2010—2013年国家自然科学基金中药药理学科项目申请与资助情况分析

介绍国家自然科学基金委员会医学科学部成立以来（2010~2013年）中药药理学分支学科面上项目、青年科学基金以及地区科学基金项目的申请和资助情况,并对中药药理学基础研究的新特点、新趋势以及出现的新问题进行归纳和分析,旨在为中药药理学研究人员提供参考。     

复盆调经颗粒的制备工艺研究

目的:筛选并优化复盆调经颗粒的制备工艺。方法:通过药效学实验比较和确定提取纯化工艺路线,正交设计优化制备工艺条件。结果:水提醇沉提取物的主要药效学作用与传统水提工艺提取物比较无显著差异,但能显著增强缩宫素引起的离体大鼠子宫平滑肌的作用(P<0.01);能显著增加未成年雌性小鼠阴道开放例数(P<0.01),能显著增加去卵巢小鼠的子宫重量百分率(P<0.01),能显著增加PMSG处理后小鼠的排卵数(P<0.01);通过正交试验优化确定的水提醇沉工艺条件为:药材加10倍量水提取2次,每次1h,合并滤液减压浓缩至相对密度为1.10(55℃),加乙醇使药液含醇量达75%,静置24h,浓缩干燥。结论:水提醇沉工艺能除去杂质,减小复盆调经颗粒的服用剂量,并保证了原处方的疗效;优化得到的工艺简单合理、稳定可行。     

裸花紫珠提取物的抗乳腺癌转移作用及其机制

目的:研究裸花紫珠乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extracts from Callicarpa nudiflora,ECN)的抗乳腺癌转移作用及其作用机制。方法:采用尾静脉注射肿瘤细胞法建立裸鼠实验性肺转移模型,24 h后将实验动物随机分为空白组,ECN低、中、高剂量组(0.125,0.25,0.5 g·kg-1),空白组给予等量溶剂,每日ig给药1次,连续8周。给药结束后,采用巢式PCR法检测裸鼠肺组织中人细胞角蛋白19(CK19)基因的表达,以确定肿瘤细胞的肺转移程度(n=10)。建立肿瘤细胞体外迁移、侵袭模型,以100,200 mg·L-1ECN以及10 nmol·L-1BB-94(阳性对照)处理MDA-MB-231细胞14 h(n=4),观察ECN对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的体外迁移、侵袭的影响;建立肿瘤细胞体外黏附模型,以100,200 mg·L-1ECN以及10 nmol·L-1BB-94处理MDA-MB-231细胞60 min(n=3),观察ECN对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的体外黏附能力的影响;采用Western blot法,检测MDA-MB-231细胞分别经100,200 mg·L-1ECN处理24 h后p-锌指转录因子(p-Snail)和上皮性钙黏附蛋白(Ecadherin)的表达情况。结果:体内研究表明,ECN可显著降低裸鼠肺组织中人CK19 mRNA的表达(P0.01);体外迁移实验发现,ECN 100,200 mg·L-1组的迁移细胞数与空白组相比显著减少(P0.01);体外侵袭实验显示,ECN低、高剂量组的侵袭细胞数与空白组相比显著减少(P0.01);体外黏附实验表明,ECN可干扰肿瘤细胞与细胞外基质蛋白之间的黏附(P0.01);Western blot实验结果表明,ECN可显著抑制p-Snail,并增加E-cadherin的表达。结论:ECN具有明显的抗乳腺癌转移作用。抑制细胞内p-Snail的活化可能是抗转移作用的机制之一。     

罗布麻定时脉冲片中5种酚酸及黄酮类成分的含量测定

 目的 建立高效液相色谱法测定罗布麻定时脉冲片中5种酚酸及黄酮类成分含量的方法。方法 采用Hypersil C₁₈（4.6 mm×200 mm）色谱柱,乙腈-10 mmol·L-1醋酸铵缓冲液（pH 4,醋酸调节）为流动相,洗脱程序：0 min, 10% 乙腈;8 min, 15%乙腈;16 min, 17%乙腈;40 min, 38% 乙腈。流速1.0 mL·min-1。检测波长为256 nm。结果 2种酚酸及3种黄酮成分的峰面积与浓度的线性关系良好 (r>0.999 0) ;加样回收率为（94.3±1.80）%~（102.4±2.89）%。结论 该方法简单、准确,重现性较好 , 可用于罗布麻定时脉冲片内在质量的控制和评价。     

丹参注射液抑制血小板诱导的乳腺癌细胞体外转移作用

目的 观察丹参注射液对血小板（PLT）诱导的乳腺癌细胞体外转移作用。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法观察丹参注射液对MDA-MB-231细胞体外生长的影响;采用Oris^TM体外迁移试剂盒检测丹参注射液（终质量浓度分别为4、8、16 g·L^-1）对PLT（1.5×10¹⁰个/L）诱导的乳腺癌细胞体外迁移的影响;采用Transwell小室法检测丹参注射液对PLT诱导的细胞侵袭的影响;采用细胞免疫荧光法和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测丹参注射液对PLT诱导的上皮间质转化（EMT）关键性转录因子Slug、Snail蛋白表达的影响;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测丹参注射液（终质量浓度为4、8、16、32、64 g·L^-1）对转化生长因子-β₁（TGF-β₁）分泌的影响;采用Western blot观察丹参注射液对PLT诱导MDA-MB-231细胞Podoplain（PDPN）蛋白表达的影响。结果 与空白组比较,丹参注射液组（32、64 g·L^-1）细胞的吸光度A₅₇₀均明显降低（P<0.05,P<0.01）;丹参注射液组（4、8、16 g·L^-1）A₅₇₀差异无统计学意义。与空白组比较,PLT组迁移、侵袭细胞数明显增加,丹参注射液各组则可明显抑制PLT诱导的细胞迁移和侵袭。与空白组比较,PLT组细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达明显降低,丹参注射液可明显逆转PLT的这一作用。与空白组比较,PLT组Slug、Snail蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,丹参注射液则明显逆转PLT诱导的Snail蛋白表达（P<0.05,P<0.01）;PLT组TGF-β₁含量显著升高（P<0.01）,丹参注射液组（16、32、64 g·L^-1）可明显降低PLT诱导的TGF-β₁分泌（P<0.05,P<0.01）,其余丹参注射液组对TGF-β₁分泌无明显影响;PLT组细胞PDPN蛋白表达显著升高（P<0.01）,丹参注射液可显著抑制PLT诱导的PDPN表达升高（P<0.01）。结论 丹参注射液可抑制PLT诱导的乳腺癌细胞的迁移、侵袭和EMT作用,其机制可能是通过下调乳腺癌细胞PDPN表达、干扰PLT与肿瘤细胞之间直接作用与PLT分泌TGF-β₁作用无关。     

左归丸抗乳腺癌破骨性骨转移机制探讨

目的:研究左归丸的抗乳腺癌破骨性骨转移作用,并探讨其机制。方法:采用左心室注射人乳腺癌MDA-MB~(-2)31细胞法建立裸鼠乳腺癌实验性骨转移模型,实验分为空白组、左归丸(21,42 g·kg~(~(-1)))组,采用巢式PCR特异性扩增裸鼠骨髓中人细胞角蛋白(CK19),确定肿瘤细胞在骨髓组织中的转移情况。体外分离小鼠破骨细胞前体细胞小鼠骨髓巨噬细胞(BMMs),外源性加入核转录因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体(sRANKL),模拟肿瘤条件下破骨细胞活化,观察左归丸对破骨细胞活化、组织蛋白酶K(Cathepsin K)分泌以及骨片吸收的影响。采用免疫印迹法(Western blot)检测破骨细胞前体细胞NF-κB受体活化因子(RANK)表达的影响。结果:与空白组比较,左归丸(21,42 g·kg~(~(-1)))组均可显著抑制乳腺癌骨转移动物骨髓组织中人CK19表达的影响(P0.01)。体外血清药理学研究表明,左归丸含药血清可显著抑制BMMs分化为具有多细胞核的破骨细胞(P0.05),同时可明显抑制破骨细胞分泌Cathepsin K(P0.05)。10%左归丸含药血清组的骨片吸收窝的数量和面积明显低于正常大鼠血清组(P0.05)。Western blot实验结果表明,左归丸含药血清可明显抑制RANK蛋白表达(P0.05)。结论:左归丸具有明显的抗乳腺癌破骨性骨转移作用,RANKL/RANK系统活性可能是其作用机制之一。     

蚊母草提取物通过抑制Runx2活性抗乳腺癌破骨性骨转移作用

目的 研究蚊母草提取物（EVP）的抗乳腺癌破骨性骨转移作用。方法 采用左心室注射肿瘤细胞法建立裸鼠骨转移模型,通过巢式聚合酶链式反应（PCR）检测裸鼠骨髓组织中人细胞角蛋白-19（Ck-19）基因表达量确定肿瘤细胞的骨转移程度及EVP的抑制作用;采用多核细胞计数法及组织蛋白酶K（Cathepsin K）分泌量检测法,确定小鼠破骨细胞前体骨髓巨噬细胞（BMMs）的活性,并观察EVP（40、80、160 g·L^-1）的抑制作用;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）观察EVP对BMMs细胞内核转录因子-κB受体活化因子（RANK）、Runt相关转录因子2（Runx2）、磷酸化Runx2（p-Runx2）及其下游蛋白基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响;采用明胶酶谱法检测EVP对基质金属蛋白酶（MMPs）水解明胶活性的影响。结果 与空白组比较,裸鼠给予EVP 5.5、11、22 g·kg^-1,其骨髓组织中人Ck-19水平明显降低（P<0.05）,提示EVP具有抗骨转移作用;体外实验显示,与空白组比较,可溶性核转录因子-κB受体活化因子配基（sRANKL）可诱导BMMs分化为多核细胞（P<0.05）,EVP（40、80、160 g·L^-1）可显著抑制上述sRANKL诱导的多核细胞形成（P<0.01）。与空白组比较,sRANKL可显著增加BMMs的Cathepsin K分泌（P<0.01）;与sRANKL组比较,EVP组Cathepsin K分泌量明显下调（P<0.05）。Western blot显示,与空白组比较,sRANKL可显著增加BMMs细胞RANK表达（P<0.01）;与sRANKL组比较,EVP组（40、160 g·L^-1）BMMs细胞表达RANK蛋白明显降低（P<0.05）。与空白组比较,sRANKL可明显增加BMMs细胞p-Runx2和MMP-9表达（P<0.05）;与sRANKL组比较,EVP组（40、160 g·L^-1）BMMs细胞表达的p-Runx2和MMP-9蛋白明显降低（P<0.05）。明胶酶谱显示,与空白组比较,sRANKL可明显增加pro-MMP-9、pro-MMP-2及64 kDa MMP-2水平（P<0.05）;与sRANKL组比较,EVP组pro-MMP-9、64 kDa MMP-2水平明显降低（P<0.05）,且160 g·L^-1EVP处理可明显降低pro-MMP-2水平（P<0.05）。结论 蚊母草提取物可抑制肿瘤细胞诱导的破骨性骨转移,抑制骨形成相关转录因子Runx2活化,进而干扰RANK/RANKL信号转导从而抑制破骨细胞活化可能是其作用机制之一。     

裸花紫珠提取物促血小板活化作用及其机制

目的:研究裸花紫珠Callicarpa nudiflora提取物对血小板活化的影响,并探讨其作用机制。方法:雄性SD大鼠50只,随机分为空白组,云南白药组(0.930 g·kg-1),裸花紫珠提取物低、中、高剂量(0.131,0.263,0.525 g·kg~(-1))组,连续给药10 d。给药结束后分别提取各组动物血小板,采用微量版法测定二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)诱导的血小板聚集率;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血小板中血栓素(thromboxane B2,TXB2),5-羟色胺(5-serotonin,5-HT)含量。采用ELISA法检测血小板中环磷酸腺苷(cyclic adenosine 5'-monophosphate,c AMP)的释放量。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测裸花紫珠提取物对血小板中磷酸化-磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinases,p-PI3K)蛋白表达的影响。结果:给药后,裸花紫珠提取物可明显增强ADP诱导的血小板聚集反应(P0.05),可明显促进血小板释放TXB2和5-HT(P0.05)。另外,裸花紫珠提取物低、高剂量组血小板c AMP含量分别为(3.074±0.538),(3.340±0.265)nmol·L~(-1),较空白组(3.795±0.586)nmol·L~(-1)明显降低(P0.05),裸花紫珠提取物中剂量组血小板中c AMP为(3.003±0.242)nmol·L-1,较空白组有显著提高(P0.01)。裸花紫珠提取物可显著提高p-PI3K激酶蛋白表达量(P0.01)。结论:裸花紫珠提取物可显著上调ADP诱导的血小板活化,其机制可能与其显著增强血小板ADP受体(P2Y12)所介导的信号转导有关。     

甲鱼复合肽对肿瘤放疗的辅助作用研究

目的:研究甲鱼复合肽对肿瘤放疗的辅助作用。方法:采用人体胃癌细胞株BGC-823细胞皮下移植的方法,建立裸鼠移植瘤模型,从钴源放射治疗的抗肿瘤作用、荷瘤动物化疗后的总体生存状况、化疗药物所致白细胞减少以及骨髓抑制等方面,考察甲鱼复合肽对放疗的辅助作用。结果:甲鱼复合肽对放射治疗的抗肿瘤作用没有明显影响,与钴源单独照射组相比,甲鱼复合肽与钴源照射联合治疗组动物的瘤块体积和重量无统计学差异(P>0.05)。甲鱼复合肽可显著减轻钴源照射的毒副作用。与钴源单独照射组相比,甲鱼复合肽高(20.8g/kg)、中(10.4g/kg)剂量组动物体重显著增加(P<0.01);甲鱼复合肽还可改善钴源照射所致的骨髓抑制,其骨髓有核细胞DNA含量显著增加(P<0.01),但甲鱼复合肽对放疗裸鼠的外周血白细胞数无显著影响(P>0.05)。另外,甲鱼复合肽还可显著改善荷瘤动物经大剂量放射治疗后的生存率,动物的平均存活时间和存活率均显著提高(P<0.05)。结论:甲鱼复合肽对放射治疗的抗肿瘤作用没有明显的促进作用,但可以减轻放射治疗的毒副作用。