猪细小病毒单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备猪细小病毒(PPV)杂交瘤细胞株,并对其分泌的PPV单克隆抗体进行鉴定。方法按常规方法制备并获得2株杂交瘤细胞。用染色体分析对杂交瘤细胞进行鉴定,用间接ELISA、免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)和间接免疫荧光试验(IFA)对其分泌的单克隆抗体进行效价测定、亚型鉴定和特异性鉴定。结果得到2株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株2H9、1F9,染色体数目介于90～110之间。细胞上清效价均达1∶1×104,腹水效价均达1∶1×107,其亚型分别为IgG1、IgM,均为kappa链。2H9、1F9单抗与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒I型(PCV-1)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)、乙脑病毒(JEV)等均无交叉反应。IPMA和IFA检测结果显示2H9、1F9单抗均能与接种于PK-15细胞的PPV发生特异性反应。结论成功制备了2株抗PPV杂交瘤细胞株,证实其产生的单克隆抗体具有良好的特异性和敏感性。     

猪瘟病毒E2基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达

目的利用昆虫细胞/杆状病毒系统表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,用于E2蛋白功能、开发CSF新型疫苗以及建立相关血清学诊断方法等研究。方法采用RT-PCR扩增CSFV E2基因,将PCR产物克隆到pGEM-T-Easy载体,将该基因插入到pFast-BacHT A载体中,构建重组转座载体后转化DH10Bac感受态细胞,获得重组Bacmid质粒后转染sf9昆虫细胞,传毒3代,对表达蛋白进行Western-blot及免疫组化鉴定。结果成功克隆CSFVE2基因,其核苷酸序列为1119 bp。SDS-PAGE电泳结果显示表达E2蛋白相对分子质量约为43×103,Western-blot和免疫组化结果证实表达蛋白能够被CSFV标准阳性血清识别。结论在Bac-to-Bac杆状病毒系统中的成功表达了CSFV E2蛋白,与CSFV标准阳性血清具有较好的反应性。     

兔胸水渗出病

兔胸水渗出病是由胸水渗出病毒(PleuralEffusion Disease Virus,PEDV)引起的兔的一种间发性疾病,可引起兔的亚临床感染或致死性感染。发生与分布本病的发生与梅毒螺旋体在兔体内传代有关。早在1950年代,人们通过兔睾丸连续接种传代的方法保持梅毒螺旋体的毒力。1960年     

我国人与犬、猫共患病防控存在的主要问题与对策建议

随着社会经济的发展、城市化进程的加速及人们生活水平的不断提高,越来越多的宠物走进了人们的家庭,在人类社会生活中发挥了积极作用.但同时,宠物也是人兽共患病的重要传染源和传播媒介.与人类关系最为密切的犬、猫在人兽共患病的防控中具有重要的意义.在已报道的200多种主要的人兽共患病中,与宠物犬、猫有直接或间接关系的有70余种.随着宠物犬猫数量的大幅攀升和宠物业的飞速发展,我国人与犬猫共患病可能会出现逐步高发的趋势,疫病防控工作面临着许多问题.为了完善宠物管理制度,建立有效的防疫监督体系,对人与犬猫共患病实行有效的防控,本文就完善法律法规、形成综合管理机制,加强卫生监督、强化无害化处理、培养专业人才以及广泛开展宣传教育等6个方面提出了相关建议.     

人工驯养条件下食蟹猴B病毒抗体水平变化规律研究

目的研究人工驯养条件下食蟹猴B病毒抗体水平变化规律，便于有效控制自繁食蟹猴的BV感染率。方法随机选取409只对不同月龄自繁食蟹猴，采用BVELISA法进行BV抗体监测。结果新生仔猴刚出生时均携带不同程度的BV抗体，但随着月龄的增加，BV抗体水平开始下降，至5月龄时BV抗体阳性率降至最低（12．3％），之后BV抗体水平逐渐升高。结论人工驯养条件下食蟹猴B病毒抗体水平呈由高到低再升高的趋势，5月龄时断奶可最大限度地获得BV抗体阴性猴。     

清洁级实验动物细菌学检测用主要培养基的筛选

目的 为解决实验动物细菌检测用培养基标准化的问题,选择目前国内几个比较大的培养基生产厂家和一个国外知名培养基生产厂家的DHL、SS、营养琼脂3种培养基,利用已知标准菌株进行对比、优选,从而形成标准产品,最终确定适合于实验动物细菌检测用的培养基。方法 用标准沙门菌、嗜肺巴斯德杆菌、鼠棒状杆菌对培养基进行定性(生长实验)和定量(平板菌落计数实验)筛选。结果 6个厂家的3种培养基除SS琼脂有差异外,其余均无显著差异,Merck公司的血琼脂上嗜肺巴斯德杆菌未能生长。结论 在实际检测应用中Merck公司的血琼脂不能选用。而Merck公司和中国药品生物制品检定所生产的SS琼脂对细菌有较强的抑制能力,在实际检测中有可能造成漏检,也不宜选用;而对其他产品均可选用。     

B病毒抗原片在猕猴B病毒抗体检测中的应用

目的 建立8病毒玻片免疫酶法（BVEIA）。方法 与HSV－1玻片免疫酶法（HSV－1 EIA）及美国生产的B病毒DIA dot（BV DIA dot)试剂盒进行比较。结果 BV EIA法的阳性检出率比HSV－1 EIA法提高18．10％，比BV DIA dot法提高7．90％，达到国外同类产品的水平。结论 建议在临床上推广应用B病毒抗原片。     

猕猴SPF种群的建立及保持过程中B病毒抗体监测研究

目的 建立适合SPF猕猴种群建立与保持所需的B病毒抗体监测模式。方法 采用BV EIA及BVELISA等方法对本中心自繁自育仔猴从断奶开始进行BV感染情况跟踪。结果 从自繁自育猴中随机挑选218只断奶食蟹猴，92只断奶猕猴，经过近两年反复筛选得到25只SPF食蟹猴，9只SPF猕猴，此结果经美国BioReliatnce公司检测得到确认。结论 该模式能有效监测猕猴BV抗体变化，为本中心在国内建立猕猴SPF种群提供了有力的技术保障。     

犬细小病毒单克隆抗体在治疗上的应用研究

用犬细小病毒单克隆抗体对287例患细小病毒性肠炎病上进行治疗，结果治愈279只，(治愈率达97．21%)，显著高于其他治疗方法的治疗效果。治疗机理主要是对体内病毒的中和作用和促进机体的主动免疫反应。此次研究可为动物乃至人类病毒性疾病的临床治疗开辟一条新的途径。     

O型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达

目的口蹄疫病毒的VP1蛋白是诱导中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达VP1基因,为建立O型口蹄疫抗体血清学诊断方法奠定基础.方法将O型口蹄疫病毒VP1基因插入pFastBacHIa载体,构建重组质粒pFast BacHIa-VP1.将该重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,VP1基因与Bacmid发生特异性位点转座.经PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到病毒基因组多角体蛋白基因启动子下游,提取阳性质粒转染Sf9昆虫细胞.结果 SDS-PAGE电泳和Western blot检测结果表明VP1基因成功地在Sf9昆虫细胞中进行了表达,蛋白分子量为26.4kDa.结论 VP1基因在Bac-to-Bac系统中的成功表达为口蹄疫病毒VP1蛋白的抗原性、免疫原性以及免疫抗体水平检测研究奠定了基础.