应用Dil标记的氧化高密度脂蛋白观察人单核细胞源性的树突状细胞成熟的研究

目的探讨氧化修饰高密度脂蛋白(OxHDL)和高密度脂蛋白(HDL)对人单核细胞源的树突状细胞(DCs)免疫功能的影响。方法从人外周血清中离心提取高密度脂蛋白,经氧化后,分别用Dil荧光标记。将人外周血分离的单核细胞加入包含rhGM-CSF(20ng/mL)和rhIL-4(20ng/mL)的培养基中培养,使其分化为DCs。以PBS作阴性对照,分别与50μg/mL的标记好的OxHDL和HDL混合培养48h后,动态观察DCs成熟过程中的形态学变化,流式细胞术检测DCs成熟表型(CD1#、CD80、CD86、HLA-DR)。结果使用Dil标记的方法良好地显示了DCs摄取OxHDL的形态学变化,OxHDL可促进DCs成熟表型HLA-DR、CD1$的表达(P<0.05),而HDL无此作用。结论Dil是适合DCs形态学研究的良好的荧光标记物,OxHDL可促进DCs成熟。     

降钙素基因相关肽预适应对大鼠缺血/再灌注心肌的作用

降钙素基因相关肽（ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ,ＣＧＲＰ）是心脏和血管感觉神经末梢释放的一种重要效应递质。在离体豚鼠心脏中,５ｍｉｎ短暂缺血即可引起明显的ＣＧＲＰ释放。提示ＣＧＲＰ可能是一种内源性心肌保护物质。在离体大鼠...     

不同类型冠心病患者外周血树突状细胞分型及功能研究

目的：研究不同类型冠心病患者外周循环中树突状细胞（DCs）数量和功能的变化,探讨DCs与冠脉粥样硬化斑块从稳定到“易损”的关系．方法：80入选者被分为稳定型心绞痛组（SAP）（17例）、肌钙蛋白阴性不稳定型心绞痛组[UAP（CTNI-）,15例]、肌钙蛋白阳性不稳定心绞痛组[UAP（CTNI＋）,15例]、急性心肌梗死组（AMI）（15例）,冠状动脉造影阴性对照组（CTL）（18例）．流式细胞4色分析法检测DCs及亚型的比例;流式细胞仪及酶联免疫吸附法（ELISA）检查DCs功能．结果：与CTL组相比,SAP患者外周血DCs占外周血白细胞的比例和数量无显著变化;UAP（CTNI-）患者DCs比例和数量显著增高;AMI患者DCs比例和数量均减少;UAP（CTNI＋）患者DCs比例降低．培养第7日,UAP（CTNI-）,UAP（CTNI＋）,AMI组CD83表达高于CTL,SAP组,UAP（CTNI＋）、AMI组显著高于UAP（CTNI-）组（P〈0．01）．培养第7日,在DCs数量为2×10^8／L时,UAP（CTNI-）,UAP（CTNI＋）,AMI组DCs刺激T细胞增殖的能力显著高于CTL,SAP组（P〈0．01）;UAP（CTNI＋）,AMI组显著高于UAP（CTNI-）组（P〈0．01）．混合淋巴细胞反应上清液中IL-12,IL-10,IFN—α．浓度：UAP（CTNI-）,UAP（CTNI＋）,AMI显著高于CTL,SAP组;UAP（CTNI＋）、AMI组显著高于UAP（CTNI-）组（P〈0．01）,AMI组较UAP（CTNI＋）组有升高趋势．结论：检测冠心病外周血DCs数量、比例及功能可以一定程度反应冠心病的进展．     

黄芪多糖应用于人外周血源性树突状细胞体外培养的实验研究

目的 探讨黄芪多糖对人外周血源性树突状细胞(DC)成熟的影响.方法 从健康人外周血中分离获得PBMC,体外采用多种细胞因子(TNFα、IL-4、GM-CSF)联合诱导,获得了分化与功能相对成熟的DC.并采用流式细胞仪检测技术,观察了不同浓度黄芪多糖(终浓度为50、100、200 mg/L)对DC表面分子表达以及DC与T细胞在体外混合培养体系中活细胞相互作用过程的干预作用.结果 LPS组、50mg/L组、100mg/L组的细胞呈悬浮生长,可见部分细胞聚集成簇,细胞表面可见数量不等、形态不一的树突样突起,扫描电镜下细胞呈不规则形,表面粗糙,胞体有形态不一的突起,α-萘酸酯酶非特异性酯酶染色呈阴性,200 mg/L组细胞大量凋亡崩解.培养6 d后实验组的DC表面CD86(TCD86*LPS=9.1302、TCD86*50 mg/L=6.4024、TCD86*100 mg/L=8.3165,P<0.001)、HLA-DR(THLA-DR*LPS=6.3118、THLA-DR*100mg/L=7.0752,P<0.001;THLA-DR*50 mg/L=3.5797,P<0.01)等表型表达上调,与对照组比较差异有显著性意义.LPS组和100mg/L组的CD14等表达下调,与对照组比较差异有显著性意义(TCD14*LPS=8.5709、TCD14*100=8.6103,P<0.001),50mg/L组的CD14表达下调,但与对照组比较差异无显著性意义(TCD14*50 mg/L=1.7918,P>0.05).结论 研究初步表明,适当剂量黄芪多糖可以上调DC膜表面与抗原递呈相关的HLA-DR、CD86等共刺激分子的高表达,对促进DC的分化与成熟,有着显著的影响,并增加DC的免疫活性.     

链酶亲和素-生物素ELISA检测人心肌肌钙蛋白T

目的 建立人心肌肌钙蛋白T (cTnT)链酶亲和素-生物素（SAB）双抗体夹心酶联免疫分析（ELISA）方法,诊断急性心肌损伤性疾病。方法 以固相化单抗3F7捕捉样品中cTnT,生物素化3H12单抗为检测抗体,加入SA-HRP,显色。根据已知不同浓度标准cTnT显色后D(l)值的标准曲线,检测待测样品cTnT含量。结果 cTnT的最低检测值为0.15 ng/ml,批内变异系数为3.8%,批间变异系数为11.2%,回收率为98%。35例急性心肌损伤患者cTnT含量为(0.68±0.17) ng/ml,明显高于52例正常人对照组(0.20±0.03) ng/ml(P<0.01)。结论 本方法灵敏、特异、稳定,可用于临床急性心肌损伤疾病的诊断。     

人心肌肌钙蛋白T亚型的克隆及表达

目的 构建人心肌肌钙蛋白T(cTnT)亚型的重组载体。 方法 应用RT-PCR技术,从人胚胎心肌组织中扩增cTnT1及cTnT2基因,连接到T Easy vector载体上,筛选重组子。结果 成功地扩增出cTnT1（764 bp）及cTnT2(124)基因片段,经测序证实,构建pExSecI-cTnT1表达载体并获得表达。结论 获得单一亚型的cTnT1及cTnT2基因片段,为研究心力衰竭时的胚胎型基因重构与发病关系提供了依据。     

人心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :制备抗人心肌肌钙蛋白 I(c Tn I)单克隆抗体 (c Tn I Mc Ab)并进行初步鉴定。 方法 :从健康意外死亡者的心肌中提取、纯化人 c Tn I,以其为抗原 ,免疫 BAL B/ c小鼠后 ,取其脾淋巴细胞与小鼠 Sp2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,反复筛选及克隆 ,得到能稳定分泌 c Tn I Mc Ab的杂交瘤细胞株。初步鉴定 c Tn I Mc Ab。结果 :经间接 EL l SA法筛选 ,3次克隆化后获得 5株能稳定分泌 c Tn I Mc Ab的杂交瘤细胞 (3A7、3A 11、3D2、3F10和 1H9) ,5株单抗免疫球蛋白亚类鉴定均为 Ig G2 a类。染色体数目 92～ 110条。 5株单克隆抗体腹水按 1∶ 10 0稀释 ,与 L DH、CK、CK- MB、AST和人心肌肌钙蛋白 T(c Tn T)行交叉反应为阴性。 5株 c Tn I Mc Ab腹水效价为 3.2× 10 - 6 ～ 1.6× 10 - 7。c Tn I Mc Ab相加试验表明 ,3D2、3F10与 3A7、3A11、1H9能识别不同的抗原表位。 结论 :本实验成功制备了具有较高活性的 c Tn I Mc Ab,具有良好应用开发价值。     

大鼠甲状腺功能状态对心肌细胞凋亡的影响

目的　了解甲状腺功能变化对心肌细胞凋亡的影响 ,探讨甲状腺功能异常影响心肌细胞凋亡的机制 .方法　建立实验性甲亢与甲减大鼠模型 (n =2 4) ,检测血清T3 ,T4及促甲状腺激素 (TSH) ,利用末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL)检测心肌细胞凋亡 .结果　正常大鼠及甲亢大鼠未出现心肌细胞凋亡 .甲减大鼠均出现心肌细胞凋亡 ,凋亡程度左心室 >右心室 ,并与血清T3 ,T4 呈负相关 (r =- 0 .834 ,P <0 .0 0 1) ,与TSH呈正相关 (r =0 .941,P <0 .0 0 1) .结论　心肌细胞凋亡与甲状腺功能状态密切相关 ,血液中甲状腺激素参与调控心肌细胞凋亡     

心血管疾病细胞凋亡研究的进展

细胞凋亡 ( apoptosis) ,又称为细胞程序死亡( progremmed cell death) ,是一种细胞死亡的特殊形式 ,指在一定生理或病理条件下 ,有核细胞在复杂的调控机制下自身启动细胞内特定的程序 ,激活内源性 DNA内切酶 ,导致细胞自然死亡。此现象 1 0 0多年前 Carl Vogtp[1] 就已发现 ,1 972年Kerr等 [2 ] 首次命名为“apoptosis”,并初步分析其机制。在近几年的研究已证实细胞凋亡现象普遍存在心血管系统的许多生理及病理变化中 ,相信随着研究的进一步深入 ,人们会越来越认识到细胞凋亡与心血管疾病关系的重要性。1　心脏与细胞凋亡1 .1　细胞凋…     

肾上腺髓质素生物学特性研究进展

1993年日本学者 Kitamura[1 ] 等在人的嗜铬细胞瘤中分离一种新的生物活性肽 ,命名为肾上腺髓质素 ( Adrenomedullin,AM)。短短数年 ,对 AM生物学特性、生物学效应及与疾病的关系进行了广泛的研究。1　 AM生物学特性1 .1　结构特点　人 AM前体有 1 85个氨基酸残基 ,其 N端有2 1个氨基酸残基组成的信号肽。AM前体中第 95位至 1 46位氨基酸残基水解后形成 AM。AM由 5 2个氨基酸组成 ,第 1 6位和第 1 2位为半胱氨酸 ,形成一个二硫键组成的环状结构 [2 ] 。1 .2　基因特点　人 AM基因位于第 1 1号染色体 ,其基因组DNA包含有 4个外显子…