马钱子对斑马鱼幼鱼肝脏毒性的初步研究

目的利用斑马鱼模型探讨马钱子的肝毒性机制。方法考察马钱子对受精后4天(day post fertilization,dpf)斑马鱼幼鱼死亡率的影响。此外,通过与对照组相比,以肝脏表型和肝脏功能、生理指标为评价标准确认马钱子的肝脏毒性,并利用荧光实时定量PCR(Q-RT-PCR)技术从转录水平对肝毒性相关的基因,如超氧化物歧化酶1基因(superoxide dismutase 1,sod1)、醌氧化还原酶1基因(nad(p)h quinone oxidoreductase 1,nqo1)、线粒体解偶联蛋白2基因(uncoupling protein 2,ucp2)、谷胱甘肽S-转移酶P 2基因(glutathione s-transferase p 2,gstp2)、B细胞淋巴瘤2基因(b-cell lymphoma-2,bcl-2)、骨髓细胞白血病-1B基因(myeloid cell leukemia-1b,mcl-1b)、BCL 2关联X蛋白基因(Bcl-2 associated X,apoptosis regulator,bax-2)、BH3互动死亡激动剂基因(recombinant BH3 interacting domain death agonist,bid)、脂肪酸合酶基因(fatty acid synthase,fasn)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coa reductase,hmgcra)、成纤维细胞活化蛋白α基因(fibroblast activation protein alpha,fap)、瘦素受体基因(leptin receptor,lepr)、视黄醇结合蛋白4基因(retinol binding protein 4,rbp4)、转化生长因子基因(transforming growth factor beta 1,tgf-β1)、转化生长因子β受体2基因(transforming growth factor beta receptor 2,tgf-βr2)基因的表达水平进行评价。采用SPSS24.0进行组间单因素方差分析和Dunnett’s t检验对不同处理组之间的数据进行差异分析。结果(1)在亚致死浓度(<76.523μg/mL)暴露条件下,马钱子能够引起斑马鱼幼鱼肝脏形态发生改变、引起细胞凋亡和脂质积累。(2)低中高浓度马钱子暴露24小时,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)相比对照组降低42.5%~67.3%、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性降低22.1%~60.8%,同时丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量相比对照组增加17%~105%、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活性相比对照组分别增加30.49%~34.05%、13.42%~15.18%。(3)实时PCR结果显示,Sod1、Bcl-2、Gstp2、Nqo1、Bid、Bax-2、Hmgcra、Mcl-1b和Tgf-βr2的表达水平受到显著影响。结论马钱子对斑马鱼的肝毒性与氧化应激损伤和脂肪代谢失衡有关。     

柱前衍生-HPLC法对水蛭的指纹图谱及其16种氨基酸含量测定研究

目的建立18批水蛭药材游离类氨基酸柱前衍生-高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的分析方法,并完成对水蛭中16种游离和水解氨基酸成分的同时定量。方法加水超声提取游离氨基酸,以6 mol/L盐酸提取水解氨基酸;基于异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生法,以氨基酸分析专用色谱柱(4.6×250 mm,5μm);流动相A为0.1 mol/L无水乙酸钠(pH 6.5)-乙腈(93∶7),B为乙腈-水(4∶1);流速0.8 mL/min,检测波长254 nm,柱温40℃进行梯度洗脱。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012 A版)”、SAS和SIMCA-13.0进行药材的相似度评价和聚类分析。结果建立了18批水蛭药材中游离氨基酸HPLC指纹图谱的共有模式,确定25个共有峰,并指认16种氨基酸成分;18批药材相似度均高于0.960;聚类分析与主成分分析结果一致,均将药材分为3类;含量测定结果表明不同批次的药材中氨基酸含量差异较大,水解氨基酸中含量最高的谷氨酸范围为7.26~18.36 mg/g,游离氨基酸含量最高的丙氨酸范围为1.43~4.39mg/g。结论建立了18批水蛭药材中游离类氨基酸的HPLC指纹图谱,同时测定了18批水蛭药材中游离和水解氨基酸的含量,该方法准确,重复性好,可全面反映水蛭药材的氨基酸信息,为该药材的质量控制提供一定的参考依据。     

柱前衍生HPLC法测定体外培育牛黄中主要胆汁酸类成分北大核心CSCD

目的:建立体外培育牛黄样品溶液柱前衍生化处理后使用HPLC-UV进行测定的方法。方法:2-溴-4′-硝基苯乙酮和18-冠醚-6作为衍生化反应试剂,采用Agilent Zorbax SB-C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以水为流动相A,甲醇为流动相B,梯度洗脱,流速1 mL·min^(-1),在263 nm波长处进行测定,柱温为30℃。结果:胆酸和去氧胆酸进样量分别在0.25~4.00和0.20~3.21μg范围内线性关系良好;回收率分别为95.13%和94.87%,RSD(n=6)分别为2.09%和3.15%。3批样品的胆酸含量分别为7.3%、8.4%、8.1%,去氧胆酸含量分别为4.9%、5.6%、5.4%。结论:该法经方法学验证,适用于体外培育牛黄中主要胆汁酸类成分的含量测定。     

欧盟草药专论现况及对中药在欧盟注册的影响

欧盟是传统植物药的重要市场,但是截至2016年,我国中成药只有两例在欧盟注册成功,中药在欧盟上市面临很多政策和技术壁垒,而植物药在欧盟注册的一个很重要的参考资料就是欧盟草药专论(Community Herbal Monograph,CHM)。本文就欧盟草药专论的数量、治疗领域、专论状态等进行分析,以期为我国中药企业注册提供帮助。     

中药肝毒性的物质基础与作用机制研究进展

近年来,中药引起的肝损伤报道时有发生,已成为临床上药物性肝损伤的重要病因之一。大多数中药的成分复杂,其产生疗效/毒性的物质基础与对应的临床症状和毒性作用及其机制不明确。目前中药肝毒性的研究策略简单地遵循传统毒理学的基本原则,导致中药毒性被夸大或错误的解释。对中药肝毒性物质基础分类及可能的毒性机制进行综述,旨在整理中药致肝损伤危险因素的分类、机制和靶点,以进一步指导中药的安全应用。根据中药所含成分的化学结构,中药中潜在的毒性成分可分为生物碱类、糖苷类、萜类和内酯类、蒽醌类。根据中药诱导肝损伤过程中药物代谢是否被激活或肝细胞是否受到直接攻击,高危物质可分为代谢激活型、非代谢激活型和混合型。此外,从脂肪代谢,细胞色素P450(CYP450)、线粒体功能、氧化损伤、细胞凋亡、内质网应激和特异质反应等角度总结了中药诱导肝毒性的潜在机制,并提出了毒性成分所涉及的靶点,主要包括代谢酶、核受体、转运体和信号通路。通过对中药诱导肝损伤(traditional Chinese medicine-induced liver injury,TILI)危险信号的回顾和总结,讨论了中药肝毒性研究中存在的问题,以期为中药肝毒性的研究提供新的视角,有助于对中药致肝毒性的多成分、多靶点、多效应特点进行综合分析,为肝脏毒性中药的毒性研究及临床合理应用提供重要的理论支持和科学建议。     

天然多糖的分离、纯化和结构鉴定

详细介绍了近年来天然多糖在分离、纯化和结构鉴定技术等方面的发展状况。     

有关中药注射剂指纹图谱起草复核的若干建议（摘要）

国家药品监督管理局为加强中药注射剂的质量管理,要求“中药注射剂应固定药材产地,建立药材和制剂的指纹……”,并正式发布了“中药注射剂指纹图谱研究的技术要求”(暂行)。现把有关中药注射剂指纹图谱起草复核的若干建议简述如下。     

HPLC 法测定短柱肖菝葜药材中丁香酸葡萄糖苷

目的 建立 HPLC 法测定短柱肖菝葜药材中丁香酸葡萄糖苷量的方法。方法 采用 C18色谱柱。乙腈-0.5% 冰醋酸溶液 (5∶95) 为流动相;体积流量 1 mL/min;柱温 25 ℃;检测波长 255 nm。结果 丁香酸葡萄糖苷在 0.049 4～0.592 8 μg 与峰面积积分值呈良好的线性关系。平均回收率为 100.07%;RSD 为 1.74%。结论 该法简便、准确,可作为短柱肖菝葜药材的定量测定方法。     

RRLC-DAD-ESI-MS~n分析生脉注射液化学成分

目的:采用高分离度快速液相色谱(RRLC)-DAD-ESI-MSn联用技术分析生脉注射液中化学成分。方法:采用Agi-lent Eclipse Plus C18(2.1 mm×50 mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱,254 nm、正离子模式检测木脂素类成分;203 nm、负离子模式检测皂苷类成分。结果:利用多级质谱信息,结合对照品对照和文献数据分析,初步确定了注射液中34个成分的结构。结论:RRLC-DAD-ESI-MSn联用技术对于中药注射液物质基础研究具有较好的应用价值。