磷脂酶C-zeta在卵子激活中的作用及研究进展

磷脂酶C-zeta(PLC-ζ)是特异分布于睾丸组织的一种磷脂酶C,在哺乳动物的卵母细胞激活中起着极其重要的作用;其编码基因、蛋白分子和生化性质的改变与卵子激活缺陷、不育症密切相关。本文综述了PLC-ζ的结构和功能及其在卵子激活中的作用以及与男性不育的关联等内容,并对其最近的研究进行了简要概述。     

IVF治疗中卵丘颗粒细胞密度对胚胎学结局的影响

目的 研究体外受精(IVF)时卵丘卵母细胞复合物(cumulus-oocyte complex, COC)上的卵丘颗粒细胞密度对胚胎学结局的影响。方法 回顾性分析710个IVF周期,其中卵丘颗粒细胞部分切除周期(研究组)355个及未处理对照周期355个。研究通过比较两组中患者的受精率、卵裂率、优质胚胎率、卵子利用率、临床妊娠率和活产率等多种指标来探讨IVF治疗时卵丘颗粒细胞对胚胎学和移植结局的影响;随后又按照授精皿中的卵子数将患者分为低密度(1~5个)、中密度(6~10个)和高密度(11~15个)3组,通过与对照组患者比较,进一步明确不同COC授精密度情况下颗粒细胞密度对受精和胚胎发育的影响。结果 研究组患者的受精率、正常受精率、有效成囊率和卵子利用率均显著高于对照组(P<0.01),而其异常受精率则显著低于对照组(P<0.01)。低、中及高不同授精密度下,当授精密度≤5个卵子时,研究组和对照组的受精率、正常受精率、异常受精率、有效成囊率和卵子利用率等比较,差异均无统计学意义(P>0.05);当授精密度>5个时,研究组的正常受精率、有效成囊率和卵子利用率均显著高于对照组(P<0.05),异常受精率均显著低于对照组(P<0.05)。两组的临床妊娠率、种植率、活产率等比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 体外授精时,通过切除COC上的卵丘颗粒细胞以降低其密度,能够改善患者IVF治疗时的胚胎学结局。     

一种简易的促排卵周期挽救性卵子体外成熟培养技术

【目的】 探讨人类成熟卵丘细胞在未成熟卵母细胞体外成熟培养中的作用,并建立一种简易的实施技术&#65377;【方法】 在控制性促排卵周期有未成熟卵母细胞时,将同周期成熟卵丘复合体切出部分卵丘细胞,用1 mL注射器抽打分散细胞,贴壁培养&#65377;113个治疗周期中,298枚生发泡期卵母细胞经3种不同培养液(A&#65380;B&#65380;C)体外成熟培养(同一病人的生发泡期卵被随机分到某同一组中):第1组28个周期中73枚(A液):基础培养液+卵泡液;第2组40个周期中115枚(B液):A液 + 分散贴壁的卵丘细胞;第3组45个周期中110枚(C液):A液 + 分散贴壁的卵丘细胞 + 促卵泡生成激素 + 表皮生长因子&#65377;观察其成熟率&#65380;受精率及可用胚胎获得率等&#65377;【结果】 24 h成熟率:组间比较有显著性差异(A: 45.2%, B: 61.7%, C: 78.2%, P < 0.05); 25 ~ 48 h无显著意义&#65377;成熟卵的正常受精率在59% ~ 67%之间,组间比较无显著差异;与第1组(54.5%,11.0%)相比,第2组(83.3%,25.2%)&#65380;第3组(90.7%,37.3%)的卵裂率和挽救率均有显著性差异(P < 0.05),可用胚胎获得率组间比较依次呈现上升趋势(66.7%,82.9%,83.7%)&#65377; 【结论】 来自控制性促排卵周期的成熟卵丘细胞经简易吹打分散后贴壁培养,可能能协同卵泡液中或外加的生长因子,促进未成熟卵母细胞的体外成熟,而本研究技术简易有效,可用于挽救促排卵周期的未成熟卵&#65377;     

安宫黄体酮方案治疗低反应患者的体外受精疗效评估

目的探讨人绝经期促性腺激素(human menopausal gonadotropin,h MG)联合安宫黄体酮(medroxyprogesteron acetate,MPA)方案治疗卵巢低反应(poor ovarian response,POR)患者的疗效。方法回顾性分析助孕后仅有1个卵泡的517个体外受精(in vitro fertilization,IVF)周期,分为h MG联合MPA组(n=316)和自然周期组(n=201),比较两组患者临床结局指标。结果 h MG联合MPA组的获卵周期率(82.9%)和卵子双原核(2PN)周期率(55.4%)均显著高于自然周期组(74.6%,P=0.02;41.3%,P=0.00);获MII卵子周期率(73.7%)和优质胚胎周期率(39.9%)均略高于自然周期组(68.2%,P=0.17;33.8%,P=0.17)。所获胚胎的种植率、流产率和宫外孕率与自然周期组均相似(P0.05)。结论 h MG联合MPA方案治疗POR患者的效果优于自然周期,是安全有效的促排卵方案。     

平皿-微滴法玻璃化冷冻保存小鼠胚胎

目的 :使用平皿 微滴法玻璃化冷冻小鼠 8～ 12细胞胚胎 ,检验该方法对胚胎的冻存效果。方法 :胚胎在EG2 0 中平衡 3min ,EFS4 0 中平衡 1min ,将含有胚胎的小于 0 .5 μl的EFS4 0 微滴吹于 35mm平皿上并立即直接浸入液氮保存。结果 :解冻后胚胎回收率达到 98.1% ,透明带无破损 ,冷冻后存活率为 95 .2 %。冻融胚胎体外发育和体内发育能力与对照组胚胎比较差异无显著性 (84 .3%对 90 .1% ,12 .1%对 13.5 % ,P >0 .0 5 )。结论 :小鼠 8～ 12细胞胚胎可以用平皿 微滴法有效地进行玻璃化冻存。     

小鼠卵子胞膜在显微穿刺中存活的膜特性因素研究

目的:拟通过特定穿刺实验来分析小鼠卵子胞膜在显微穿刺中存活的膜特性因素。方法:采用尖口注射针及37℃恒温台的显微条件下,①单纯穿刺实验:即单纯对卵子穿刺不同时间长度(1 s或60 s)或不同深度(50μm和90μm)共4个组合组(每组n=20),比较膜凹陷的回复时间;②显微授精(ICSI)实验:延时组(n=91),在穿刺时延缓对小鼠卵子抽吸破膜的时间;加深组(n=140),改良显微持卵管,使呈喇叭形开口,可在穿刺持卵时将卵子部分吸入该开口内,以增加注射针穿刺小鼠卵子的深度;对照组(n=115),即相同于传统的人ICSI操作。结果:①穿刺时间更长或更深可显著延长膜凹陷的恢复时间;②与对照组相比,延缓对卵子的抽吸破膜时间使得小鼠卵存活率显著提高(22%vs 48%,P<0.01);而应用改良的新型持卵管后,小鼠卵存活率更加显著地提高(22%vs 82%,P<0.01),且其正常受精率>70%。结论:小鼠卵子胞膜并非易脆;在显微穿刺时小鼠卵子膜凹陷柔顺性随时间和深度增加而增加,从而延缓膜凹陷回复时间,有利卵子胞膜破口修复而存活。     

一种非Piezo依赖的高卵子存活率小鼠显微授精技术

目的对已建立的非Piezo依赖的小鼠显微授精技术作进一步改良,以获得更高的卵子存活率。方法将卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)技术中对卵子深吸持后直接深穿刺(一步法非Piezo-ICSI组)的步骤分成两步进行(两步法非Piezo-ICSI组):先浅吸持后浅穿刺,再进一步深吸持后深穿刺;另以孤雌激活发育的卵子作为卵子质量对照组。比较两步法非Piezo-ICSI组与一步法非Piezo-ICSI组卵子的存活率、原核出现率和卵裂率。结果两步法非Piezo-ICSI组的卵子存活率(92.2%)显著高于一步法非Piezo-ICSI组(83.7%)(P<0.01);而原核出现率和卵裂率与一步法非Piezo-ICSI组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论小鼠卵子胞膜在被新型持卵管深吸持时的变形造成了部分卵子胞膜变脆,两步法吸持穿刺在深吸持前进行了穿刺,避免了脆性敏感时的穿刺,有利于卵子存活。     

小剂量GnRH-a诱发后的促排卵方案在卵巢低储备患者高基础雌激素状态下的应用

目的探讨一种小剂量GnRH-a诱发后新的促排卵方案,在卵巢低储备(DOR)患者高基础雌激素(basal estrodial,B-E_2)状态下应用的可行性。方法回顾性分析2015年1月至2017年1月期间在上海市第九人民医院助孕的50例DOR患者所行的IVF/ICSI周期,采用自身对照。当B-E_2≥275.3pmol/L伴或不伴优势卵泡出现时,应用小剂量GnRH-a诱发后促排卵方案,并纳入实验组;当B-E_2275.3pmol/L且月经期无优势卵泡出现,应用常规治疗方案,并纳入对照组,同时依据采用方案的不同分为3个亚组:卵泡期对照组、黄体期对照组和自然周期对照组。观察不同组的临床结局。结果实验组、卵泡期对照组、黄体期对照组和自然周期对照组四组间卵子利用率、胚胎种植率和临床妊娠率无统计学差异(P0.05)。实验组、卵泡期对照组和黄体期对照组三组间可用胚胎数、周期取消率无统计学差异(P0.05);自然周期对照组冷冻胚胎总数低于实验组、卵泡期对照组和黄体期对照组[(0.2±0.1)vs.(1.8±1.7)vs.(1.5±1.3)vs.(1.0±0.3)],差异有显著性(P0.05);自然周期对照组周期取消率高于实验组、卵泡期对照组和黄体期对照组三组,差异有显著性(82.4%vs.24.0%vs.26.1%vs.47.4%,P0.05)。结论当DOR患者出现高基础雌激素状态时,除直接取消周期外,可尝试应用小剂量GnRH-a诱发后的卵巢促排卵方案,可达到与卵泡期促排卵、黄体期促排卵相类似的临床结局。为反复周期取消的DOR患者节约了治疗时间,提供了新的促排卵方法。     

降低hCG的剂量不影响控制性超促排卵中卵泡的最终成熟及随后冷冻胚胎移植的妊娠结局

目的:在卵巢中等反应和高反应患者中,比较2 000 IU、3 000 IU低剂量hCG与5 000 IU hCG在控制性超促排卵(COH)过程中诱导卵泡成熟及随后冷冻胚胎移植(FET)的妊娠结局。方法:回顾性分析2 166例接受IVF/ICSI治疗的患者的临床资料,根据hCG的剂量分为3组:2 000 IU(A组,n=722),3 000 IU(B组,n=722)和5 000 IU(C组,n=722),观察比较成熟卵母细胞的比例、受精率、临床妊娠率、累计妊娠率及卵巢过度刺激综合征(OHSS)的发生率等。结果:3组患者获得成熟卵母细胞比例(89.92%,91.40%,90.20%)和受精率(79.80%,80.07%,80.51%)均无统计学差异(P0.05)。A组hCG注射日E2水平、获成熟卵数及优质胚胎数均显著高于B组和C组。3组患者每次移植的临床妊娠率(45.95%,43.97%,44.25%)、继续妊娠率(43.17%,40.91%,42.53%)、种植率(30.74%,27.78%,29.86%)及每位患者的累计妊娠率(CPR)(58.31%,53.60%,54.85%)均无统计学差异。3组的OHSS发生率很低(0.00%,0.14%,0.28%)。结论:对于卵巢中等与高反应患者,2 000 IU hCG与5 000 IU hCG在诱导卵泡的成熟中发挥同样的效果,2 000 IU hCG不仅不影响妊娠结局,而且阻止了OHSS的发生。