高效液相色谱质谱串联法检测厄洛替尼血浆浓度

目的建立高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定人血浆中厄洛替尼的浓度。方法 血浆样品经甲醇蛋白沉淀后,以甲醇-(0.1%甲酸+5mmol.L-1 NH4Ac)(60∶40,v/v)为流动相,采用Ultimate XB-C18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱进行分离,流速为0.9mL·min-1,通过电喷雾离子化串联质谱,以多反应监测(MRM)方式进行检测。结果厄洛替尼的线性范围为1～2 000ng·mL-1,平均方法回收率在103.5%～109.0%,日内和日间变异均<15%。结论本法简单、快速、灵敏、重现性好,成功应用于厄洛替尼的血药浓度监测。     

来氟米特对实验性兔急性心肌梗死的治疗作用

目的:评价来氟米特对急性心肌梗死(AMI)的治疗作用及其机制,为冠心病防治寻找新药物提供实验依据。方法:将体重1.5～2.5kg的成年兔36只随机分为对照组(A组),来氟米特组(B组)及普伐他汀组(C组),建立AMI的模型并给予相应的干预,作术后6h血液学观察,4d及4周时分别作血液、血清、血流动力学、大体形态测量及组织学的观察。结果:B、C组与A组比较,6h﹑4d及4周时WBC明显下降(P<0.05),一氧化氮(NO)术后4d及4周时3组无明显差异(P>0.05),丙二醛、心房钠尿肽、左室功能测定值、左室舒张末压B、C组均明显下降(P<0.05)。术后4d时B、C组梗死面积明显下降(P<0.05),4周时瘢痕面积明显下降,瘢痕厚度较A组略薄(P<0.05)。组织学检查显示梗死区术后4d时A组WBC浸润程度大,坏死心肌结构消失,B、C组梗死区中浸润程度显著减轻,残存少量坏死心肌结构及一定存活心肌组织。结论:AMI使用来氟米特后,兔死亡减少,心功能改善,WBC、梗死及修复后的瘢痕面积减小,仅瘢痕厚度略变薄,提示来氟米特治疗AMI可能具有一定的疗效。     

腺病毒表达载体对骨髓间充质干细胞分化能力的影响

目的 研究腺病毒感染骨髓间充质干细胞(MSC)对MSC分化潜能的影响.方法 利用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒感染传至3代的人MSC,分别在感染后第2、4、8和16天收集细胞,提取总RNA,利用RT-PCR检测感染前后MSC中内胚层标志基因CYP51、中胚层标志基因SM22α、外胚层标志基因槽蛋白(nestin)、多分化潜能标志基因OCT4和可变剪切因子基因nPTB的表达.在腺病毒感染MSC 7 d后,利用成脂肪诱导剂继续诱导培养14 d,用油红O染色观察MSC向脂肪细胞分化情况.结果 RT-PCR检测显示,MSC中CYP51、SM22α、nestin、OCT4和nPTB在腺病毒感染后2、4、8和16 d时仍有表达.腺病毒感染7 d后的MSC仍可向脂肪细胞分化,且分化效率同正常MSC一致.结论 腺病毒载体感染MSC后,不会影响MSC的分化能力,可以作为MSC诱导分化机制研究的基因表达载体.     

TNF-影响P-糖蛋白和利培酮吸收的机制研究

 摘要：[目的] 探讨肿瘤坏死因子-(TNF-)对脑毛细血管内皮细胞P-糖蛋白(P-gp)和利培酮吸收的影响机制。[方法] 以小鼠脑毛细血管内皮细胞株bEnd.3作为研究对象，细胞孵育重组TNF-，然后进行western blot检测c-jun氨基端激酶(JNK)磷酸化水平。bEnd.3细胞以SP600125预处理1h，并设DMSO对照组，两组孵育TNF-，以western blot检测P-gp表达水平。bEnd.3细胞孵育TNF-24h，并设对照组，然后两组培养基加入利培酮(2μg/L)再孵育24h，最后吸取细胞培养基上清，以高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)测定利培酮浓度。[结果] TNF-能激活 bEnd.3细胞JNK磷酸化。TNF-能上调P-gp的表达，但SP600125预处理能降低TNF-这一效应，经两因素方差分析，差异具有统计学意义。TNF-能增加利培酮在bEnd.3细胞培养基上清的浓度，差异具有统计学意义。[结论] JNK信号通路参与TNF-上调P-gp的表达过程，TNF-能抑制脑毛细血管内皮细胞吸收利培酮。     

LC-MS法测定人尿液中依非巴特的浓度

目的：建立测定人尿液中依非巴特浓度的方法。方法：尿液样品经蛋白沉淀后,采用液-质联用法进样测定,以甲醇-0.008mol·L-1甲酸铵水溶液（含0.1%甲酸）（35∶65）为流动相,AgilentZorbaxEclipseXDB-C18为色谱柱进行分离;采用电喷雾电离源,以多反应监测（MRM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子对依非巴特为m/z832.6→m/z646.4,内标为m/z931.6→m/z745.6。结果：依非巴特尿药浓度在5.0～5000.0ng·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9996）,最低定量限（LLOQ）为5.0ng·mL-1;日内和日间RSD均〈7%,方法回收率为99.4%～103.1%,绝对回收率≥93%。结论：本方法选择性强、灵敏度高、重现性好,能快速、准确测定人尿液中依非巴特的浓度,并且成功用于依非巴特尿药排泄的研究。     

人微小RNA-133a(miR-133a)重组腺病毒的构建和鉴定

目的:构建人miR-133a重组腺病毒,研究其在人骨髓间充质干细胞(hMSCs)中的表达。方法:从人基因组DNA中扩增包含miR-133a的PCR产物,并定向插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV。将经pmeⅠ线性化的重组穿梭载体与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大肠杆菌BJ5183,通过同源重组获得重组腺病毒质粒rAd-mir-133a。将rAd-mir-133a在人胚肾293细胞(HEK293)中包装并扩增出miR-133a的重组腺病毒。将重组腺病毒感染hMSCs,利用RT-PCR和实时定量PCR分别检测初级miR-133a和成熟miR-133a的表达。结果:限制性内切酶分析和DNA测序结果显示,重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-miR-133a构建正确。在HEK293细胞中成功包装并扩增出重组腺病毒rAd-miR-133a。rAd-miR-133a感染的hMSCs中初级miR-133a转录子和成熟miR-133a表达显著增强。结论:成功构建了人miR-133a重组腺病毒,并在hMSCs中高效表达出miR-133a,为进行miR-133a的功能研究创造条件。     

香连丸中黄连的显微定量测定

应用显微定量法对香连丸中黄连的含量进行了研究，提出了黄连的显微定量方法。     

十四元环大环内酯类抗生素薄层鉴别方法研究

大环内酯类抗生素具有临床应用多,抗菌谱广,疗效好的特点.是一种具有广阔发展前景的抗生素.常用的大环内酯类的抗生素主要是十四元环和十六元环.其中十四元环大环内酯类抗生素具有结构相近,无紫外吸收,特征性反应不明显的特点.以红霉素、琥乙红霉素、阿奇霉素、克拉霉素、罗红霉素为代表.这一类大环内酯类抗生素的鉴别方法已有报道.主要是颜色反应和薄层色谱鉴别[1～4].已有的薄层色谱鉴别法由于展开系统复杂,对环境要求高,难于在基层药品快速检验中推广应用.本文目的在于建立一种简单的薄层色谱系统,用于十四元环大环内酯类抗生素快速鉴别,降低检验成本,提高分析效能.