沉默RRM1可逆转乳腺癌细胞MCF-7/R对紫杉醇的耐药性

目的阐明沉默核苷酸还原酶M1亚基（RRM1）对乳腺癌耐药细胞MCF-7/R逆转耐药的作用。方法通过高浓度紫杉醇诱 导耐药株MCF-7/R;运用Kaplan-Meier Plotter绘制RRM1基因的生存曲线;通过siRNA沉默MCF-7/R细胞中RRM1基因表达, 并用Western blot 和qRT-PCR方法检测蛋白和基因水平的表达,筛选出高效特异的si-RRM1 序列;将该si-RRM1 序列转染 MCF-7/R细胞,筛选得到能稳定抑制RRM1基因表达的细胞株MCF-7/R/siRNA;四甲基偶氮唑盐（MTT）法和5-乙炔基-2’脱氧 尿嘧啶核苷（EdU）染色法检测RRM1沉默后MCF-7/R细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡,并观察周期、凋 亡相关蛋白的变化;构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察沉默RRM1后给予紫杉醇治疗对裸鼠体内抑瘤效果的影响。结果生存曲 线分析显示RRM1基因表达与乳腺癌患者的生存率呈负相关（P=0.000）;MCF-7/R细胞中证实RRM1蛋白和mRNA表达水平 较MCF-7细胞均显著升高（P<0.01）;si-RRM1序列筛选中,转染si-RRM1-04组细胞的RRM1蛋白和mRNA表达量降低最为显 著（P<0.001）;沉默RRM1后,MCF-7/R细胞对紫杉醇的敏感性显著增加,细胞晚期凋亡比例明显升高（P<0.001）,同时降低Akt 蛋白的磷酸化并抑制凋亡蛋白Bcl-2 的表达,促进p53 蛋白表达水平的增加（P<0.001）;裸鼠实验显示,与si-NC组相比,沉默 RRM1后给予紫杉醇治疗可显著抑制裸鼠体内肿瘤的生长（P<0.001）。结论沉默RRM1可通过诱导细胞凋亡增加提高MCF- 7/R细胞化疗敏感性,逆转乳腺癌紫杉醇化疗耐药。     

一种新的蝮蛇蛇毒磷脂酶A2同源物的分离纯化及其对Hep3B细胞基因谱的影响

目的从中国蝮蛇蛇毒中分离纯化出一种新的磷脂酶A2（PLA2）同源物，并研究其对Hep3B细胞基因谱的影响。方法用C18反相高效液相层析从蛇毒粗毒中分离纯化出PLA2同源物，并检测其纯度。用电喷雾质谱仪测定PLA2同源物分子量。体外培养Hep3B细胞，以139μg／mlPLA2同源物处理12h，应用基因芯片检测基因表达的改变。结果从蛇毒粗毒中分离纯化出一种新的PLA2同源物，纯度为97．2％，相对分子质量为13900。139μg／mlP乙嘘同源物处理Hep3B细胞12h后．19个基因表达下调，20个基因表达上调。表达改变的基因按功能分主要为以下6类：细胞周期控制和DAN损伤修复类、细胞调亡和衰老类信号转导分子和转录因子、细胞黏附类、血管生成类以及肿瘤细胞入侵和转移类。结论PLA2同源物作用于Hep3B细胞后，可影响细胞多种基因的表达，表达改变的基因主要参与肿瘤细胞的生长和转移。本研究为进一步深入研究PLA2对肿瘤细胞的作用机制提供线索和依据。     

一种新的蝮蛇蛇毒磷脂酶A2同源物的分离纯化及其氨基酸序列分析

采用C18反相高效液相色谱法从蛇毒粗毒中提取出一种新的PLA2同源物,其分子量为13900Da,N末端氨基酸序列分析结果为:HLLQFRKM IKKMTKK。通过GenBank的prote in-prote in BLAST软件进行同源性分析,结果表明,N端的15个氨基酸与已知其他蛇毒PLA2具有较高的同源性。     

蝮蛇中抗血小板聚集多肽的纯化及其特征研究

本实验采用高效液相C18层析柱,从华南地区产蝮蛇蛇毒中分离出一种分子量为23339.00Da的多肽SV-PP-2.SV-PP-2在体外能剂量依赖性地抑制ADP诱导的兔血小板聚集.在蝮蛇中尚未见有与SV-PP-2分子量相同并具有抑制血小板聚集作用的类似多肽的报道.     

西藏胡黄连醇提物对动脉粥样硬化小鼠主动脉PPARγ和PON1表达的影响

目的观察西藏胡黄连醇提物(ethanol extraction of Picrorhiza scrophulariiflora,EPS)对apoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的干预机制。方法将30只apoE~(-/-)小鼠随机分为对照组,模型组,EPS低、中、高剂量组和辛伐他汀组,每组5只。分别给予相应药物灌胃,对照组和模型组给予等体积的蒸馏水,连续灌胃12周。超声和病理切片观察各组主动脉中的斑块形成情况,试剂盒检测血清生化指标,蛋白免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应检测PPARγ和PON1的表达。结果与模型组比较,EPS和辛伐他汀组可以显著减少动脉粥样硬化斑块的形成,降低血清TC,LDL-C,TNF-α,IL-6,MCP-1,MDA水平(P0.05,P0.01,P0.001),显著升高GSH-Px,SOD活性(P0.01,P0.001),增加主动脉中PPARγ和PON1的表达显(P0.001)。结论西藏胡黄连具有改善动脉粥样硬化的功能,其机制可能与上调动脉壁中PPARγ和PON1的表达有关。     

SARS冠状病毒S蛋白S1区多肽与SARS病人血清的免疫反应

目的 测定根据计算机预测的SARS冠状病毒S蛋白S1区的抗原表位多肽与SARS病人血清的免疫反应,以寻找和确定SARS相关冠状病毒的中和抗原表位。方法 采用多肽合成仪合成SARS冠状病毒S蛋白S1区的多肽,并用ELISA方法检测合成的多肽与SARS病人血清的免疫反应。结果 合成的8个多肽与SARS病人血清免疫反应的光密度值是其与正常人血清免疫反应的光密度值的1.5～2.6倍。结论 合成的多肽与SARS病人血清的免疫反应较低,提示这些多肽是否为SARS冠状病毒的抗原表位还要进一步研究。     

《药理学》网络课程的实施与完善

结合实践，从完善《药理学》网络资源营造网络教学环境，创建以学生为中心的新型网络教学模式，通过交互式学习提高学生学习的自主性和利用网络视频和实验录像，培养综合型、实践型药学专业人才等方面介绍了《药理学》网络课程的特点和运行状况。     

盐酸洛拉曲克在小鼠体内的血药浓度和生物利用度测定

目的 建立测定盐酸洛拉曲克血浆药物浓度的高效液相色谱-质谱联用分析方法，研究盐酸洛拉曲克在小鼠体内的药代动力学和绝对生物利用度。 方法 C57小鼠静脉（50 mg/kg）或口服（200 mg/kg）给予盐酸洛拉曲克，在给药后不同时间取血，分离血浆，用高效液相色谱-质谱联用法测定血浆中盐酸洛拉曲克浓度。用DAS软件计算盐酸洛拉曲克的药代动力学参数，根据口服和静注的药时曲线下面积之比来计算绝对生物利用度。 结果 盐酸洛拉曲克在0.01～40 mg/L浓度范围内线性关系良好(r=0.9995，P<0.001)，样品在血浆中的回收率大于85％，日内和日间RSD小于15％。小鼠静注50 mg/kg盐酸洛拉曲克后药代动力学参数半衰期、药－时曲线下面积、分布系数、清除率分别为（3.02±0.017）h、（89.972±0.425）mg·L-1·h-1、（0.831±0.106）L/kg、（0.556±0.093）L·h-1·kg-1；小鼠口服200 mg/kg盐酸洛拉曲克后药代动力学参数半衰期、药－时曲线下面积、达峰时间、峰浓度分别为（5.046±0.191） h、（84.893±9.923） mg·L-1·h-1、（1.000±0.012） h、（18.000±0.014） mg/L。经计算盐酸洛拉曲克在小鼠体内的绝对生物利用度为23.58％。 结论 用高效液相色谱-质谱联用方法测定的盐酸洛拉曲克在小鼠体内的绝对生物利用度为该药的口服制剂的研发提供了实验依据。     

药理教学方法体会

药理学是研究药物与机体之间相互作用的一门科学。其任务主要是帮助医药卫生工作者合理正确地用药，发挥药物的治疗效果，防治不良反应；此外，药理学为寻找新药提供了有利的线索，有利于深入了解机体生理生化过程的本质。药理学既是基础医学与临床医学之间的桥梁，也是药学与医学之间的桥梁科学，但是在药理学的实践教学中，由于药物种类繁多，内容杂乱无章，且药理学与生理、生化、免疫等医学基础理论学科联系紧密，学生往往难学难记。     

药物分析实验教学思考

实验教学是锻炼学生动手能力的关键环节,也是培养学生积极动脑,发扬创新精神的重要途径.根据近几年的教学经验,为提高教学质量,从改进课堂教学,加强基础操作的训练,调整化学分析实验与仪器分析实验的比例,规范书写实验报告,改进考核方式等几个方面入手,对药物分析实验课进行了一定的研究和探索,思考实验教学在药物分析中对培养创新性人才的重要性,提出了药物分析实验教学的改革对策.