基于蛋白质组学技术测定全蝎中β-肌动蛋白的含量

目的:通过蛋白质组学技术手段找到适用于药材全蝎含量测定的目标蛋白质及其特征肽段,用该特征肽段形成定量方法。方法:全蝎粉碎后经PBS缓冲溶液超声提取并过滤后,得到药材的蛋白质提取溶液。上述溶液经胰蛋白酶酶解后通过高分辨质谱进行分析,确定待测的目标蛋白质（β-肌动蛋白）和与之对应的特征肽段（IIAPPER）,并进行特征肽段及其同位素内标物（IIA*(13C3,15N)PPER）的合成。用得到特征肽段做对照品,同位素内标物做内标进行含量测定。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),流动相为0.1%甲酸溶液(V/V)-水和乙腈,梯度洗脱。质谱使用电喷雾离子源（ESI）正离子模式,采用多反应监测模式（MRM）进行信号采集。定量方法为内标法。结果:β-肌动蛋白的特征肽段在0.1~40 nmol/L浓度范围内线性良好,相关系数（r2）在0.999以上。方法检出限为0.04 mg/kg,定量限为0.13 mg/kg。加标回收率在87%～93%,重复性的RSD为5.2%,中间精密度的RSD为4.8%,供试品溶液在4 h内稳定。利用该方法对来自不同产地的37批次全蝎药材中的β-肌动蛋白进行含量测定,结果在4.66～100.26 mg/kg之间。结论:该方法灵敏度高,准确度较好和重复性较稳定,可以为全蝎药材药材的质量控制提供一种有效的手段。     

高速逆流色谱分离纯化紫苏叶中迷迭香酸

目的:建立高速逆流色谱分离纯化紫苏叶中迷迭香酸的方法。方法:采用高速逆流色谱分离纯化紫苏叶乙酸乙酯萃取部分中迷迭香酸,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-0.5%醋酸水溶液(2∶5∶2∶5)为溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,流速2.0 mL.min-1,主机转速800 r.min-1,温度25℃。结果:每0.20 g紫苏叶乙酸乙酯萃取物经1次纯化,纯度为98.6%的迷迭香酸的得率约13%。结论:高速逆流色谱可高效分离纯化紫苏叶中的迷迭香酸。     

HPLC法测定短柱肖菝葜中芒果苷

目的 建立HPLC法测定短柱肖菝葜药材中芒果苷的方法。方法采用C18色谱柱。乙腈-0．5％冰醋酸溶液（10：90）为流动相;体积流量1mL／min;柱温25C;检测波长316nm。结果芒果苷在6．26～50．08μg与峰面积积分值呈良好的线性关系。平均回收率为101．31％;RSI）为1．79％。绪论该法简便、准确,可作为短柱肖菝葜药材的测定方法。     

矿物药禹余粮微波消解/ICP-AES无机元素分析及综合评价

目的：测定不同产地禹余粮药材中无机元素的含量并进行综合分析评价。方法：采用微波消解/ICP-AES及主成分分析法对禹余粮药材所含元素进行分析和产地综合评价,同时对各元素进行相关性分析及无机元素指纹图谱分析。结果：检测的21种元素中,Fe、Al、Ca、K、Mg、Mn含量较高,重金属Hg、Pb、Cd、Cu均有检出,有害元素As、微量元素Se未检出。建立了含13种无机元素的特征指纹图谱,均数相似度（夹角余弦值）、中位数相似度（夹角余弦值）均大于0.90。元素相关性分析表明,14对元素显著正相关,2对元素显著负相关（P<0.01）,10对元素正相关,6对元素负相关（P<0.05）。主成分分析选择了5个因子,从无机元素的角度对禹余粮质量和产地进行了综合评价,结果表明江苏宿迁、建湖产禹余粮质量较好。结论：本研究为禹余粮药材的质量控制标准的制定提供了基础数据,并为矿物类药材的研究提供了研究方法和思路。     

冰黄肤乐软膏中24种机元素含量测定及重金属限量标准的建立

目的:测定冰黄肤乐软膏中无机元素的含量,提出重金属元素的限量标准,为冰黄肤乐软膏的质量标准的完善和中医临床用药安全提供参考。方法:通过采用微波消解-电感耦合等离子体质谱法对冰黄肤乐软膏的无机元素进行测定和分析。结果:建立了冰黄肤乐软膏中24种无机元素的含量测定方法,精密度、稳定性、重复性、加样回收实验结果均符合药典相关规定。结论:建立的冰黄肤乐软膏无机元素检测方法可行,为冰黄肤乐软膏的质量标准的完善和临床用药安全提供参考。     

珍珠层粉氨基酸指纹图谱的构建及氨基酸含量测定的研究

目的 建立中药珍珠层粉HPLC氨基酸指纹图谱,进行指纹图谱的模式识别研究,并测定珍珠层粉的氨基酸含量,为珍珠层粉质量评价提供依据;方法 采用Venusi1-AA 氨基酸分析柱（4.6 mm × 250 mm,5 μm,柱号：AA952505-0）,柱温：28℃,进样量。10 μL,波长：254 nm,流速：0.9 mL?min-1,以pH为6.5的醋酸钠水溶液为流动相A,以80%乙腈水溶液为流动相B。运用SAS和SPSS统计软件进行聚类分析和主成分分析,对珍珠层粉指纹图谱进行模式识别研究。结果 建立了珍珠层粉氨基酸指纹图谱,以及氨基酸指纹图谱的共有模式,检测出23个共有峰,并指认出其中15个共有峰相似度分析的结果与聚类分析和主成分分析保持一致,不同产地的珍珠层粉氨基酸成分差异不大,但不同基源的珍珠层粉氨基酸成分差异明显。本研究测定17个批次珍珠层粉中17种氨基酸（Asp天门冬氨酸、Glu谷氨酸、Ser丝氨酸、Gly甘氨酸、His组氨酸、Arg精氨酸、Thr苏氨酸、Ala丙氨酸、Pro脯氨酸、Tyr酪氨酸、Val缬氨酸、Met蛋氨酸、Cys胱氨酸、Ile异亮氨酸、Leu亮氨酸、Phe苯丙氨酸、Lys赖氨酸）的含量。结论 本研究建立的珍珠层粉氨基酸指纹图谱分析方法专属性强,及氨基酸含量测定方法简便易行、准确可靠,可对珍珠层粉的质量评价提供依据。     

高效液相色谱法测定三七中人参皂苷Rd的含量

目的:考察三七中人参皂苷Rd的含量,为该药材质量标准的修订提供依据。方法:应用高效液相色谱法,采用All-tech C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),乙腈-水(35:65)作为流动相,流速:1.0 mL·min~(-1),检测波长为203 nm,进样量10 μL。结果:方法学考察结果表明,人参皂苷Rd的范围为2.061～12.88 μg,加样回收率为98.23％(n=6);三七药材中的人参皂苷Rd的含量在0.36％～1.47％之间。结论:以高效液相色谱法测定三七中人参皂苷Rd含量的方法可行,人参皂苷Rd可以作为控制三七质量的一个指标成分。     

ICP-MS法分析参麦注射液中微量元素的含量

目的建立参麦注射液微量元素的测定方法,并根据测定结果分析其微量元素的分布情况。方法样品经微波消解后,利用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定参麦注射液中Be、B、A、lV、Cr、Mn、Fe、Co、N、iCu、Zn、As、Cd、Ba、Hg、Ti、Pb等17种微量元素的含量。结果有毒金属元素Cu、Cd、Hg、Pb含量均符合美国药品和功能性食品的标准,一些样品中As元素的含量高于上述的标准,但符合东南亚进口中成药标准要求;微量元素中B、A、lFe、Zn等元素含量相对较高。结论所建立的测定方法快捷、准确、灵敏度高,可以用于参麦注射液的微量元素的测定,同时也进一步了完善了参麦注射液无机元素分析,为其质量控制提供了参考依据。     

实时直接分析-串联质谱法快速分析乳香中多种乳香酸

目的 应用实时直接分析-串联质谱法（DART-MS/MS）在未经前处理和色谱分离的情况下快速鉴别乳香中乳香酸类成分。方法 使用全扫描采集乳香的DART-MS特征图谱,并对乳香酸类成分进行二级质谱确证。结果 药材和提取液的负模式全扫描质谱图中可见11-羰基-β-乙酰乳香酸（m/z 511）、11-羰基-β-乳香酸（m/z 469）、α及β-乳香酸（m/z 455）、α及β-乙酰乳香酸（m/z 497）等成分的 [M－H]^? 离子,正模式质谱图中可见11-羰基-β-乙酰乳香酸（m/z 513）和11-羰基-β-乳香酸（m/z 471）的 [M＋H]^＋ 离子,提取液中的正离子m/z 513和m/z 471的CID二级图谱分别与11-羰基-β-乙酰乳香酸和11-羰基-β-乳香酸对照品的一致。结论 本法简便、专属性强,为药材、饮片的快速鉴别提供了新思路,具有实用价值。     

鹿角胶中4个主要氨基酸的测定研究

目的:研究建立鹿角胶中L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸4个氨基酸的分析和测定方法。方法:样品以6 mol·L-1盐酸于沸水浴水解1 h,蒸干,甲醇溶解,以苯酚-0.5%硼砂溶液(4∶1)为展开剂,硅胶G为固定相,茚三酮试液为显色剂进行TLC分析。样品以6 mol·L-1盐酸于150℃水解1 h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析。采用Phenomenex C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温为43℃;流动相A为乙腈-0.1 mol·L-1醋酸钠(7∶93),流动相B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1;检测波长为254 nm进行HPLC测定分析。结果:TLC能较好地鉴别出鹿角胶中的L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸。HPLC测定L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸的线性范围分别为0.02～0.34μg(r=1.000),0.04～0.71μg(r=1.000),0.02～0.30μg(r=0.9998),0.02～0.37μg(r=1.000);加样回收率(n=6)分别为99.5%(RSD=2.3%),97.8%(RSD=1.6%),100.8%(RSD=1.6%),97.9%(RSD=2.4%)。结论:该方法准确、可靠,具有良好的重复性和稳定性,可用于鹿角胶中L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸的检测。