瓦松粗多糖对小鼠体内免疫调节活性的影响

[目的]探讨瓦松粗多糖对小鼠体内免疫调节活性的影响.[方法]取雄性6～8周龄BALB/c小鼠随机分为瓦松粗多糖低、中、高剂量组(分别灌胃给予200、400、800 mg/kg瓦松粗多糖溶液)及空白对照组(灌胃给予生理盐水),每日1次,连续灌胃28 d.利用ELISA试剂盒测定小鼠血清中IL-12、IFN-γ、TNF-α含量;利用LPS与ConA共同培养小鼠脾细胞,CCK-8法测定小鼠B、T淋巴细胞增殖情况;采用LDH法测定小鼠脾细胞与YAC-1细胞共同孵育后NK细胞的活性.[结果]瓦松粗多糖低、中、高剂量组小鼠血清中IL-12、IFN-γ、TNF-α含量,B、T淋巴细胞增殖率及NK细胞活性均明显高于空白对照组(P<0.05,P<0.01).[结论]瓦松粗多糖可升高小鼠血清IL-12、IFN-γ、TNF-α含量,促进B、T细胞增殖转化,增强NK细胞活性,从而增强小鼠免疫系统功能.     

HBx通过Notch信号通路在正常免疫小鼠体内导致肝癌的作用机制

目的 构建长期携带乙型肝炎病毒X(hepatitis B virus X,HBx)的正常免疫小鼠模型,以探讨HBx在体内导致肝癌发生的机制.方法 将转染HBx的肝前体细胞经肝门静脉注射入昆明小鼠体内构建动物模型,分别于术后30、90、180、360 d收取肝脏组织,Western blot和RT-qPCR检测HBx的表达,HE染色观察组织病理切片,Western blot和RT-qPCR检测Notch1、Notch4、Hes1的表达,然后于180 d腹腔注射抑制剂DAPT,Western blot和RT-qPCR检测肝脏细胞凋亡及细胞周期相关因子的表达变化.结果 动物模型构建成功且于360 d发生肝癌,与对照组相比,Notch1、Notch4、Hes1的基因及蛋白水平均于30 d呈现显著上调且一直持续至360 d(P＜0.05、P＜0.05、P＜0.001;P＜0.05、P＜0.05、P＜0.01);Bcl-2、CDK4、CyclinE、CyclinD1的蛋白水平在HBx组上调(P＜0.001;P＜0.01;P＜0.001;P＜0.01),Bax呈下调(P＜0.001),基因水平与其一致(P＜0.05;P＜0.001;P＜0.001;P＜0.01;P＜0.001),而抑制剂DAPT组显著扭转上述趋势.结论 HBx在体内通过持续激活Notch通路引起细胞凋亡及细胞周期异常变化,最终导致肝癌发生.     

干预血栓调节蛋白表达对糖尿病肾病肾损伤的影响

目的 探讨干预血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)表达对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾损伤的影响及可能机制.方法 ①利用免疫组化检测25例DN患者肾组织以及6例正常肾组织中肝X 受体-α(liver X receptor-α,LXR-α)、TM、凝血因子XⅢ-A(FXⅢ-A)和CD163表达;②在明确LXR-α激动剂T0901317上调db/db小鼠TM表达及TM干扰RNA(Ad-TM shRNA)下调TM表达作用后,将12周龄雄性db/db小鼠分为4组(n=6):DN生理盐水组、Ad-ctrl+DN组、T0901317+DN组、Ad-TM shRNA+DN组,C57BL6野生小鼠作为正常对照组.上述5组给药4周后,Western blot,免疫组化观察干预TM表达对肾组织TM、LXR-α、FXⅢ-A、CD163表达的影响,ELISA检测血炎症介质(TNF-α、IL-6)以及尿微量白蛋白的变化.结果 DN患者肾组织TM、LXR-α表达量较对照组下降,且与肾小球滤过率正相关(P＜0.05);而FXⅢ-A和CD163表达较对照组升高,且与肾小球滤过率负相关(P＜0.05).动物实验显示:DN生理盐水组与野生小鼠对照组相比、Ad-TM shRNA组与DN对照组相比,均表现为尿微量白蛋白和血TNF-α、IL-6水平上升、肾组织TM和LXR-α表达减少、FXⅢ-A和CD163表达增加(P＜0.05),而T0901317+DN组较DN对照组,上述指标改善.结论 表达上调的TM可能通过抑制肾组织FXⅢ-A、CD163表达以及下调血炎症介质水平而改善db/db小鼠尿蛋白水平.     

小鼠耳蜗核因子-κB P50的表达

核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NFκ-B)是许多细胞对各种刺激反应起重要作用的转录因子之一,NF-κB P50是其家族成员。为了显示NF-κB P50在耳蜗的表达,给实验组小鼠皮下注射卡那霉素(kanamycin,KA),或鼓室注射脂多糖(lipopolysaccharides,LPS),对照组小鼠注射等量生理盐水,用NFκ-B P50兔多克隆抗体(PcAb)免疫组化染色(DAB显色),观察NFκ-B P50在小鼠耳蜗的表达。结果显示:在小鼠耳蜗各圈螺旋韧带、盖膜(TM)、螺旋突、螺旋神经节和神经纤维可观察到较强的表达;Corti器的内毛细胞(inner hair cells,IHC)、外毛细胞(outer hair cells,OHC),内柱细胞(inner pillar cell,IP)、外柱细胞(outer pillar cell,OP)、Deiter细胞(DC)、Hensen细胞(HC)和Claudious细胞的细胞质也有NF-κB P50的表达;IHC、OHC和上述细胞的核及基底膜(B)和对照组均未见表达。注射LPS和KA处理的小鼠耳蜗NFκ-B P50的表达,都比对照小鼠明显增强。注射LPS和KA后3d和7d的小鼠,NF-κB P50的表达没有显著性差别。注射LPS和KA可使NFκ-B P50在小鼠耳蜗产生急性免疫反应。     

痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠免疫功能影响的研究

目的研究痰热清注射液对流感病毒(FM1)感染小鼠的免疫功能和肺组织中细胞因子以及肺组织炎症反应的作用。方法采用流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)制备小鼠肺感染模型,观察痰热清注射液对FM1感染小鼠肺组织匀浆中细胞因子IFNγ-、IL-4和TNF-α的含量,以及T、B淋巴细胞的增殖功能和T淋巴细胞产生IL-2的能力。结果痰热清注射液不仅具有显著增强FM1感染小鼠T、B淋巴细胞的功能和提高小鼠肺组织匀浆中IFN-γ和IL-4的含量,而且还能显著抑制肺组织匀浆中TNF-α的含量。结论痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠的免疫功能和肺组织中细胞因子具有明显的调节作用和抑制肺组织炎症反应的作用。     

越鞠保和丸对实验动物胃肠功能的影响

目的观察越鞠保和丸对实验动物胃肠运动、胃分泌的影响。方法利用吗啡和阿托品造成小鼠胃排空及小肠推进障碍,利用新斯的明造成小鼠胃排空及小肠推进亢进;观察越鞠保和丸对正常及胃肠障碍模型动物胃肠运动的影响。观察越鞠保和丸对正常及水浸应激大鼠胃液分泌、胃酸分泌、胃蛋白酶活性及胃壁结合黏液量的影响。结果①越鞠保和丸灌胃给药对正常小鼠胃排空及小肠推进均无显著影响,但可改善胃肠运动紊乱模型动物的胃肠运动功能,表现为可显著改善吗啡及阿托品所致小鼠小肠推进障碍,并对胃排空有一定的抑制趋势;可显著对抗新斯的明所致小鼠小肠推进亢进,而对胃排空则无显著影响。②越鞠保和丸十二指肠给药可显著降低正常大鼠及水浸应激大鼠的胃液量、总酸排出量及胃壁结合黏液量。结论越鞠保和丸具有调节胃分泌、调节胃肠运动的作用。     

冬虫夏草提取液抑制破骨细胞分化与缓解去卵巢小鼠骨量流失的研究

目的 探讨冬虫夏草提取液（Cordyceps sinensis extract,CSE）对去卵巢小鼠骨量流失的保护作用以及对核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）诱导的破骨细胞分化及其功能的影响。方法 从C57BL/6小鼠骨髓中提取巨噬细胞（bone marrow-derived macrophages,BMMs）;在破骨细胞分化过程中,加入CSE干预处理,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP）染色分析破骨细胞数量;将接近成熟的破骨细胞种于羟基磷灰石板,观测骨陷窝面积;使用DAPI和鬼笔环肽对破骨细胞肌动蛋白环（F-actin）进行染色,观测环内细胞核数量和环形态;使用q-PCR检测DC-STAMP、ATP6V0d2、TRAP、CTSK、NFATc1的表达;使用Western blot检测MAPK通路蛋白的表达;构建去卵巢小鼠,每天灌胃给予CSE,治疗6周取小鼠股骨进行形态学分析以及ELISA检测外周血中骨碱性磷酸酶（bone alkaline p...     

阿里红调控MAPK/NF-κB信号通路对过敏性哮喘小鼠的影响及作用机制

目的:探讨阿里红多糖(FOPS)和阿里红醇提物(FOEE)对卵清白蛋白(OVA)诱导的过敏性哮喘小鼠模型的干预作用及潜在机制。方法:将72只雌性BALB/c小鼠随机分成9组,每组8只,分为正常组(Control),OVA诱导的过敏性哮喘模型组(OVA),阳性对照组(桂龙咳喘宁,Guilong),FOPS低、中、高剂量组(50,100,200 mg·kg^-1),FOEE低、中、高剂量组(50,100,200 mg·kg^-1)。观察并比较小鼠体质量变化、肺组织病理学变化;测定各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞数量、IL-4、IL-5及TNF-α的含量;测定各组小鼠肺组织中磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达。结果:模型组小鼠BALF中炎症总细胞数量、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的数量,BALF中IL-4、IL-5和TNF-α的含量,肺组织p-p38 MAPK、Caspase-1、p-IκBα和p-NF-κB p65蛋白表达均明显高于正常组(P<...     

去卵巢小鼠模型的构建比较北大核心CSCD

目的对比不同制备方法对去卵巢小鼠模型的影响。方法结扎法、电烙法完全摘除小鼠双侧卵巢,检测阴道涂片、脏器湿重、生化指标,Micro-CT检测股骨组织形态变化,HE染色观察股骨、子宫、胸腺、脾脏病理变化,对比两种不同方法对去卵巢小鼠模型的影响。结果与假手术组相比,结扎法、电烙法均可使去卵巢小鼠连续处于动情间期,子宫、脾脏、胸腺脏器湿重降低,血清中骨特异性碱性磷酸酶(bone-specific alkaline phosphatase,BALP)、骨钙素(bone gla protein,BGP)水平降低;血清性激素水平紊乱,雌二醇(estradiol,E_(2))水平降低、促卵泡生成素(follicle stimulating hormone,FSH)水平升高;小鼠股骨骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨矿物质密度(bonemineral density,Tb.BMD)、连接密度(connectivity density,Conn.D)水平降低,骨小梁分离度(trabecular spacing,Tb.Sp)水平升高,皮质骨骨矿物质密度(bone mineral density,Ct.BMD)、皮质骨厚度(cortical bone thickness,Ct.Th)水平降低;去卵巢小鼠胸腺皮质厚度、脾小结体积明显减小,子宫出现明显萎缩,股骨骨小梁排列紊乱,骨小梁结构变细,破骨细胞数量明显增多。结论结扎法、电烙法均能成功制备去卵巢小鼠模型,从制备方法上看电烙法更简便,为卵巢摘除法相关研究提供实验基础。     

不同比例TNBS诱导Balb/c小鼠克罗恩病模型的建立及评价

目的 不同三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid, TNBS)比例诱导Balb/c小鼠克罗恩病(Crohn disease, CD)模型的建立及评价。方法 以完全随机区组化的方法将32只Balb/c小鼠分为4组,按水∶无水乙醇∶TNBS比值分为模型1组(2∶5∶3)、模型2组(1∶5∶4)及模型3组(0∶5∶5),每组8只。另8只健康小鼠作为对照组,以小鼠一般情况、体质量变化、结肠长度变化、粪便性状、结肠组织病理学评分等为指标评价不同比例TNBS诱导的小鼠CD模型进展并计算小鼠生存率。于建模后第7天取材进行结肠组织病理学检查及组织病理评分,取小鼠血清检测炎性细胞因子IL-6水平,同时测量小鼠结肠长度。结果 模型3组小鼠生存率低,整个实验周期体质量持续下降,建模第3天即出现严重腹泻、便血等症状,7天后结肠长度显著缩短(P<0.001),组织损伤严重,组织病理学评分及IL-6水平均显著升高(P<0.001);模型1组小鼠第3天情况与模型3组相似,体质量在第3、4天显著下降(P<0.05)后有所回升,第7天镜下检查结肠组织损伤及炎...