矿物药青礞石对戊四唑点燃癫痫大鼠肠道菌群的影响

目的研究青礞石对戊四唑(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠肠道菌群的影响,从肠道微生态环境视角探讨青礞石治疗癫痫疾病可能的作用机制。方法以青礞石粉末为研究对象,用PTZ点燃法建立大鼠癫痫动物模型,实验分为对照组、模型组、卡马西平组和青礞石组(高剂量组为临床用量的20倍、低剂量组为临床用量的5倍)。给药4周后,取各组大鼠结肠内容物,通过16Sr RNA测序对各组大鼠肠道菌群的多样性进行分析,利用UPARSE、SPSS18.0等对结果进行生物信息学及统计学分析。结果α多样性分析可知,模型组大鼠肠道菌群的Chao 1、Ace丰富度指数与对照组相比没有显著性变化;与对照组、模型组相比,青礞石组尤其是高剂量组对细菌群落丰富度有显著影响(P0.05)。Shannon、Simpson群落多样性指数分析结果显示,模型组与对照组无显著性差异;青礞石组对群落多样性干预不明显。青礞石主要干预肠道菌群的丰富度、卡马西平主要干预肠道菌群的多样性。β多样性各组层级聚类均能较好地分开,其中青礞石高剂量组与低剂量组部分样本不能明显分开,2组样本可归为一类,对照组、模型组可归为一类,卡马西平组单独归为一类。3D-主成分分析(3D-principal component analysis,3D-PCA)、3D-主坐标分析(3D-principal co-ordinates analysis,3D-PCoA)结果显示,各组菌群结构轮廓均能明显分开,青礞石低剂量组介于对照组和模型组之间,菌群结构轮廓部分与模型组、对照组有重合交叉,且有偏向对照组的明显趋势。非度量多维尺度(nonmetric multidimensional scaling,NMDS)分析结果显示,对照组、模型组、青礞石组集中在一个区域,青礞石组与模型组、对照组有重合交叉,青礞石高剂量组、低剂量组对肠道菌群结构有相似的干预效果。物种组成门水平分析可知,各组大鼠的优势菌群主要有厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、变形菌门(Proteobacteria)和放线菌门(Actinobacteria),其中厚壁菌门占比最大,其次是拟杆菌门。模型组疣微菌门相对丰度较对照组显著增加(P0.01),模型组变形菌门的相对丰度最高;青礞石干预后疣微菌门相对丰度下降,变形菌门相对丰度有不同程度降低。属水平分析可知,与对照组相比,模型组中norank_f__Muribaculaceae(P0.05)、Akkermansia菌属(P0.01)相对丰度显著增加,乳杆菌属显著减少(P0.05);青礞石干预后可降低Akkermansia菌属、升高乳杆菌属Lactobacillus的相对丰度。另外,线性判别分析效应大小(linear discriminant analysis effect size,LEfSe)分析可知厚壁菌门的瘤胃球菌科(Ruminococcaceae)在模型组中显著富集,给予青礞石干预后,瘤胃球菌科相对丰度显著降低。结论青礞石对PZT点燃癫痫大鼠肠道菌群物种组成的丰富度、多样性具有明显的调节作用,可有效干预肠道微生态的重建。     

黄芪丹参水煎液抑制ISO诱导的大鼠心肌重构及其下调STIM1,TRPC1,CaN和NFATc3表达的机制

探讨黄芪丹参水煎液(HDD)对异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌重构抑制作用和对STIM1,TRPC1,Ca M,Ca N,NFATc3表达的影响。皮下注射ISO(2.5 mg·kg~(-1)·d~(-1),14 d)建立大鼠心肌重构模型,随机分为对照组、ISO模型组、HDD5(HDD 5 g·kg~(-1)·d~(-1)+ISO)组、HDD10(HDD 10 mg·kg~(-1)·d~(-1)+ISO)组。干预4周后,计算心脏质量指数(HW/BW)和左心室质量指数(LVW/BW);超声心动图观察心肌结构;HE染色观察心肌组织病理学结构变化;ELISA检测血清中BNP,Ca N和Ca M kinasesⅡ的水平;Western blot检测左心室组织STIM1,TRPC1,p-Ca N,p-NFATc3和NFATc3蛋白的表达。结果显示,ISO组大鼠HW/BW和LVW/BW均大于HDD5组和HDD10组(P0.05);超声心动图检查结果显示,HDD能够抑制ISO诱导的LVEDD,LVESD增加;ELISA检测显示,HDD能明显抑制ISO致心肌重构大鼠血清中BNP,Ca N和Ca M kinasesⅡ含量的升高(P0.01)。Western blot检测结果显示,ISO组大鼠心肌组织STIM1,TRPC1,p-Ca N,p-NFATc3和NFATc3表达升高,HDD给药后心肌组织内STIM1,TRPC1,p-Ca N,p-NFATc3和NFATc3的表达均降低(P0.05)。结果表明,黄芪丹参水煎液具有抑制ISO致大鼠心肌重构的作用,其机制与下调STIM1,TRPC1,Ca M kinasesⅡ,p-Ca N/Ca N和pNFATc3/NFATc3表达有关。     

粉尘螨变应原第3组分基因克隆及序列多态性分析

目的获得粉尘螨变应原第3组分(Der f 3)的编码基因并了解其序列多态性。方法根据GenBank已公布的Der f 3核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增获得其编码基因,插入pMD19-T载体,进行序列测定和多态性分析。结果获得粉尘螨变应原Der f 3编码基因为780bp。5株Der f 3基因cDNA克隆的核苷酸序列与参考序列(GenBankNo.AY 283291,GenBank No.D63858,GenBank No.EU312162,GenBank No.EU312163)相比,有19处cDNA序列发生突变,但有7处突变至少在3个cDNA克隆中序列一致;推导出氨基酸序列后进行比对,有11处氨基酸序列发生变化,有4处与上述7个位点相一致。结论获得了粉尘螨变应原Der f 3编码基因且证明其序列具有多态性,为进一步开展相关研究奠定了基础。     

泽及流浸膏外用安全性实验研究

目的:观察外用泽及流浸膏对动物皮肤和肌肉的毒性作用。方法:使用不同浓度(0.9g/m L、1.9g/m L、3.8g/m L)的泽及流浸膏对大鼠正常皮肤和破损皮肤进行急性毒性观察;使用1.9g/m L的泽及流浸膏对兔进行单次给药急性皮肤刺激和多次给药皮肤刺激观察;使用3.8g/m L的泽及流浸膏对豚鼠进行致敏性观察;使用不同浓度(1.9g/m L、3.8g/m L)的泽及流浸膏对兔进行肌肉内给药的刺激性观察。结果:泽及流浸膏经皮给药,在试验用药膏最高浓度为3.8g/m L,最大剂量为38.0g/kg,相当于人临床用量227倍时,对正常皮肤和破损皮肤大鼠均未见有明显急性毒性反应。泽及流浸膏单次给药和多次给药均对兔皮肤无明显刺激作用,对豚鼠无明显致敏作用,对兔肌肉无明显刺激作用。结论:泽及流浸膏外用无明显毒性作用。     

高山红景天的组织培养与快速繁殖

分别以高山红景天的幼茎和幼叶作为外植体,以MS为基本培养基,研究不同激素配比对高山红景天愈伤组织的诱导、继代、生根的影响,以建立其快速繁殖体系.结果表明,幼茎是最佳的外植体,愈伤组织诱导最佳的培养基为MS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.5 mg/L,诱导率达83.3％;不定芽诱导和增殖的最佳培养基为MS +6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L,诱导率和增殖率较高,达72％,且产生的不定芽数量较多,为3～4个;生根培养基以MS+IAA 0.5mg/L为最好,生根率100％,而且幼苗长势旺盛,能够满足高山红景天工厂化快速繁殖的要求.     

中药广防己与粉防己总提取物利尿效应及肾毒性比较研究

目的在药效剂量下,观察中药广防己总提取物利尿效应及其肾脏毒性出现程度,并与粉防己总提取物进行比较。方法采用大鼠代谢笼法,观察广防己和粉防己对正常大鼠尿量和尿液电解质的影响以及与肾功能相关指标的变化,比较两者利尿效应及产生肾毒性情况。结果广防己、粉防己各组在给药第3、5天广防己高、中剂量组在0-2 h时间段及24 h总尿量显著增加,与对照组比较差异有显著性（P〈0.05,P〈0.01）;广防己、粉防己各剂量组大鼠尿液中Na^＋、K^＋、Cl^-浓度及尿渗量（Uosm）与对照组比较未出现明显差异;广防己各剂量组尿素氮（BUN）均显著升高,中、低剂量组尿液肌酐（CR）升高,高剂量、中剂量组均能增加尿液中β2-微球蛋白的表达（P〈0.05）。结论广防己各剂量组单位时间段尿量及总尿量均略高于等剂量粉防己各组,但无统计学意义;相关指标显示广防己在药效剂量范围内就具有一定的肾毒性,且其肾毒性主要与近曲小管病变有关;粉防己在等剂量下未见明显肾脏毒性表现。     

当归补血汤主要吸收成分对GK大鼠肾保护作用研究

观察当归补血汤主要吸收成分对2型糖尿病模型GK大鼠肾保护作用及可能机制。方法 UPLC-MS/MS定性定量吸收入血活性成分(ABCs),确定ABCs组成,定量1g母方中ABCs浓度。GK大鼠按血糖随机分为模型组、当归补血汤组及吸收成分（ABCs）组,每组10只,给药组分别灌胃当归补血汤（4g/kg）、吸收入血的生物活性成分（剂量相当于母方含量,即咖啡酸5.36mg/kg,芒柄花素2.68mg/kg,毛蕊异黄酮2.56mg/kg,阿魏酸1.36mg/kg,黄芪甲苷0.45mg/kg,丁苯酞0.16mg/kg,蒿本内酯0.16mg/kg）,10只普通Wistar大鼠作为空白对照,给予等量生理盐水,每日1次,连续给药28d。观察指标:①肾脏系数、尿总蛋白和尿白蛋白;②肾组织氧化应激;③病理切片观察肾脏组织形态。结果 当归补血汤及ABCs均能够改善糖尿病大鼠的肾脏肥大,显著降低糖尿病模型大鼠尿总蛋白、尿白蛋白和肾脏MDA水平（P<0.05）,显著升高肾脏总SOD活力（P<0.05）,且对肾脏组织病理形态学有保护作用;与当归补血汤组比较,ABCs作用不如汤剂显著。结论 ABCs能够代表母方当归补血汤发挥对GK大鼠的肾保护作用,机制涉及氧化应激。母方中除ABCs外,其微量元素、氨基酸、多糖等其他成分也同时发挥着药效作用。     

雷公藤红素对胶原诱导性关节炎小鼠的免疫作用研究

目的研究雷公藤红素对牛Ⅱ型胶原诱导的关节炎小鼠抗炎作用及其对T细胞的作用机制。方法选用DBA/1J小鼠,以牛Ⅱ型胶原诱导建立小鼠关节炎CIA模型。成模后,以雷公藤红素2mg/kg给药治疗并设置对照组,记录小鼠关节评分;二次免疫70d后摘眼球取血处死小鼠,ELISA检测小鼠血浆中IL-17、IL-6、TGF-β水平,HE染色法观察小鼠关节病理变化,流式细胞术检测小鼠脾脏细胞中Th17和Treg比例。结果雷公藤红素组小鼠关节评分显著低于模型组(P0.01);HE染色结果显示,雷公藤红素有效改善关节滑膜炎性浸润情况(P0.05);ELISA检测小鼠血浆结果显示雷公藤红素使Th17相关细胞因子IL-6水平显著降低(P0.01);流式检测结果显示,雷公藤红素可显著降低小鼠脾脏中Th17细胞亚群比例(P0.01)并增加Treg细胞亚群比例(P0.05)。结论雷公藤红素可以有效缓解CIA小鼠关节炎症症状,抑制关节滑膜炎性细胞浸润、血管翳生成和软骨破坏。雷公藤红素治疗CIA小鼠炎症反应可能是通过减少CIA小鼠体内IL-6等促炎症因子的分泌并伴随着抑炎因子参与的免疫平衡调节过程而实现。     

葛根芩连汤中葛根素、黄芩苷、小檗碱与甘草酸组合在大鼠体内代谢产物研究

目的:研究葛根芩连汤中各味药材的主要成分葛根素、黄芩苷、小檗碱与甘草酸联合给药后在大鼠体内的代谢产物化学结构.方法:健康大鼠灌胃给药,收集0～24 h的尿样,尿样经C18固相小柱分离纯化后,经UPLC-Q-TOF-MS分析鉴定其中的代谢产物.代谢物的结构鉴定主要依据各代谢物与对照品的一级质谱电离规律、裂解规律间的关联性和相关文献的数据.结果:灌胃给药(葛根素、小檗碱、黄芩苷和甘草酸)后,在大鼠尿液中鉴定了16个代谢产物的化学结构,其中6个来自葛根素,分别为葛根素、大豆苷、大豆苷元、二氢大豆苷元、葛根素硫酸酯结合产物和葛根素葡萄糖醛酸结合产物;2个来自黄芩苷,分别为baicalin-6-O-β-glucose-7-O-β-glucopyranuronoside,baicalin-6-O-β-glucopyranuronoside-7-O-β-glucopyranuronoside;8 个来自小檗碱,分别为thalifendine,berberrubine,demethyleneberberine,jatrorrhizine,demethyleneberberine葡萄糖醛酸结合物,jatrorrhizine葡萄糖醛酸结合物,berberrubine-9-O-β-D-glucuronide,demethyleneberberine-2,3-O-β-D-glucuronide.结论:主要成分联合给药后,代谢产物主要以苷元或以葡萄糖苷、葡萄糖醛酸结合物为主,也有以原型排出;甘草酸生物利用度低,有明显的首过效应,且经尿液排泄量极少,未检出代谢产物.     

小儿中深度镇静失败原因回顾性分析

目的评估小儿中深度镇静过程中可能导致镇静失败的原因,探讨进一步提高中深度镇静成功率的方法。方法收集因诊断性检查需行中深度镇静的病例48158例,其中心脏彩色多普勒检查31076例,CT检查7368例,MRI检查9714例,按照镇静流程使用水合氯醛和／或鲁米那进行中深度镇静,对镇静失败原因进行回顾性分析。结果所有纳入病例中共有4164例镇静失败,总体失败率为8．6％。其中心脏彩色多普勒、CT和MRI检查的失败率分别为7．4％、9．3％和12．2％,心脏彩色多普勒检查镇静失败率低于CT和MRI（P〈0．05）。镇静失败率随着禁食时间延长、小儿年龄增加呈升高趋势（P〈0．05）。结论多种因素可能影响镇静的效果,针对其中部分因素进行合理调整可进一步提高门诊中深度镇静的成功率。