不同雄性淋巴细胞及其Exosomes过继转输改善妊娠丢失孕鼠胚胎发育的比较分析

目的:分析雄性T淋巴细胞及其Exosomes(Exo)过继转输对妊娠丢失孕鼠胚胎发育的保护作用。方法:分别将健康男性外周血单个核细胞(PBMC)、BALB/c及DBA/2雄鼠脾细胞体外诱导增殖,蔗糖密度梯度离心联合超滤制备Exo。CBA/J(♀)×BALB/c(♂)为正常妊娠对照,CBA/J(♀)×DBA/2(♂)为妊娠丢失URSA模型。将URSA孕鼠随机分组,经尾静脉或皮下注射,分别予以父方、非父方、无关雄鼠脾细胞或其Exo,以及男性PBMC来源Exo过继转输。观察胚胎发育,计算胎盘体积、胚胎吸收率及妊娠丢失率。结果:URSA组胎盘体积明显缩小,胚胎吸收率、妊娠丢失率显著升高(均P<0.000 5);尾静脉或皮下注射不同来源细胞及Exo后,孕鼠胎盘体积显著恢复,胚胎吸收率、妊娠丢失率显著下降(均P<0.000 5)。不同治疗组内两种注射途径产生的疗效无差异(均P>0.05);不同细胞来源Exo过继转输后,胚胎吸收率的下降幅度显著强于细胞治疗组(均P<0.05);男性Exo过继转输后,妊娠丢失率的下降幅度显著强于细胞治疗组及鼠源Exo治疗组(均P<0.05)。结论:过继转输不同来源雄性T淋巴细胞及其Exo均可明显改善胚胎发育。Exo作为非细胞成分生物学制剂,有望取代传统细胞过继免疫治疗。     

ADAM17异常表达对神经前体细胞迁移的影响

目的:分析在胚胎发育过程ADAM17异常表达对神经前体细胞迁移的影响。方法:采用鸡胚活体电转和小鼠子宫内电转基因技术,在鸡胚发育的第5 d(E5),将2μg/μl的p CAGGS-ADAM17和0.25μg/μl的p CAGGS-GFP质粒以1∶8混合液0.25~0.5μl准确地注射到视顶盖内,然后电转基因,E12时收集胚胎;小鼠胚胎发育的15 d(E15)进行子宫内电转,将2μg/μl的shRNA-ADAM17和0.25μg/μl的p CAGGS-GFP质粒以1∶8混合液0.25~0.5μl准确地注射到一侧脑室,电转基因后E20时收集胚胎。冰冻切片,采用免疫荧光组织化学和DAPI染色观察组织形态结构及相关蛋白的变化。结果:在鸡胚模型中,ADAM17的超表达并不会明显的引起神经前体细胞迁移的改变,对细胞核转录因子Pax7的表达也没有影响;在鼠胚模型中,ADAM17的抑制表达能够引起神经前体细胞迁移受阻,但并没有引起大脑皮层各层的结构的变化。结论:ADAM17的抑制表达对神经前体细胞的迁移具有抑制作用,但并不会引起大脑皮层结构的改变。     

免疫低下小鼠肺部肺炎链球菌感染模型的制备

目的建立免疫低下肺部肺炎链球菌感染小鼠模型。方法将配比好的FLV病毒悬浊液腹腔注射模型组小鼠,21 d后,采用滴鼻法对小鼠进行Ⅲ型肺炎链球菌接种;正常对照组给予与药液同体积的生理盐水。结果与正常对照组比较模型组小鼠毛发光泽度欠佳,竖毛现象严重,活动度逐渐减少,饮食明显减少,体质量减轻;模型组小鼠各脏器指数比正常对照组均升高,差异有显著统计学意义(P0.05),免疫低下肺部肺炎链球菌感染模型小鼠血清中IL-6、PCT表达水平均比正常对照组增高(P0.05)。结论采用FLV病毒悬浊液结合滴鼻法滴注肺炎链球菌建立的免疫低下肺部肺炎链球菌感染小鼠模型,为研究免疫低下肺部肺炎链球菌感染药物干预提供了较理想的实验模型。     

瞬时感受器电位阳离子通道V2活动促进损伤轴突再生的体外研究

目的:在体外探讨瞬时感受器电位阳离子通道V2(TRPV2)的活动对损伤神经元轴突再生的作用。方法:原代培养小鼠胚胎背根节神经元,制备划伤模型。用全细胞膜片钳记录损伤神经元的自发放电活动。实时定量PCR和免疫细胞化学观察神经元损伤后TRPV2的表达。免疫细胞化学法观察TRPV2的激动剂Cannabidiol及siRNA对体外神经元轴突生长的作用。结果:划伤后,神经元自发性放电增加;神经元突起的TRPV2表达增加。10μmol/L TRPV2激动剂Cannabidiol可显著促进神经元存活和突起生长。针对TRPV2的siRNA可显著抑制突起生长。结论:在体外,神经元损伤可诱导TRPV2表达升高,后者参与损伤神经元的轴突再生。     

小白菊内酯对帕金森病小鼠模型黑质多巴胺能神经元的保护作用

目的:探讨小白菊内酯在帕金森病小鼠模型中抑制核因子NF-κB(nuclear factor kappa B)信号通路对多巴胺(DA)能神经元的保护作用。方法:将C57BL/6N小鼠随机分为模型组、干预组和对照组。通过行为学、免疫组织化学和免疫蛋白印记法观察各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、核因子NF-κB、环氧合酶-2(COX-2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达变化情况。结果:与对照组相比,模型组小鼠出现典型PD症状,TH阳性神经元明显丢失、蛋白水平下降,NF-κB、COX-2和caspase-3阳性细胞大量表达,蛋白水平显著升高(P0.01)。抑制剂组小鼠上述变化明显减轻(P0.01)。结论:在MPTP所致PD模型小鼠中,小白菊内酯通过抑制核因子NF-κB信号通路减少凋亡蛋白caspase-3表达,从而发挥神经保护作用。     

EGCG对ConA诱导的肝损伤小鼠NF-κB和ICAM-1表达的影响

目的通过观察表没食：于儿茶素没食子酸酯（EGCG）对ConA诱导的急性肝损伤小鼠肝组织中NF-κB及ICAM-1表达的影响,来探讨EGCG对小鼠的肝保护机制。方法C57BL／6小鼠分成4组：对照组、EGCG对照组、ConA模型组．EGCG＋ConA组。EGCG对照组及EGCG＋ConA组小鼠给予EGCGEl服（5mg／kg）10d后,予模型组小鼠静脉注射ConA（15mg／kg）建造肝损伤模型。采血及留取肝组织,HE法检测肝组织病理变化,ELISA法检测NF-KB及ICAM-1的表达。结果ConA模型组小鼠肝损伤明显,NF-κB及ICAM-1的表达明显增多,与对照组比较有显著性差异（P〈0．05）;EGCG治疗组肝损伤减轻且伴NF-KB及ICAM-1的表达下降,与模型组比较差异明显（P〈0．05）。结论EGCG对ConA诱导的免疫性肝损伤小鼠有保护作用．其机制可能与调节NF-κB及ICAM-1的表达有关。     

~(125)I标记重组融合蛋白dTMP-GH在小鼠体内分布的实验研究

目的研究重组融合蛋白dTMP-GH在小鼠体内的分布情况,明确其是否具有靶向分布特点。方法实验室制备dTMP-GH重组融合蛋白;用放射性125I标记融合蛋白dTMP-GH后,按100μg/kg的标准小鼠尾静脉注射125I-dTMP-GH,分别于给药后5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h取心、肝、脾、肾、股骨、甲状腺等进行放射性计数。结果制备得到纯度大于98%的重组融合蛋白dTMP-GH;125I标记率为71.53%,放化纯度为96.53%,比活度为0.22 MBq/μl;尾静脉注射125I标记的dTMPGH后30 min股骨的放射性计数占到注射总量的10%,并随时间推移经肝脏和肾脏代谢。结论融合蛋白dTMP-GH经尾静脉注射后在小鼠体内主要分布于骨髓,具有骨髓组织偏向分布特点。     

PFA-fixed Hsp6Osp-loaded dendritic cells as a vaccine for the control of mouse experimental allergic encephalomyelitis

We have shown that Hsp6Osp-loaded immature dendritic cells （DC/sp） can protect mice from the induction of experimental allergic encephalomyelitis （EAE） by inducing Qa-l-restricted CD8＋ T regulatory （Treg） cells. The binding half-life between Qa-1 and Hsp6Osp is particularly short and leads to an unstable Qa- l/peptide complex that significantly decreases the efficacy of this vaccination. To prevent Qa-l/Hsp6Osp complex dissociation, we utilized paraformaldehyde （PFA） fixation to stabilize the formation of the Qa-l/Hsp6Osp complex and maximize the function of DC/sp as a vaccine to control autoimmune diseases. Compared with the non-fixed DC/sp, the fixed DC/sp （FDC/sp） showed an enhanced ability to activate Qa-l-restricted Hsp6Osp-specific CD8＋T cells in vitro and prevented EAE in vivo. Importantly, the FDC/sp maintained immune activity following cryopreservation for I week or after storage for 72 h at 4 ~C. These results indicate that PFA fixation can sustain or increase the efficacy of DC/sp by improving the stability of the Qa-l/Hsp6Osp complex on the surface of the DC/sp. In addition, PFA fixation creates a time window for DC/sp storage, transport and application. Our d~tn ~u~p__~t ~ nnt~nti~l clinic~l ..~e nf FDCI~n ~ ~ vnccine fnr the nr~v~ntinn and treatment of autnimm.n~_ di_~_~__     

饱和脂肪酸对昆明小鼠口腔溃疡愈合影响的研究

目的：研究饱和脂肪酸对昆明小鼠口腔溃疡愈合的影响。方法：3组3～5周龄昆明小鼠,用40％冰醋酸制造口腔溃疡,3组鼠分别喂养含有不同浓度饱和脂肪酸的饲料,观察其对口腔溃疡愈合的影响。结果：实验组动物口腔溃疡愈合时间明显长于对照组,高脂组口腔溃疡愈合时间较对照组延长12 d。结论：饱和脂肪酸对昆明小鼠口腔溃疡有着明显的延缓愈合的作用。