MEF2C介导microRNA-214发挥抑制心肌细胞肥大的作用

目的:研究微小RNA-214(mi R-214)对心肌细胞肥大的调控作用及其可能的作用靶基因。方法:建立血管紧张素Ⅱ(angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ)诱导的C57BL/6乳小鼠心室肌细胞肥大模型;双萤光素酶报告基因实验检测mi R-214与潜在靶基因MEF2C 3’端非翻译区(3’UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western blot法分别检测MEF2C及肥厚标志物的m RNA和蛋白表达水平。结果:心肌肥厚标志物ANP、ACTA1和β-MHC,以及mi R-214的表达在Ang-II诱导肥大的小鼠心肌细胞中显著增强;双萤光素酶报告基因实验提示mi R-214与MEF2C 3’UTR相互作用,证实mi R-214可在转录水平抑制MEF2C的表达,MEF2C蛋白水平在肥大的心肌细胞中显著上调;过表达mi R-214及沉默MEF2C均能一致性地抑制Ang-Ⅱ诱导的心肌细胞中肥大标志物的表达。结论:MEF2C是mi R-214的靶基因,并介导了mi R-214发挥抑制心肌细胞肥大的作用。     

L-抗坏血酸促进人胚胎干细胞向心肌细胞分化的研究

目的 用不同浓度的L-抗坏血酸（VitC）作为分化基础培养液中的诱导剂，观察其对人胚胎干细胞（hESC）分化为心肌细胞的影响，探寻一种成分明确、成本低廉且高效的诱导方法。方法 复苏hESC，使用干细胞培养液培养至细胞融合度90%后，分别用含不同浓度（0、10、20、30、40、50、60、70μmol/L）VitC的分化培养液对其进行诱导分化，在光学显微镜下观察分化过程。用实时定量聚合酶链式反应（real-time PCR）分别检测干细胞特异性标志物Nanog和性别决定因子同源盒2(Sox2)，心肌细胞特异性标志物心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心脏特异性同源盒转录因子（Nkx2.5）的表达。用免疫荧光检测Nanog、cTnT、Nkx2.5的蛋白表达变化。结果 在分化基础培养液中，低浓度VitC(10～30μmol/L)不能诱导h ESC向心肌分化，随着VitC浓度的增高，干细胞逐渐往心肌方向分化，心肌分化效率逐渐提高，Nanog和Sox2的表达量逐渐下降；VitC浓度为40μmol/L或50μmol/L组在第8天开始出现自发跳动细胞，且有cTnT和Nkx2.5阳性表达。realtime ...     

miR-199a-3p靶向Smad1促进小鼠心肌纤维化相关基因的表达

目的探讨微小RNA-199a-3p（miR-199a-3p）对心肌纤维化的调控作用及其作用靶基因。方法原代分离并体外培养成体 C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞;脂质体转染法将miR-199a-3p模拟物和Smad1 siRNA瞬时转染至小鼠心肌成纤维细胞;双荧光 素酶报告基因实验检测miR-199a-3p与潜在靶基因Smad1 3’端非翻译区（3’-UTR）的结合作用;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和 Western blot 法分别检测小鼠心肌成纤维细胞转染miR-199a-3p 后,Smad1 及纤维化相关基因表达。Western blot 检测转染 miR-199a-3p,Smad1 siRNA 后,小鼠心肌成纤维细胞中纤维化相关基因、Smad1 和Smad3 的激活水平。结果RT-qPCR 和 Western blot结果证实在心肌成纤维细胞中过表达miR-199a-3p可以增强纤维化相关基因表达。双荧光素酶报告基因实验显示 miR-199a-3p 与Smad1 3’-UTR有结合作用。RT-qPCR和Western blot 结果证实miR-199a-3p 可在转录水平抑制Smad1 表达。 过表达miR-199a-3p和沉默Smad1均能一致性的通过激活Smad3通路而促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达。结论 miR-199a-3p通过靶向Smad1,从而激活Smad3通路来促进纤维化相关基因表达。     

肥大细胞脱颗粒稳定剂对SD大鼠心肌梗死后不良心室重构的影响

目的阐明心脏肥大细胞对心肌梗死后心功能的影响,探讨心脏肥大细胞在心肌梗死心室重构中的作用。方法结扎左前降支建立雄性SD大鼠心肌梗死模型。术前5天随机分成假手术组(n=6),心肌梗死模型组(n=8),肥大细胞稳定剂色甘酸钠治疗组(n=7)。术前3天及术后2周和4周行心脏超声检测心功能。术后4周称取左心室、右心室湿重/体重,HE染色观察病理组织学变化,甲苯胺蓝法检测肥大细胞密度。结果心肌梗死后第2周,与假手术组相比,模型组和治疗组左心室射血分数(LVEF)明显下降(P<0.01)。虽然模型组和治疗组心脏扩大,但三组之间差异无显著性。心肌梗死后第4周,与假手术组相比,模型组和治疗组左心室舒张期末容积(EDV)明显增大(P<0.05)。与模型组相比,治疗组EDV差异无显著性(P>0.05),但LVEF明显增加(P<0.01),左心室肥厚指数下降(P<0.05),心外膜(主要是梗死区)肥大细胞密度明显下降(P<0.01)。且肥大细胞密度与LVEF呈负相关(P<0.01),与左心室肥厚指数呈正相关(P<0.05)。结论肥大细胞直接参与了心肌梗死后的心室重构。肥大细胞脱颗粒的长期抑制明显提高心脏的心搏量,减轻左心室心肌肥厚,进而改善心功能。     

化学发光微粒子免疫法和酶放大免疫法检测环孢素A全血浓度的相关性分析

目的 通过化学发光微粒子免疫法（CMIA）和酶放大免疫法（EMIT）检测环孢素A全血浓度,评价2种方法检测结果的准确性和相关性。方法 CMIA和EMIT检测低、中、高3个全血免疫抑制剂质控物,进行准确度和批内、批间精密度分析;已知浓度的环孢素A（49.5,155.2,395.8,500.0,995.0,1 390.1 ng·mL^-1）加入到不含环孢素A全血样本中,检测后计算结果回收率;测定100份环孢素A患者全血样本,测定值用Deming法进行线性回归分析和Bland-Altman法计算偏倚。结果 CMIA低、中、高3个全血免疫抑制剂质控物准确度相对误差分别为5.8%,5.2%,9.1%,其批内和批间的变异系数分别为7.4%,6.9%,8.6%和10.1%,11.3%,8.7%,CMIA回收率分别为91%,95%,103%,102%,102%,104%;EMIT低、中、高3个全血免疫抑制剂质控物的相对误差分别为2.8%,2.3%,4.3%,其批内和批间的变异系数分别11.2%,5.9%,5.7%和11.3%,9.2%,8.3%,EMIT回收率分别为90%,92%,97%,98%,99%,102%;CMIA和EMIT平均差异偏倚21.7 ng·mL^-1（95% CI：-125.1~168.4 ng·mL^-1）,EMIT测定值/CMIA测定值平均为0.951（95% CI：0.56~1.34）,EMIT测定结果平均低于CMIA 5%左右。结论 CMIA和EMIT检测环孢素A全血浓度符合免疫分析精密度的要求,2种方法的检测结果相关性好,临床合理调整用药剂量时应考虑检测方法类型不同造成的影响。     

MicroRNA-34a靶向SIRT1参与阿霉素诱导的心肌细胞凋亡

目的:研究微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)在阿霉素诱导的心肌细胞凋亡中的作用及其作用靶基因。方法:建立阿霉素(doxorubicin,Dox)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡模型;TUNEL染色观察H9c2细胞凋亡;双萤光素酶报告实验检测miR-34a与潜在靶基因沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR检测miR-34a和SIRT1 mRNA表达水平,Western blot检测SIRT1和凋亡相关蛋白表达水平。结果:阿霉素处理H9c2细胞之后,细胞发生凋亡,miR-34a的表达显著增强;双萤光素酶报告实验提示miR-34a与SIRT1 3'UTR可相互作用,并证实miR-34a可在转录后水平抑制SIRT1的表达,SIRT1蛋白水平在阿霉素处理的心肌细胞中显著下调;过表达miR-34a及沉默SIRT1均能一致性抑制Bcl-2表达,促进Bax和p66shc的表达,而过表达SIRT1能有效抑制阿霉素诱导的H9c2细胞凋亡。结论:SIRT1是miR-34a的靶基因,并介导了miR-34a在阿霉素诱导的心肌细胞凋亡中的作用。     

大蒜素对大鼠离体肾内动脉血管张力的影响

目的观察大蒜素（Allicin）对离体肾内动脉经血管收缩剂预收缩张力的影响,探讨其对微血管的作用机制。方法显微操作下取SD大鼠肾内动脉,制备成1.8～2.0 mm长的血管条,用两根不锈钢丝穿过血管腔,固定于微血管测定仪的浴槽内,置于37℃通有混合气体（95%O₂+5%CO₂）的生理盐溶液中。平衡1小时后,分别给予受体依赖性血管收缩剂苯肾上腺素（phenylephrine,PE）1μmol·L^-1、5-羟色胺（5-hydroxy tryptamine,5-HT）2μmol·L^-1、血栓素A2类似物U46619 100 nmol·L^-1和非受体依赖性血管收缩剂60mmol·L^-1 KCL预收缩血管,采用累积给药法加入大蒜素,观察不同浓度的大蒜素对血管张力的影响。结果大蒜素对PE、5-HT、U46619预收缩内皮完整的血管环,均呈浓度依赖性的舒张血管作用;对PE预收缩用一氧化氮合酶抑制剂L-NAME(100 mmol·L^-1)孵育30 min保留内皮的血管环以及采用机械法去除内皮的血管环,均呈浓度依赖性的舒张血管作用,与内皮完整组无比较统计学差异;对KCL预收缩内皮完整的血管环,各浓度的大蒜素均无明显的舒张血管作用。结论大蒜素对PE、5-HT、U46619预收缩的血管环具有浓度依赖性舒张作用,对KCL预收缩的血管环无舒张作用。提示其舒张血管的作用与受体途经有关,与L型钙通道途经无关,并且对PE预收缩血管的舒张作用不依赖于内皮功能的完整性。     

用三七总皂苷与卡维地洛治疗AMI后大鼠改善心功能作用的疗效比较与评价

目的研究三七总皂苷与卡维地洛对心肌梗死后大鼠左室心功能改善作用的疗效并比较评价。方法手术法结扎左冠状动脉前降支建立SD大鼠AMI模型36只,将模型鼠随机分为心梗对照组（AMI组）,三七总皂苷治疗组(PNS组,80 mg·kg^-1·d^-1)和卡维地洛治疗组(CARV组,6 mg·kg^-1·d^-1),每组12只;另设假结扎组（Sh组,12只）。术后24小时开始灌胃给药,4周后对各组大鼠进行超声心动图心功能和血浆脑钠肽（NT-proBNP）浓度检测。结果 （1）与Sh组比较,AMI组左室射血分数（EF）和左室收缩百分率（FS）、室间隔舒张、收缩末期厚度（IVSd、IVSs）与左室前壁收缩末期厚度（LVAWDs）均明显降低（P<0.01）,左室舒张、收缩末期内径（LVIDd、LVIDs）显著增加,且左室后壁收缩末期厚度（LVPWDs）明显增加（P<0.05）。而二尖瓣血流E/A比值下降明显;心肌运动应变率（Radial Strain Rate）减小,达峰时间（TPK,ms）明显延长;NT-proBNP浓度显著增高（P<0.01）。（2）与AMI组比较,PNS组和CARV组的EF、FS、IVSd、IVSs与LVAWDs明显增加,而LVIDd、LVIDs和LVPWDs明显降低（P<0.01）;且心肌运动应变率明显增加,达峰时间明显缩短;NT-proBNP浓度明显降低。（3）PNS组与CARV组比较,PNS组的EF、FS和LVAWDs增加显著,LVIDd、LVIDs减小明显;而IVSd、IVSs、和LVPWDs无明显差异（P>0.05）。并且,PNS组的二尖瓣血流E峰、A峰和E峰下降速率均明显增大（P<0.05）,而E/A比值和心肌应变率、达峰时间与NTproBNP浓度两组无明显差异。结论心肌梗死后大鼠的左心室收缩和舒张功能异常严重;用三七总皂苷和卡维地洛治疗4周后均能明显改善其心功能,防止心衰;但PNS在提高EF、LVAWDs和二尖瓣血流方面更优于卡维地洛。     

Drp1在高糖诱导的大鼠心肌细胞肥大中的作用研究

目的:探讨发动蛋白相关蛋白1(Drp1)在高糖诱导的心肌细胞肥大模型中的表达及其作用机制。方法:原代乳大鼠心肌细胞培养,用高糖诱导建立心肌细胞损伤模型,将细胞分为对照组、高渗透压组、DMSO组、高糖组和高糖+线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1)组。用麦胚凝集素荧光染色检测单个心肌细胞表面积;用线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒(JC-1)检测心肌细胞MMP水平;Western blot检测心肌细胞肥大标志物心房钠尿肽(ANP)及Drp1和Drp1在Ser616/Ser637位点的磷酸化蛋白[p-Drp1(Ser616/Ser637)]的蛋白水平。结果:与对照组相比,高渗透压组各检测结果均无显著差异(P>0.05)。与对照组和高渗透压组相比,高糖组心肌细胞的表面积均显著增大(P<0.01),MMP显著降低(P<0.01),而Drp1总蛋白表达无显著变化(P>0.05);心肌细胞ANP表达显著增加(P<0.01),p-Drp1(Ser616)水平显著升高(P<0.05),而p-Drp1(Ser637)水平显著降低(P<0.05)。与高糖组相比,高糖+Mdivi-1组ANP和p-Drp1(Ser616)蛋白水平显著降低(P<0.05),而p-Drp1(Ser637)的水平显著升高(P<0.05)。结论:高糖诱导心肌细胞肥大的机制,与Drp1在Ser616位点磷酸化水平升高、Ser637位点磷酸化水平降低导致的线粒体分裂增加有关。