胚胎多巴胺神经元移植治疗帕金森病的实验研究

目的探讨胚胎多巴胺神经元移植对帕金森病大鼠的治疗作用。方法立体定向注射6-羟多巴胺建立帕金森病大鼠模型,随机分为对照组(n=12)和细胞移植组(n=12)。细胞移植组将荧光染料CM-DiI标记的大鼠胚胎多巴胺神经元立体定向注入帕金森病大鼠纹状体区,对照组于相同部位注入生理盐水。用阿扑吗啡诱导帕金森病大鼠旋转行为评估细胞移植的治疗作用。细胞移植8周后取大脑标本行冷冻切片,荧光显微镜下观察移植细胞在脑内存活情况。结果与对照组比较,移植多巴胺神经元能显著改善阿扑吗啡诱导帕金森病大鼠的异常旋转行为(P0.01)。移植8周后,仅少量多巴胺神经元存活。结论多巴胺神经元移植可短期内改善帕金森病大鼠的运动障碍,但长期疗效不佳,可能与移植多巴胺神经元长期存活率较低有关。     

超顺磁氧化铁、增强型绿色荧光蛋白双标中脑神经干细胞移植治疗帕金森病

目的 观察超顺磁氧化铁(SPIO)、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双标中脑神经干细胞(mNSCs)移植对帕金森病(PD)大鼠的治疗作用.方法 6-羟多巴胺立体定向注射建立PD大鼠模型,随机分为对照组(n=12)和细胞移植组(n=12).将SPIO、EGFP双标mNSCs移植到PD大鼠纹状体区.阿朴吗啡(APO)诱导PD大鼠旋转行为评估细胞移植的治疗作用.磁共振成像动态观察移植细胞的存活和迁移,免疫荧光组织化学研究移植细胞的存活、迁移和分化.结果 与对照组比较,SPIO、EGFP双标mNSCs移植能显著改善APO诱导PD大鼠的异常旋转行为(P＜0.01);大多数移植细胞停留于移植原位,仅少数细胞向周围脑组织迁移;移植8周后,大多数mNSCs保持其未分化状态(37±6)%或分化为神经胶质细胞(36±4)%,仅少数细胞分化为DA神经元(6±2)%.结论 通过MRI成像可对体内移植的SPIO标记细胞进行活体示踪.SPIO、EGFP双标mNSCs移植可显著改善PD大鼠的运动障碍.     

人胚胎脊髓发育过程中脑源性神经营养因子的表达及变化

目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)在不同发育时期人胚胎脊髓中的表达变化及意义.方法:采用免疫组织化学和免疫印迹法对3周～8月人胚脊髓中BDNF蛋白进行定位、定量研究.结果:所检测的15个时段中,神经管上皮和室管膜上皮均可见BDNF阳性细胞,且随胚龄增加呈规律性变化;免疫印迹法显示6～9周,BDNF蛋白含量随胚龄逐渐增加,9周时达到高峰,3月后下降,6月后又有所增加但相对平稳.结论:BDNF在人胚胎脊髓发育特别是胚期脊髓的发育中发挥重要作用,并可能参与神经上皮神经干细胞的分裂增殖.     

激肽释放酶结合蛋白对大鼠视神经不完全损伤后视网膜神经细胞的保护作用及轴突再生的研究

目的 探讨激肽释放酶结合蛋白(KBP)是否对体内视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)存在保护和促进其轴突再生的作用.方法 在距SD大鼠视神经球侧端0.5～1.0mm的地方夹持视神经,造成大鼠视神经不完全性损伤;在大鼠视神经损伤的模型中,行玻璃体腔分别注入KBP作为实验组和PBS为对照组;分别于损伤后7d,14d和21d取材,HE染色观察视网膜结构、测量视网膜厚度及RGCs的存活数量;提取术眼视神经行蛋白免疫印迹.根据统计学分析结果,明确KBP是否有视网膜神经节细胞保护和促进其轴突再生作用.结果 ①大鼠不完全视神经损伤模型建立成功.②通过HE染色,我们观察了视网膜各层结构变化,通过双肓法计数RGCs,和视网膜厚度测量,经统计学分析,组间差异具有统计学意义.③对神经再生的标记蛋白GAP-43进行Western-blot,统计学分析,组间GAP-43表达差异具有统计学意义.结论 ①KBP对视神经损伤后的RGCs具有保护作用.②KBP在视神经损伤后可能促进了视神经的轴突再生.     

血清量及首次换液时间对荧光小鼠骨髓基质细胞体外增殖的影响

目的研究不同量的血清及首次换液时间对荧光小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)体外增殖的影响。方法转基因荧光小鼠BMSCs取材后种植于24孔培养板中,分别用含10%、20%、30%胎牛血清的DMEM/F12混合培养基常规培养。于4h、6h、8h、10h、12h、24h、48h、72h首次全量换液,观察其生长情况,用CD44、CD54、CD45抗体对10%、20%胎牛血清传代培养至第5代的细胞进行免疫细胞化学染色。结果BMSCs在含10%、20%胎牛血清的DMEM/F12中生长较好,原代培养的细胞其贴壁细胞数随首次换液时间的延长而增多,但纯度下降。首次换液时间相同而培养液血清含量不同的两组细胞免疫组织化学染色的阳性率差别无显著性(P>0.05),CD44和CD54抗体反应的阳性率随着首次换液时间的延长而逐渐降低,CD45抗体反应的阳性率则随首次换液时间的延长而逐渐升高。结论贴壁分离纯化对转基因荧光小鼠的BMSCs体外培养有效,其体外培养适宜的血清体积分数为0.1～0.2,首次换液时间以8h时为佳。     

体外培养鸡胚背根节神经细胞的形态学观察

为探讨鸡胚背根节(DRG)神经元的体外发育过程,分别取培养0、 1、 2、 3、 4、 5、 7、 14、 21天的神经元,计数相同面积内(2.5×105μm2)神经元的存活数,观察培养神经元的形态变化并与体内者比较.结果 :各时相神经元的存活数分别是94±4、 83±6、 67±4、 65±7、 68±5、 71±9、 73±6、 22±4、 0 个.神经元的形态在培养48小时内无显著变化,多为球形或椭圆形,但至3天后,不少神经元呈锥形或梭形,而体内者仍为圆球形或卵圆形.由此提示,离体后,仅部份神经元在一定时段内能够存活生长,且神经元的体外发育过程可能与其在体内的情况有所不同.