改良墨汁灌注法与von Willebrandfactor免疫荧光法在大鼠视网膜微血管形态显示中的对比研究

目的:比较改良墨汁灌注法与von Willebrand factor(vWf)免疫荧光法在大鼠视网膜微血管形态显示方面的异同.方法:成年健康SD大鼠随机分成vWf免疫荧光显色组和改良墨汁灌注组.改良墨汁灌注组分两步灌注明胶墨汁40 ml.vWf免疫荧光显色组常规灌注生理盐水40 ml.视网膜行铺片和切片,观察vWf免疫荧光法和改良的墨汁灌注法显示的微血管形态;两组视网膜切片还进行NeuN、Parvalbumin和GFAP的免疫组织化学显色.结果:vWf免疫荧光法能充分显示视网膜铺片周嗣部的微血管,但对铺片中央部和切片的微血管显示不良;改良墨汁灌注法能充分显示大鼠视网膜铺片和切片的微血管,用此方法灌注的视网膜切片的NeuN、Parvalbumin和GFAP免疫组织化学效果均与正常视网膜相似.结论:改良墨汁灌注法在大鼠视网膜微血管形态显示中优于vWf免疫荧光法,且能在同一切片上准确显示血管与神经元/胶质细胞的空间关系.     

脑源性神经营养因子对急性高眼压后大鼠视网膜Mueller细胞的影响

目的：检测脑源性神经营养因子（BDNF）干预急性高眼压后大鼠视网膜Mueller细胞谷氨酰胺合成酶（GS）和谷氨酸／天冬氨酸转运体（GLAST）表达的变化，探讨BDNF保护节细胞（RGCs）的可能机制。方法：成年大鼠分为3个BDNF干预组和3个溶媒对照组并进行玻璃体内注射。2d后将预处理动物左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压且维持缺血60min。实验动物分别存活1、3或7d后通过免疫组织化学检测大鼠视网膜GS和GLAST的表达变化。结果：与正常对照组比较，溶媒对照组GS和GLAST在存活1d和3d时表达上调，7d时下降；BDNF干预组未出现表达明显变化。结论：BDNF可能不是通过Mueller细胞上调GS和GLAST，降低胞外Glu来保护RGCs。     

视网膜的干细胞移植（基础）

青光眼及老年性黄斑病变等是以视网膜神经元大量死亡为病理特征的不可逆性致盲眼病。通过移植干细胞细胞，使其整合入视网膜各层并透导其增殖分化为目标细胞，使其整合入视网膜各层并诱导其增殖分化为目标细胞，补充缺失的视网膜神经元，重建视网膜功能，将给不可逆性致盲眼病患者带来希望。     

Inhibition of calpain on oxygen glucose deprivation-induced RGC-5 necroptosis

The purpose of this study was to investigate the effect of inhibition of calpain on retinal ganglion cell-5 (RGC-5) necroptosis following oxygen glucose deprivation (OGD). RGC-5 cells were cultured in Dulbecco’s-modified essential medium and necroptosis was induced by 8-h OGD. PI staining and flow cytometry were performed to detect RGC-5 necrosis. The calpain expression was detected by Western blotting and immunofluorescence staining. The calpain activity was tested by activity detection kit. Flow cytometry was used to detect the effect of calpain on RGC-5 necroptosis following OGD with or without N-acetyl-leucyl-leucyl-norleucinal (ALLN) pre-treatment. Western blot was used to detect the protein level of truncated apoptosis inducing factor (tAIF) in RGC-5 cells following OGD. The results showed that there was an up-regulation of the calpain expression and activity following OGD. Upon adding ALLN, the calpain activity was inhibited and tAIF was reduced following OGD along with the decreased number of RGC-5 necroptosis. In conclusion, calpain was involved in OGD-induced RGC-5 necroptosis with the increased expression of its downstream molecule tAIF.     

proBDNF对培养的海马神经元存活的影响及其机制

目的:初步探讨proBDNF(precursor of brain-derived neurotrophic factor)对海马神经元的可能作用及其机制.方法:采用体外培养胚鼠海马神经元,并给予proBDNF,preBDNF(propeptide of proBDNF)和抗proBDNF血清处理;30 min,1 h和48 h后行尼氏染色,ELK-p(Ets domain protein),ErK2(extracellular signal regulated kinase)和c-fos免疫细胞化学染色.结果:给予proBDNF处理后,可见培养细胞内ELK-p,ErK2和c-fos表达明显上调,部分细胞核深染;而用抗血清中和内源性proBDNF后,ELK-p、ErK2和c-fos均下调,且细胞出现肿胀、空泡样变化.preBDNF处理组细胞与正常对照组类似.结论:proBDNF可维持海马神经元的存活,其机制可能与激活ErK和ELK信号通路有关.     

急性高眼压后大鼠视网膜突触囊泡素的表达变化

目的 研究急性高眼压后大鼠视网膜突触囊泡素(synaptophysin, SYN)的表达变化.方法 SD大鼠左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失并维持60 min,右眼为正常对照,动物存活1、3、7、14、21 d后处死,冰冻切片行SYN免疫组织化学及原位杂交检测.结果 正常情况下SYN蛋白分布于视网膜内、外网层,外网层染色较深,急性高眼压后SYN阳性产物除外网层分布外,还出现于外核层的内侧部分,存活7 d时,阳性产物在外网层及外核层的分布范围最宽,至14 d时又恢复至与正常相似的分布模式.SYN mRNA阳性产物主要分布存在于内核层与节细胞层的神经元胞体,急性高眼压后1、3、7 d时内核层SYN mRNA阳性细胞数逐渐增多,均高于正常水平,14 d时又恢复至正常水平.结论 急性高眼压后大鼠视网膜SYN的表达先增强后减弱,且出现空间分布的改变,提示急性高眼压损伤后视网膜内突触溃变前可能存在突触功能增强的时期.     

生物电阻抗早期监测乳腺癌术后上肢淋巴水肿的敏感性与特异性研究

目的:研究生物电阻抗监测相对于主观症状体征问卷调查对乳腺癌术后上肢淋巴水肿早期诊断的敏感性与特异性。方法:筛选2016年10月—2017年3月在复旦大学附属华山医院静安分院确诊为乳腺癌并行根治术,符合研究标准的患者。给予受试者主观症状体征问卷调查、生物电阻抗分析设备(bioimpedance spectroscopy,BIS)监测和定点臂围测量,并记录其在术后2周及术后6个月的BIS监测结果及问卷调查、定点臂围测量结果。以患者的健侧与患侧臂围差值作为标准,计算BIS相对于主观症状体征问卷调查对上肢淋巴水肿诊断的敏感性和特异性。结果:以患者的健侧与患侧臂围差值作为参考标准,对88例病例进行分析后,主观症状体征问卷调查诊断的敏感性为94.4%,特异性为96.1%;BIS监测淋巴水肿的敏感度为97.2%,特异性为80.8%。结果显示BIS监测相对于症状体征评定,诊断淋巴水肿敏感性高,特异性差(P0.05)。结论:BIS监测相对于主观症状体征问卷调查,更易诊断淋巴水肿及发现隐匿性淋巴水肿。     

条件恐惧刺激对大鼠杏仁核区神经细胞增殖的影响

目的 探讨条件恐惧性刺激对大鼠杏仁核区神经细胞增殖的影响,分析杏仁核区新生神经细胞与恐惧记忆的关系.方法 72只实验大鼠按随机数字表法分成条件恐惧刺激组和对照组,每组36只,条件恐惧刺激前3d动物腹腔内注射BrdU标记新生神经细胞,条件恐惧刺激组大鼠采用单调声配对足底电击造成条件恐惧刺激模型,对照组大鼠仅给予单调声刺激.条件恐惧刺激后1、7、14、21、30、60d行动物行为学检测,后处死动物行BrdU的免疫组织化学染色.结果 条件恐惧刺激后各时间点条件恐惧刺激组大鼠静止不动时间均明显高于相应时间点的对照组(P＜0.01),且条件恐惧刺激组动物杏仁核区BrdU免疫阳性细胞数明显少于同时间点的对照组(P＜0.05).结论 条件恐惧刺激对大鼠杏仁核 区新生神经细胞增殖产生负向影响,这可能与大鼠恐惧记忆的长期保持有关.     

长学制神经生物学的教学体会（摘要）

神经科学处于生命科学发展的前沿,作为一门快速发展的新兴学科,神经生物学在联系临床实践和科研前沿方面的优势逐步体现.我校长学制学生主要为七年制及八年制临床医学学生,在第四至五学年期间接受神经生物学的教学.因长学制学生在进入医学课程体系学习以前,已有扎实的细胞生物学、生物化学与分子生物学等基础.