基于LTQ-Orbitrap高分辨质谱分析萸黄连中的成分

目的:采用HPLC串联LTQ-Orbitrap高分辨质谱法分析萸黄连的主要化学成分。方法:采用C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,采用LTQ-Orbitrap线性离子阱高分辨质谱,正离子检测模式进行扫描,根据高分辨质谱提供的分子离子峰和多级碎片的准确质量信息并结合文献对样品进行定性分析。结果:在正离子模式下,检测出萸黄连中的26种成分,鉴定出其中23种化学成分;萸黄连较黄连片增加了吴茱萸中的成分。结论:本实验可为萸黄连的质量控制及炮制机理研究提供参考依据。     

基于活血生物效价检测大黄中10个蒽醌类成分抗血小板聚集作用初步研究

目的运用生物效价测定方法评价大黄Rhei Radix et Rhizoma中10个蒽醌衍生物拮抗血小板聚集作用的强弱差异,筛选可用于酒大黄饮片质量评控的指标性成分。方法采用血小板聚集仪测定体外二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集率,计算10个蒽醌衍生物(芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)不同浓度下的血小板聚集抑制率,采用质反应生物效价软件计算生物效价;采用分子对接软件计算得到大黄酸、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷与P2Y12蛋白受体在最佳结合时的估计抑制常数(Ki),以此验证生物效价测定结果的准确性。结果活血效价测定结果显示,大黄酸、大黄素的活血效价显著高于芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的活血效价;大黄酸、大黄素的活血效价分别是阿司匹林活血效价的5.02、5.15倍,表明大黄酸、大黄素拮抗ADP诱导的血小板聚集作用较强。芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的活血效价与阿司匹林的活血效价相当。芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷的活血效价分别是阿司匹林活血效价的4.13、4.46、9.31、5.46、7.80倍,表明5个结合型蒽醌糖苷拮抗ADP诱导的血小板聚集作用较强。分子对接结果显示,大黄酸、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷对P2Y12蛋白有较高的亲和力,二者的Ki分别为5.73、2.51μmol/L,表明大黄酸、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷在较低的浓度水平即可对P2Y12蛋白受体产生作用,且大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷的活性强于大黄酸的活性,这与实际测得二者的抗血小板聚集作用强度相符合。结论大黄药材中10个蒽醌衍生物的活血生物效价存在较大差异,筛选得到大黄酸、大黄素可作为酒大黄炮制过程品质评价的监控指标。     

UPLC法同时测定大黄中10个蒽醌衍生物的含量

目的建立基于超高效液相色谱(UPLC)法的大黄中10个蒽醌衍生物同时定量分析方法。方法采用Waters Acquity超高效液相色谱仪,BEH C_18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),柱温为34℃;甲醇和0.1%磷酸水溶液的混合溶液为流动相,梯度洗脱;体积流量为0.20 mL/min;进样量为2.0μL;检测波长为410 nm。通过考察柱温和体积流量对保留时间、分离度、理论塔板数和对称因子4个重要的色谱参数的影响,以此获得5个蒽醌糖苷的最佳的色谱分离度和稳健性。结果优化得到柱温34℃和体积流量0.20 mL/min为最佳分离条件,根据最优参数,建立一种新的基于UPLC的大黄中10个蒽醌衍生物同时定量分析方法。20批次大黄测定结果显示,2种不同基原的大黄药材中芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷的含量差异最大,分别可超过60、77倍,表明2种不同基原的大黄存在较大的质量差异。结论基于UPLC最佳分离参数建立的10个蒽醌衍生物同时定量分析方法具有较好的稳健性,对更加全面地从化学表征的角度评控不同来源的大黄药材的质量具有参考价值。     

附子精标饮片的研制(Ⅰ):规格大小与质量均一性研究

中药饮片规格与质量均一性是影响临床疗效的重要因素。针对现有中药饮片规格混乱多样与质量均一性差,与临床疗效关系不明确的不足,首次提出了面向临床的、依托趁鲜加工技术的中药精标饮片(precision decoction pieces, PDP)研究思路与方法;并以有毒中药附子为例,从规格设计、炮制工艺、饮片煎煮、质量均一性、毒效成分转移规律等角度对精标饮片进行系统评价。结果显示,采用趁鲜切制技术加工5 mm规格的附子定尺颗粒简单易行,效率高、产量大;能显著降低成分的损失,提高药效成分的含量;实现了饮片规格与质量的均一化;同时,能最大限度地促进药效成分的煎出,提高药物利用率。该结果揭示了精标饮片品质的优越性,有助于提高临床疗效,为推动中药饮片形制规格的标准化与加工方法的现代化提供思路、方法与范例。     

HPLC-MS法测定去氢骆驼蓬碱在人肝微粒体中代谢产物

目的:测定人肝微粒体中去氢骆驼蓬碱的代谢产物。方法:以去氢骆驼蓬碱为研究对象,采用高效液相色谱-离子阱-质谱系统分析去氢骆驼蓬碱经肝微粒体代谢的代谢产物。结果:去氢骆驼蓬碱在人肝微粒体中经Ⅰ相代谢后产物主要为哈尔酚。结论:哈尔酚为首次报道的代谢产物,本研究利用液质联用技术阐明了去氢骆驼蓬碱的体内代谢产物,为进一步研究奠定了基础。     

生 炙淫羊藿抗衰老活性比较及作用机制研究

目的 探究生、炙淫羊藿抗衰老作用差异,利用网络药理学预测淫羊藿抗衰老的作用机制。方法 通过观察秀丽隐杆线虫在生、炙淫羊藿作用下的寿命、热应激、产卵数、体弯曲等指标,评价生、炙淫羊藿对线虫抗衰老的作用差异。基于网络药理学技术筛选并构建淫羊藿活性成分-抗衰老靶点网络、蛋白质-蛋白质互相作用（PPI）网络,并对淫羊藿抗衰老基因进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结果 与对照组相比,炙淫羊藿能够明显延长线虫的寿命（P<0.05）,生、炙淫羊藿都能增加老年线虫的体弯曲率（P<0.05）;与淫羊藿生品组相比,生、炙淫羊藿延长线虫寿命的差异具有统计学意义（P<0.05）,炙淫羊藿更能延长线虫寿命。网络药理学筛选得到淫羊藿6个抗衰老关键活性成分,10个关键蛋白及一系列生物功能和通路。结论 生、炙淫羊藿可以延缓线虫衰老,且炙淫羊藿延长线虫寿命作用优于生品。网络药理学预测显示淫羊藿活性成分为槲皮素等,通过作用于蛋白激酶B1（Akt1）、细胞肿瘤抗原p53（TP53）等靶点,参与对无机物的反应等生物过程及调控癌症通路等途径发挥抗衰老作用。     

基于广义中药学探讨川贝母产业发展现状、策略与方法

川贝母Fritillariae Cirrhosae Bulbus是最具代表性的川产名贵道地药材之一,作为质优效佳的中医临床化痰止咳药,应用历史悠久,具有重要的临床价值和广阔的全产业链应用开发潜力。资源供应短缺、质量评控薄弱、技术标准缺失、终端产品缺乏、政策支持不够等瓶颈问题,制约了当前川贝母产业健康发展。基于广义中药学理论,从观念和理论上将中药理论、临床应用、综合开发、产业发展、健康服务、资源保护、生态环境、文化传承等相关的要素整合为一,概述了川贝母的化学成分、药理作用、质量控制、专利申请、新药研发及大健康产品等研究进展,从全产业链探讨川贝母产业发展中遇到的挑战,提出相应的发展策略与方法,为川贝母产业高质量发展提供科学支撑。     

RANKL浓度对破骨细胞形成与活性的影响

目的 探讨不同浓度RANKL对骨髓单核细胞向破骨细胞分化和活性的影响.方法 50、100和150 μg/L三种RANKL浓度诱导骨髓单核细胞向破骨细胞分化.抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞形态并计数,抗酒石酸酸性磷酸酶活性检测试剂盒检测上清中的抗酒石酸酸性磷酸酶活性,骨板吸收实验检测破骨细胞骨吸收活力.结果 100 μg/L和150 μg/L RANKL浓度组在破骨细胞数量、细胞大小、核数目,抗酒石酸酸性磷酸酶活性和骨吸收率方面均明显高于50 μg/L组（P＆lt;0.01）,而100 μg/L和150 μg/L组间没有明显差异.结论 100 μg/L RANKL浓度下破骨细胞形成和活性能力强且相对较经济,是破骨细胞诱导培养的理想浓度值.     

金合欢素对糖尿病肾病大鼠肾损伤及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨金合欢素对糖尿病肾病（DN）大鼠肾损伤及Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）信号通路的影响。方法 通过高脂高糖饲料喂养及ip链脲佐菌素（STZ）建立DN大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,金合欢素低、高剂量（40、80 mg ·kg^-1）组,金合欢素（80 mg ·kg^-1）＋脂多糖（LPS,0.1 mg ·kg^-1）组,缬沙坦（20 mg ·kg^-1）组,每组10只,并以正常喂养且不ip STZ的10只大鼠作为对照组。干预结束后,尾静脉取血,检测大鼠空腹血糖含量;收集大鼠24 h尿液,分析尿蛋白含量;腹部主动脉取血,ELISA法检测血清中血肌酐、血尿素氮水平及肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;分离双肾组织,透射电镜及HE染色检测肾组织损伤情况;Western blotting检测Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组肾组织严重受损,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加（P<0.05）;与模型组比较,缬沙坦和金合欢素低、高剂量组肾组织损伤得到缓解,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著降低（P<0.05）;与金合欢素高剂量组相比,金合欢素＋LPS组肾组织损伤加剧,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加（P<0.05）。结论 金合欢素通过抑制TLR4/NF-κB信号通路改善DN大鼠肾损伤。     

158例前列腺汽化电切术病人的护理体会

前列腺增生是老年男性较常见的疾病之一,患者多以排尿困难、夜尿次数增多、急慢性尿潴留而收住院[1].手术是治疗前列腺增生症的主要手段.近年来开展的经尿道前列腺汽化电切手术具有手术创伤小、效果可靠、住院时间短、恢复快等优点[2].2003年2月至2004年4月,我院经尿道前列腺汽化电切治疗前列腺增生症158例,通过精心护理,所有病人均痊愈出院.现将护理体会报告如下.