微小隐孢子虫在HCT-8细胞内的培养

目的将人回盲肠癌(HCT-8)细胞作为微小隐孢子虫IId亚型体外感染对象,观察虫体在细胞中的生长发育过程。方法将纯化的隐孢子虫IId亚型感染HCT-8细胞,通过Giemsa染色法观察微小隐孢子虫IId亚型在HCT-8细胞中发育过程,运用PCR方法对不同感染时间点的细胞样品DNA进行检测。结果在感染后72 h内,隐孢子虫出现连续发育阶段,包括脱囊、子孢子、滋养体、裂殖体、配子体、合子和卵囊;PCR的检测结果显示,在感染细胞96 h仍能检测到虫体DNA。结论通过HCT-8细胞,观察到微小隐孢子虫IId亚型的完整的生长发育过程,为抗隐孢子虫药物的筛选提供理论基础,亦可成为微小隐孢子虫IId亚型卵囊体外扩增的方法。     

家养野猪源EMCV VP1基因的原核表达及其间接ELISA方法的建立和应用

目的以原核表达的脑心肌炎病毒(EMCV)VP1蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA方法用来检测EMCV抗体。方法应用原核表达载体pET-28a构建家养野猪源EMCV VP1基因的重组表达质粒,并在感受态细胞BL21中表达,将该重组蛋白纯化后作为包被抗原,建立间接ELISA标准化检测程序,并应用于临床检测。结果经双酶切、PCR和测序鉴定,重组质粒pET-28a-VP1构建成功,转化后诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析得到高效表达的VP1蛋白,该重组蛋白可被EMCV阳性血清特异性识别,具有良好的反应原性;通过优化反应条件,确定抗原浓度为1.25 ug/mL、待检血清以1∶80倍稀释为最佳抗原包被浓度和待检血清最佳稀释度,5%脱脂乳作为封闭液,待检血清的最佳作用时间为37 ℃作用60 min,酶标抗体稀释度的最佳工作浓度和最佳作用时间分别为1∶8 000和37 ℃ 30 min,底物最佳显色时间为20 min,特异性强,敏感性较高,重复性良好;应用该间接ELISA方法分别检测河南省126个猪场送检的1 618份血清和527份PCV-2抗体阳性血清,发现阳性场检出率为65.87%,血清总阳性率为45.30%,不同规模和不同阶段猪群均存在EMCV感染,中小型猪场的阳性率显著高于规模化猪场,EMCV与猪圆环病毒2型的混合感染率高达75.14%。结论应用原核表达的重组VP1蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA方法可用于检测EMCV抗体水平,临床检测结果填补了河南省EMCV血清流行病学监测的空白。     

lmbr1基因剪接方式分析

目的：探讨lmbr1基因的剪接方式。方法：采用序列比对blast方法,结合基因常见的GU—AG剪切方式,对人和鼠c7orf2／lmbr1基因的内含子-外显子边界进行分析;将从GenBank筛选到的lmbr1 cDNA序列及其预测蛋白与其常见转录产物的序列及预测蛋白序列比较,进行lmbr1基因可变剪接的分析。结果：获得了lmbr1基因各个外显子的边界和大小,表明c7orf2／1mbrl基因有多种转录体,分别预测编码不同长度的蛋白质,其剪接方式包括转录起始位点的改变、外显子丢失、内含子驻留和polyA位点的改变等。结论：lmbr1有多种可变剪接方式,且在不同物种其同源基因有相似的转录产物。     

超声乳化人工晶状体植入联合小梁切除术治疗青光眼合并白内障的疗效观察

目的观察超声乳化人工晶状体植入联合小梁切除术治疗青光眼合并白内障的临床疗效。方法回顾性分析我院2005年6月至2009年12月青光眼合并白内障患者32例(32眼),均采用超声乳化人工晶状体植入联合小梁切除术治疗,观察患者术后1d、1周、1个月及6个月的眼压、视力情况,另外记录视野、滤过泡及并发症情况。结果患者术后1d、1周、1个月及6个月的平均眼压分别为(19.2±1.6)mmHg(1kPa=7.5mmHg)、(18.4±1.4)mmHg、(15.6±0.8)mmHg、(15.0±0.7)mm-Hg,与术前(23.2±1.1)mmHg比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。术前平均视力为0.12±0.08,术后1d、1周、1个月及6个月分别为0.26±0.09、0.28±0.09、0.32±0.12、0.45±0.18;术后视力较术前明显提高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。术前、术后平均视野缺损值与平均模式标准差值差异均无统计学意义(均为P>0.05)。术后形成功能型滤过泡22眼,非功能型10眼。术中出现晶状体后囊膜破裂2眼,均未出现玻璃体脱出等其他并发症。结论超声乳化人工晶状体植入联合小梁切除术治疗青光眼合并白内障既可降低眼压、改善视力,又能减少患者的经济负担,且成功率较高,并发症少。     

The paraoxonase L55M and Q192R gene polymorphisms and myocardial infarction in a Tunisian population

ObjectivesIn the present study, we examined a possible association between the PON1 Q192R and L55M polymorphisms and myocardial infarction (MI) in a sample of the Tunisian population.Design and methodsThree hundred and ten patients with MI and 375 controls were recruited. Paraoxonase gene polymorphisms at codon 192 and 55 were analyzed by PCR-RFLP.ResultsGenotype distributions and allele frequencies of L55M were similar among the control and MI groups. For the Q192R polymorphism patients with MI had significantly higher frequency of the RR genotype compared to controls [17.1% vs. 10.9%; OR (95% CI), 1.93 (1.24–3.02); p = 0.004]. The MI patient group showed a significantly higher frequency of the R allele compared to the controls [38% vs. 30%; χ² = 10.74, p = 0.001]. The association between the PON1 Q192R polymorphism and MI remained significant after adjustment for other well-established cardiovascular risk factors.ConclusionsThe present study showed a significant and independent association between the PON1 Q192R polymorphism (presence of R allele) and MI in the Tunisian population.     

南阳市城区青少年网络成瘾倾向状况及相关因素分析

目的了解南阳市城区青少年网络成瘾倾向状况及其影响因素,为预防和干预提供依据。方法采取分层整群抽样的方法,应用“中国青少年健康相关行为调查问卷”,对南阳市城区13所学校3637名大中学生进行匿名问卷调查。结果南阳市青少年的总上网率为85．9％,男生上网率为87．6％,女生为83．8％;网络成瘾倾向报告率为7．34％,男生（10．72％）明显高于女生（3．49％）;网络成瘾报告率2．39％,男生（3．59％）明显高于女生（0．92％）;网络成瘾倾向检出率在不同性别、学校类型、学习成绩、上网时间、个体是否经常有负性情绪等方面差异有统计学意义。通过logistic多因素分析,学习成绩好为保护性因素,而负性心理特征、自杀意念、上网时间≥4h／d、男性为危险因素。结论网络成瘾是多种因素综合作用的结果,青少年作为高危人群,必须引起社会、家庭、学校等高度重视,采取有针对性的综合干预措施,减少网络的不良影响,使其合理正确的利用网络资源。     

瞬稳静态注射化学发光法测定农产品中甲胺磷残留量

目的建立测定农产品中甲胺磷残留量的新方法。方法本实验以鲁米诺-铁氰化钾体系对有机农药-甲胺磷进行化学发光分析,并找出最佳实验条件。测定农产品中甲胺磷残留量,并与高效液相色谱法比较,进行实际分析。结果静态注射化学发光法选用2.4×10-4mol/L的Luminol溶液,用量为2.00 mL,待测液的用量为2.00 mL。获得最理想发光曲线的仪器工作条件是-375V负高压、40 s发光时间。干扰实验表明保持甲胺磷浓度为0.05 mg/L,干扰允许值为±5%时,1 000倍的C1-、SO42-、NO3-、Ca2+,Mg2+、Fe3+等离子对测定没有干扰。2种方法测得样品的甲胺磷含量没有统计学意义。结论静态注射化学发光法简化了测试方法,缩短了时间。加标回收率为92.5%～104.3%,RSD<5%(n=5),为甲胺磷的检测提供实验依据。     

64层螺旋CT曲面重组技术对胆管梗阻的诊断价值

目的：研究胆管梗阻64层螺旋CT曲面重组（CPR）技术的操作方法、临床应用价值及其局限性。方法：搜集本院2008年7月～2009年3月阻塞性黄疸患者资料47例,全部采用GE公司Light Speed64层螺旋CT行上腹部平扫及四期增强扫描,后将其0.625mm薄层扫描轴位源像（ASI）传到工作站进行后处理,行扩张胆管曲面重建成像,作任意曲面以清晰显示梗阻部位及梗阻上段胆管的扩张情况,对胆管梗阻原因进行定位和定性诊断,并与手术所见及术后病理结果进行对比。结果：10例肝外胆管结石患者,术前64层螺旋CT曲面重组（CPR）技术定位、定性诊断准确率达到94%及87%。37例胆管、胰头肿瘤或先天性疾病患者（25例为肝门部、肝外胆管癌或胆管炎症,3例为壶腹部癌,胰头癌8例,先天性胆总管囊肿1例）中,36例准确定位,32例得到正确诊断,术前64层螺旋CTCPR定位、定性诊断准确率分别达到97%及86%。结论：64层螺旋CT曲面重建技术（CPR）能直观显示胆管病变,对诊断胆管梗阻具有重要价值。     

大活络丸加减治疗股骨头坏死痰瘀阻络证的疗效及安全性

目的:探讨大活络丸加减治疗早中期股骨头坏死(ONFH)痰瘀阻络证的疗效及安全性。方法:将180例(317髋)患者随机分为中药组、西药组和中西药组,各60例。分别给予大活络丸加减,双氯芬酸钠,大活络丸加减联合双氯芬酸钠治疗,疗程均为6个月,随访6个月。观察各组患者治疗前后髋关节功能评分量表(harris hip joint function scale,Harris),影像学指标量表和中医证候积分;检测血清白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)的变化;比较各组有效率、随访6个月复发率和安全性指标。结果:研究期间中药组脱落3例,5髋;西药组脱落5例,8髋;中西药组脱落4例,7髋。中西药组总有效率高于中药组和西药组(P0.05);中西药组Harris,影像学指标和中医证候积分,血清IL-1β,TNF-α,SOD和CRP含量改善优于中药组和西药组(P0.05),中药组与西药组比较无明显差异。有效患者随访复发率比较中西药组中药组西药组(P0.05)。安全性比较西药组中西药组中药组(P0.05)。结论:大活络丸加减治疗ONFH痰瘀阻络证的疗效与双氯芬酸钠无明显差异,说明其具有有效性,且安全性评价优于双氯芬酸钠;大活络丸加减联合双氯芬酸钠治疗ONFH痰瘀阻络证具有协同增效的作用,且可降低双氯芬酸钠的不良反应。     

疏肝利胆汤加减联合熊去氧胆酸治疗早、中期原发性胆汁性肝硬化的临床观察

目的:观察疏肝利胆汤加减联合熊去氧胆酸治疗湿滞血瘀证早、中期原发性胆汁性肝硬化的疗效及安全性。方法:将171例符合条件的患者随机分为中药组、西药组和中西药组,各57例。分别给予疏肝利胆汤加减、熊去氧胆酸、疏肝利胆汤加减联合熊去氧胆酸,疗程均为48周。观察各组用药前及用药24,48周临床症状、肝功能、肝纤维化、免疫学指标的变化;比较各组完全反应率和安全性指标。结果:治疗第24,48周中西药组完全反应率均高于同期中药组和西药组(P0.05);治疗第48周中西药组临床症状,肝纤维化,肝功能,免疫球蛋白G(IgG),免疫球蛋白M(IgM),免疫球蛋白A(IgA),抗线粒体抗体(AMA)改善明显优于中药组和西药组(P0.05);不良反应和血、尿常规异常发生率中药组中西药组西药组(P0.05)。结论:中药疏肝利胆汤加减治疗早、中期原发性胆汁性肝硬化的完全反应率与西药熊去氧胆酸无明显差异,说明其具有有效性,且安全性评价优于熊去氧胆酸;疏肝利胆汤加减联合熊去氧胆酸治疗早、中期原发性胆汁性肝硬化湿滞血瘀证具有协同增效的作用,在一定程度上可以逆转肝脏的病理改变,疗效优于单用疏肝利胆汤加减和熊去氧胆酸。