注射用法罗培南的体内抗菌活性

目的评价注射用法罗培南的体内抗菌活性。方法建立小鼠腹膜炎模型,比较注射用法罗培南及厄他培南对产酶的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌、耐万古霉素的粪肠球菌感染小鼠的体内抗菌活性。结果注射用法罗培南对产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌有较强的体内和体外抗菌活性,其ED_(50)分别为10.96、9.12和7.07 mg·kg~(-1),厄他培南则为14.84、12.58和10.16 mg·kg~(-1)。法罗培南对耐万古霉素的粪肠球菌体外敏感,而厄他培南显示耐药。法罗培南对耐万古霉素的粪肠球菌的ED_(50)比厄他培南低66.77%,分别为10.75和32.35 mg·kg~(-1)。结论注射用法罗培南和厄他培南对产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌有较强的体内和体外抗菌活性,两者作用相似。法罗培南对耐万古霉素的粪肠球菌感染可能有治疗作用,效果优于厄他培南。     

sprE基因敲除粪肠球菌突变株的构建和功能的初步研究

目的构建丝氨酸蛋白酶同源基因(serine protease gene,sprE)敲除粪肠球菌突变株,来研究sprE基因的功能。方法用pTX4577质粒构建粪肠球菌sprE基因重组自杀质粒pCQ001,通过体内同源重组,筛选获得sprE基因的突变株,体外研究不同温度和氧化条件对突变株生长能力的影响。结果经同源重组,利用卡那霉素抗性筛选,PCR、脉冲场电泳和southern blot进行鉴定获得基因突变株#sprE,突变株在40℃的生长能力以及在氧化条件下的存活率均明显降低。结论sprE基因敲除粪肠球菌突变株#sprE构建成功,为进一步研究其功能打下基础。     

结核分枝杆菌特异性蛋白抗原研究进展及其应用策略探讨

结核病是当今世界主要的致死疾病之一,早期诊断是控制结核病的关键,血清学实验是结核诊断的重要依据。随着科学技术的进步,新的结核诊断用抗原不断被发现。本文概述了38ku蛋白、Ag85复合体、MPT64蛋白、ESAT-6蛋白、CFP-10蛋白、16ku蛋白、MTB81、MTB84和U1蛋白等9种结核分枝杆菌重要抗原的研究进展,并对其应用策略进行了探讨。     

大理地区结核分枝杆菌MIRU-VNTR位点的多态性分析

目的了解大理地区结核分枝杆菌基因组中的数目可变串联重复序列（variable number tandem repeat,VNTR）即MIRU（mycobacterium interspersed repetitive unit）基因多态性,探讨MIRU-VNTR位点多态性的应用价值。方法采用PCR和琼脂糖凝胶电泳检测大理地区临床分离的60株结核分枝杆菌7个VNTR位点,采用MIRU-VNTR技术进行分型,利用Hunter-Gaston指数（HGI）对各MIRU进行分辨力评价,并应用Quantity one软件和BioNumerics6.6软件进行数字化和聚类分析。结果 60株结核分枝杆菌分为5个基因群（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ群）52个基因型。Ⅰ群占56.77%,含有29个基因型;Ⅱ群占25.00%,含有13个基因型;Ⅲ群占8.33%,含有5个基因型;Ⅳ群占6.67%,含有3个基因型;Ⅴ群占3.33%,含有2个基因型。7位点组合总分辨力为0.900,最高ETR-E位点0.735,最低ETR-C位点0.455。结论大理地区分离株结核分枝杆菌存在基因多态性,7位点MIRU-VNTR分型简便快速,分辨力高,适合用于大理地区结核分枝杆菌的基因分型检测。     

以医学微生物学及免疫学系列课程建设为载体的师资队伍建设

建设高素质及优秀的教学团队,是培养高水平创新型人才的保障。在实施医学微生物学及免疫学系列课程申报与建设的实践中,使教师队伍得到锻炼和成长,迅速提高业务素质和水平,成为优秀的教学团队,为医药学人才培养做出了积极的贡献。     

幽门螺杆菌细胞空泡毒素基因毒性片段的克隆与表达

目的：通过基因于程技术获得具有良好抗原性的重组细胞空泡毒素毒性亚单位蛋白。方法：利用PCR从幽门螺杆菌(Hp)空泡毒素基因中扩增毒性片段Ⅴ，克隆及序列分析后在大肠杆菌中高效表达，用免疫印迹法(Western blotting)检测其抗原性。结果：序列分析所得片段完整，与标准株AF361700比较有1．5％的bp及一个氨基酸发生变异。与文献报道的中国菌株相比有高度的同源性。SDS-PAGE显示表达产物相对分子量为27000，表达量为30％以上，Western blotting显示该蛋白可被HP全菌抗血清所识别。结论：基因重组Hp细胞空泡毒素毒性蛋白具有良好的抗原性，可用于制备Hp感染的诊断试剂与疫苗。     

ICU肠球菌属esp基因分布及对万古霉素耐药的相关性研究

目的 了解医院重症监护病房(ICU)来源的肠球菌属的种类、esp基因的分布及其对万古霉素耐药的相关性.方法 用法国生物梅里埃公司全自动细菌分析仪VITEK-32进行肠球菌属鉴定,菌落杂交法检测esp基因的分布,微量稀释法测定细菌对万古霉素和替考拉宁的MIC.结果 113株肠球菌属中以粪肠球菌和屎肠球菌为主,共94株占总数的83.2％,其中粪肠球菌63株占55.8％,屎肠球菌31株占27.4％,esp基因阳性72株占76.6％,esp基因阳性者对万古霉素和替考拉宁的耐药率明显高于esp基因阴性者.结论 ICU感染肠球菌属以粪肠球菌和屎肠球菌为主,而且esp基因阳性较高,与肠球菌属耐万古霉素密切相关,值得重视.     

AGT基因M235T多态性与大理白族原发性高血压相关性研究

目的:探讨AGT基因M235T多态性与大理白族原发性高血压(EH)人群的相关性.方法:根据入选标准收集大理白族EH患者141例(EH组),正常血压者134例(正常对照组).采用基因突变聚合酶链反应(MS-PCR)法扩增2组人群AGT基因M235T多态的各基因型(TT、MT和MM基因型),基因测序予以验证,然后对2组的基因型和等位基因频率分布进行统计学分析.结果:EH组与正常对照组比较,TT、MT、MM基因型频率和T、M等位基因频率之间差异均无统计学意义.EH组男性的TT、MT基因型频率和T等位基因频率分布与正常对照组男性比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:AGT基因M235T多态性可能与大理白族人群EH的发病无密切关联.     

福氏志贺菌ipaB基因的克隆表达及免疫原性研究

构建福氏志贺菌ipaB基因的原核表达载体,诱导表达并纯化.探讨重组蛋白IpaB经口服免疫小鼠后,机体产生的免疫应答.方法:用PCR扩增ipaB目的基因,克隆至pQE-30表达载体中,转化宿主菌DH5α,经IPTG诱导表达蛋白IpaB;Western blot分析其抗原性.纯化后灌胃免疫小鼠,ELISA法检测血清IgG、IgA、小肠黏液sIgA和粪便sIgA.结果:ipaB基因全长1 743 bp.经SDS-PAGE分析相对分子量(Mr)约为64 000.Western blot分析能与福氏志贺菌全菌抗血清反应.免疫小鼠后,血清IgA、IgG,粪sIgA,肠黏液sIgA明显高于对照组(P＜0.01).结论:成功构建了ipaB基因的原核表达载体并能高效表达,纯化后口服免疫可有效诱导黏膜免疫应答,产生高水平的sIgA,发挥局部黏膜免疫作用,为进一步研究细菌性痢疾的疫苗和发病机制奠定基础.     

幽门螺杆菌重组Bb-hpaA-vacA疫苗的构建

目的 构建幽门螺杆菌( Hp) 重组双歧杆菌( Bb) Bb-hpaA-vacA疫苗。方法 通过 PCR 分别扩增hpaA和vacA抗原编码基因, 然后采用gene SOEing 剪接hpaA和vacA, 得到hpaA-vacA融合基因;将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT, 构建重组质粒 pGEX-hpaA-vacA,电穿孔法将该质粒导入Bb, 构建幽门螺杆菌重组hpaA-vacA 疫苗。结果 PCR成功扩增出分子量约为1500 bp的 hpaA-vacA融合基因,双酶切证实hpaA-vacA融合基因成功插入pGEX-1λT中,并成功转化入双歧杆菌,构建rBb-hpaA-vacA疫苗。结论 成功构建螺杆菌rBb-hpaA-vacA疫苗,为该疫苗的进一步研究奠定了基础。