协同信号分子在DNA疫苗免疫中的作用

DNA疫苗接种后抗原提呈和T细胞活化所涉及的细胞和分子成分尚不清楚，协同信号分子在其中起重要的作用。采用共传递编码协同信号分子和编码特异抗原的基因，是一种有效的增强DNA疫苗免疫效果的方法。深入了解协同信号分子在DNA疫苗免疫中的作用，对揭示DNA疫苗作用机制和免疫佐剂增强免疫反应的作用机制有重要意义。     

携带sbr基因的农杆菌二元载体系统的构建及稳定性分析

利用转基因植物生产防龋疫苗 ,其中一个主要的步骤是如何将目的基因转入植物组织中。对于双子叶植物番茄来说 ,农杆菌为载体的基因转移法是最合适的 ,因此本实验构建含ｓｂｒ基因的农杆菌二元载体系统 ,并分析质粒在农杆菌中的稳定性 ,为下一步植物遗传转化奠定基础。1 .材料和方法 :将质粒ｐＴＰ[1 ]与植物表达载体ｐＲＯＫⅡ分别用ＢａｍＨⅠ、ＫｐｎⅠ消化 ,分离回收所需片段 ,用Ｔ4ＤＮＡ连接酶连接 ,4℃ 2 4ｈ。利用碱裂解法提取质粒并酶切电泳鉴定 ,获得重组植物表达质粒ｐＲＯＰ。用ＣａＣｌ2 法制备感受态的农杆菌ＬＢＡ440 4 ,冻融…     

融合防龋DNA疫苗pGLUA-P的构建及其细胞表达研究

目的 将变形链球菌（Streptococcus mutans)表面蛋白PAc编码A区和P区（A－P）的序列克隆到真核载体pGLU中，构建出GTF－PAc融合防龋DNA疫苗，并检测其在原核细胞和真核细胞中的表达。方法 将pCIA-P质粒中A－P片段序列与pGLU质粒连接，构建出GTF－PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA-P。将pGLUA-P转化大肠杆菌BL21（DE3），以SDS－PAGE电泳鉴定目的蛋白GLUA－P的表达。通过脂质体将pGLUA-P转染大鼠原代肌母细胞，以免疫组织化学检测GLUA－P的表达。结果 GTF－PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA-P经酶切分析证实携带GLU和A－P片段。pGLUA-P转化的大肠杆菌BL21（DE3）经IPTG诱导能够表达完整的融合蛋白。pGLUA-P转染的大鼠原代肌母细胞中可检测到融合蛋白的表达。结论 成功地构建了融合防龋DNA疫苗pGLUA-P，所携带的基因序列正确，能够在原核和真核细胞中表达正确的融合蛋白。     

鞘内注射阿霉素后离断三叉神经治疗带状疱疹后疼痛

目的观察阿霉素对三叉神经分布区带状疱疹后疼痛(PHN)的镇痛效果。方法对24患者用1%阿霉素直接注射至PHN相应分支的神经干,观察皮肤症状和异常性疼痛,于术后3d、7d、3个月进行评价。结果术后取得了95.8%的疗效,术后3d有效17例,缓解5例,无改善1例;术后7d有效23例,无效1例;术后3月有效23例,无效病例失访。有效病例在3～24个月内均无复发。结论阿霉素神经鞘内注射后,能有效的消除三叉神经分布区PHN,近期疗效较好。     

基因重组乳链球菌防龋疫苗免疫定菌鼠的实验研究

目的为了阐明基因重组乳链球菌防龋疫苗的免疫效能。方法采用携带有变形链球菌表面蛋白（PAc）结构基因pac的重组乳链球菌防龋疫苗HL107通过灌胃、皮下注射、粘膜下注射三种途径对50只定菌Sprague－Dawley大鼠进行免疫，并以酶联免疫吸附试验进行鼠血清和唾液中抗PAc－IgG、IgA测定。结果通过灌胃进行免疫接种HL107的大白鼠血清中抗PAc－IgG、IgA抗体滴度和唾液中抗PAc－IgA抗体滴度明显高于乳链球菌LM0230免疫组和空白免疫组（P＜0.01）。结论基因重组乳链球菌具有变形链球菌表面蛋白的免疫原性，能够刺激定菌鼠产生特异性免疫反应和免疫表达产物。     

医院工作人员接种新型冠状病毒疫苗效果分析

目的 评价医院工作人员接种灭活新型冠状病毒疫苗(简称新冠疫苗)的免疫效果.方法 选择2021年1月首都医科大学附属北京佑安医院的工作人员150人接受2次新冠疫苗注射,末次接种后2周抽取静脉血检测冠状病毒IgM和IgG,对IgG阴性者于末次接种后4周复查IgM和IgG.结果 146人末次接种后2周完成随访,男50人,女96人;年龄24～59岁,平均(41.1±7.9)岁.2周检测时,冠状病毒IgM为3.43(0.13,85.10)S/CO,IgG为(5.57±3.05)S/CO;123人(84.2％)IgM阳性,23人(15.8％)IgM阴性,137人(93.8％)IgG阳性,9人(6.2％)IgG阴性.青年组和中年组比较,男性组和女性组比较,IgM和IgG定量和定性检测结果的差异均无统计学意义(P＞0.05).IgG阴性者的IgM为[0.71 (0.13,5.53)S/CO],显著低于IgG阳性者的IgM水平[3.68(0.24,85.10)S/CO],差异有统计学意义(Z=-3.283,P=0.001).2周检测IgG阴性的9人中,7人复查,3人IgG转为阳性,4人IgG仍为阴性,IgG阴性4人中4周IgM较2周时有所下降,但IgM定性无变化.结论 灭活新冠疫苗在医院工作人员中近期免疫效果较好,其长期效果待进一步观察.     

变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗防龋动物实验:Keyes龋齿计分研究

目的 :了解变形链球菌基因疫苗 pcDNA3 pac和 pcDNA3 gtfB的免疫防龋效果。 方法 :2 8d龄Wistar大鼠 3 6只 ,随机分为pcDNA3 pac组 (A组 )、pcDNA3 gtfB组 (B组 )、pcDNA3 pac联合 pcDNA3 gtfB组 (C组 )、变形链球菌灭活全菌组 (D组 )、pcDNA3空载体组 (E组 )和PBS液组 (F组 )进行 3次双侧颌下腺腺周注射免疫。建立定菌鼠模型 ,诱龋 3个月 ,根据Keyes经典评分方法从龋损范围及深度进行龋损综合评估和比较。结果 :龋损牙面计分在 pcDNA3与PBS组最高 ,其次为单基因疫苗免疫组 ,联合免疫和灭活全菌细胞最低 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;窝沟龋各级计分 :E级龋在单基因疫苗组 ,联合疫苗组、灭活全菌细胞组无区别 (P >0 .0 5 ) ,而PBS组和 pcDNA3组则较低 (P <0 .0 1) ;Dm级、Ds级则是联合免疫组与灭活全菌细胞组最低 ,单基因疫苗免疫组较高而PBS和 pcDNA3组最高 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;Dx级四个免疫组发生率很低或不发生 ,显著低于PBS组和pcDNA3组 (P <0 .0 1)。结论 :重组质粒pcDNA3 gtfB和pcDNA3 pac具显著有效的免疫防龋作用 ,以联合基因疫苗免疫最好 ,是理想的防龋决策之一。     

牙龈卟啉单胞菌基因疫苗pcDNA3.1(+)/kgpcd免疫原性研究

目的:研究重组质粒pcDNA3. 1( ) /kgpcd免疫原性,并观察目的基因编码的蛋白在小鼠肌肉及颌下腺组织中的原位表达情况。方法:重组质粒pcDNA3. 1 ( ) /kgpcd经肌肉注射和颌下腺区注射免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA方法检测免疫后BALB/c小鼠血清中IgG和唾液中sIgA抗体水平;用免疫组织化学染色观察目的基因编码的蛋白在小鼠组织中的表达。结果:重组质粒经肌肉注射免疫可产生高水平的特异性血清IgG抗体,颌下腺区注射可同时诱导高水平的唾液中sIgA和血清中IgG抗体;骨骼肌、颌下腺导管内、腺泡腔内可见阳性着色。结论:重组质粒pcDNA3. 1( ) /kgpcd经颌下腺注射可同时诱导黏膜免疫和全身免疫应答,可作为有效免疫原,这为免疫牙周炎模型定菌鼠实验提供了依据。     

树突状细胞体外诱导淋巴细胞抑制舌癌细胞生长的实验研究

目的 :探讨树突状细胞 (dendriticcell,DC)通过淋巴细胞介导的免疫反应对舌癌细胞生长的影响。方法 :外周血单核细胞 ,在GM CSF IL 4的诱导下体外培养。其中一组加入TNF α ,另一组不加TNF α ;以不加任何细胞因子作为对照。用Tca8113细胞冻融抗原冲击后 ,加入自体淋巴细胞一起培养。再按 10 0∶1效靶比与Tca8113共培养 ,设未致敏淋巴细胞 Tca8113组 ,单独Tca8113组作对照。行形态学观察 ,免疫细胞化学检测DC的CD1a、CD83、HLA DR表达状况 ,MTT法检测Tca8113的存活率。结果进行统计学分析。结果 :( 1)加入TNF α组更高表达CD83 ,不加入TNF α组经肿瘤抗原刺激后 ,CD83表达急剧增加。 ( 2 )DC激活的淋巴细胞可显著抑制舌癌细胞的生长。结论 :GM CSF IL 4诱导的单核细胞来源的DC ,能体外摄取肿瘤抗原而进一步成熟 ,通过激活淋巴细胞抑制舌癌细胞生长 ;TNF α能促DC成熟 ,诱发更强的抑制作用。     

带状疱疹病人血清NSE、T细胞亚群、炎性细胞因子变化与疼痛的相关性研究

目的探讨带状疱疹病人血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）、T细胞亚群、炎性细胞因子变化与疼痛的相关性。方法将66例急性期带状疱疹病人设为观察组,根据视觉模拟评分法（VAS）分为轻度疼痛组、中度疼痛组、重度疼痛组。另选取同期健康体检者30名设为对照组。比较各组血清NSE、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平,静脉血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞比率及CD4+/CD8+比值。分析观察组以上各指标与VAS评分的相关性。结果观察组血清NSE、TNF-α、IL-6水平均明显高于对照组（P < 0.01）。轻度疼痛组、中度疼痛组、重度疼痛组间血清NSE、TNF-α、IL-6水平逐渐升高（P < 0.05）。观察组静脉血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞比率均明显低于对照组（P < 0.01）,CD4+/CD8+比值明显高于对照组（P < 0.01）。轻度疼痛组、中度疼痛组、重度疼痛组CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞比率及CD4+/CD8+比值间差异均有统计学意义（P < 0.01）。观察组病人VAS评分与血清NSE、TNF-α、IL-6水平均呈正相关关系（r=0.695、0.718、0.726,P < 0.05）,与CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞比率及CD4+/CD8+比值均呈负相关关系（r=-0.624、-0.674、-0.524、-0.445,P < 0.05）。结论带状疱疹病人存在免疫功能低下、炎症反应程度增加和一定程度的神经损伤情况,与疼痛的发生密切相关。