论,复合纳米消毒乳剂具有良好的杀灭细菌繁殖体和酵母菌的作用,动物试验结果属于无毒类物质、对皮肤粘膜无刺激。